Перечень условных обозначений (сокращений) 4
Введение 5
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Характеристика инфекций дыхательных путей 7
1.2. Род Moraxella 10
1.3. Род Pseudomonas 13
1.4. Род Haemophilus 15
1.5. Род Streptococcus 17
1.6. Род Listeria 21
1.7. Род Klebsiella 23
Глава II. Материалы и методы исследований
2.1. Объекты исследований 26
2.2. Выделение ДНК 26
2.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 29
2.4. Электрофорез ДНК 31
Глава III. Результаты исследования и их обсуждение
3.1. Детекция Hemophilus influenzae в клиническом материале методом ПЦР— 36
3.2. Детекция Moraxella catarrhalis в клиническом материале
методом ПЦР 37
3.3. Детекция Pseudomonas aeruginosa в клиническом материале
методом ПЦР 38
3.4. Детекция Streptococcus pneumoniae в клиническом материале
методом ПЦР 39
3.5. Детекция Streptococcus pyogenes в клиническом материале
методом ПЦР 40
3.6. Детекция Listeria monocytogenes в клиническом материале
методом ПЦР 41
3.7. Детекция Klebsiella pneumonia в клиническом материале
методом ПЦР 42
3.8. Анализ полученных результатов 43
Выводы 46
Список литературы 47
Приложение 52
Актуальность проблемы. Инфекции дыхательных путей - это острые инфекционные заболевания, возникающие вследствие попадания инфекционных агентов с помощью аэрогенного механизма заражения, поражающими отделы дыхательной системы как первично, так и вторично, сопровождающиеся воспалительными явлениями и характерными клиническими симптомами. Инфекционные заболевания органов дыхания - одна из актуальных проблем современного здравоохранения является наиболее частой причиной обращения за медицинской помощью в РФ и во всем мире.
Спектр этиологически значимых агентов при инфекционных поражениях дыхательных путей чрезвычайно широк. Ведущая роль относится к таким возбудителям, как: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Ligionella pneumophila, микобактерии, вирусы гриппа типа А и В, респираторные вирусные инфекции, к редким возбудителям относятся Moraxella catarrhalis и Pseudomonas aeruginosa. Однако, не исключается, что истинная частота встречаемости и видовой состав пневмопатогенов может существенно отличаться от приведенных литературных данных, поскольку для лабораторного их выявления и идентификации используются методы, информативность которых в зависимости от вида бактерий, исследуемого материала, фазы заболевания и т.д., может варьировать в очень широких пределах, что и предопределило цель нашего исследования.
Цель исследования. Оценка частоты встречаемости Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pyogenes при различных формах патологии органов дыхательной системы человека молекулярно-генетическим методом.
Задачи исследования:
1. Сбор клинического материала (мокроты) у больных с различными формами легочной патологии.
2. Выделение ДНК из собранного материала
3. ПЦР исследование образцов на наличие ДНК пневматогенов.
4. Статистическая обработка полученных результатов.
Научная новизна: дана оценка частоты встречаемости Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pyogenes при различных формах легочной патологии человека, а именно при бронхите, бронхиальной астме, хронической обструктивной болезни легких, внебольничной пневмонии.
Практическая значимость:
Оценка частоты встречаемости дает информацию о распространенности пневмопатогенов, их роли в развитии заболеваний дыхательных путей и их этиологической значимости в развитии осложнений легочных патологий. Полученные данные могут быть использованы при санитарно-эпидемиологическом мониторинге и анализе частоты встречаемости.
1. Расчет достоверности различий частоты обнаружения видоспецифических фрагментов ДНК (ген 16S рРНК) Moraxella catarrhalis, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumonia, Listeria monocytogenes, Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes, Hemophilus influenzae при различных формах патологии органов дыхательной системы показал, что при ПЦР исследовании фрагменты ДНК Streptococcus pneumonia обнаруживались в большем проценте в образцах пациентов, чем фрагменты ДНК остальных исследуемых пневмопатогенов.
2. В мокроте больных, где была детектирована два и более пневмопатогенов, заболевание характеризовалось более тяжелым клиническим течением.
