Тема: Количественная оценка содержания пародонтопатогенов в очагах поражения до и после лечения для оценки эффективности терапии в стоматологии

Актуальность проблемы
Воспалительные заболевания пародонта представляют серьезную проблему в современной стоматологии в связи с большой распространенностью среди взрослого населения, наличием клинических форм, приводящих к разрушению зубочелюстной системы и потере зубов, сложностью диагностики, недостаточной эффективностью лечения и частотой возникновения рецидивов заболевания [Безрукова И.В. с соавт., 2002; Барер Г.М. с соавт., 2006; Соловьева A.M. с соавт., 2006]. По данным ВОЗ у лиц в возрасте 15-19 лет пародонтит регистрируется в 55-89% случаев, в возрасте 35-44 лет и в старших возрастных группах заболеваемость пародонтитом регистрируется уже в 65-98%. [Давыдова Т.Р. с соавт., 2001; Грудянов А. И. с соавт., 2010; Луцкая И. К., 2010].
Согласно современным представлениям, возникновение и прогрессирование воспалительных заболеваний пародонта связывают с влиянием микроорганизмов, обладающих факторами агрессии к тканям пародонтального комплекса [Грудянов А.И. с соавт., 2009; Thiha K. Et al., 2007; Corraini P. et al., 2012]. Резкое увеличение количества резидентной микрофлоры при неудовлетворительной гигиене или появление в составе микрофлоры полости рта пародонтопатогенных микроорганизмов, обладающих повышенными адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами, приводит к деструктивным изменениям всего комплекса поддерживающих структур зуба. Известно, что наиболее часто встречающимися являются пародонтопатогенные виды бактерий Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tanerella forsythensis, Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum и Treponema denticola. Развиваясь в суббиотопах полости рта, условно-патогенные и патогенные бактерий, образуют отдельный микробиоценоз (зубную бляшку), способствующий разрушению зубодесневого аппарата и резорбции альвеолярной кости. [Simonson L.G. et al. 1992; Haffajee A.D. et al., 1994; Maiden M.F. et al., 2003; Царев В.Н. с соавт., 2004; Чепуркова
O. А. с соавт., 2007].
Количество идентифицированных в настоящее время на поверхности зубов и слизистой оболочке рта видов бактерий, находящихся в динамическом равновесии и образующих микробиоценоз, превышает 700. [Tong K.Z. et al., 2003; Aas. J.A. et al., 2005; Wara-Aswapati N. et al., 2007; Queiroz-Junior C.M. et al., 2009]. Более половины представителей микробиоты полости рта не поддаются культивированию, поэтому данные о количественных соотношениях бактерий в настоящее время практически отсутствуют. Во многом последнее обусловлено недостаточной информативностью применяемых на современном этапе методов (микроскопических, бактериологических и др.), не позволяющих выявлять весь спектр анаэробных, микроаэрофильных и некультивируемых бактерий. Такая диагностика пародонтита в настоящее время ограничивается констатацией очага уже необратимой инфекционной деструкции ткани. В этой связи представляется целесообразным использование молекулярно-генетических методов, не требующих выделения чистой культуры.
В практической стоматологии комплексное лечение воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта чаще всего осуществляют с применением антибактериальных средств. Однако, длительное, бесконтрольное их применение приводит к многочисленным осложнениям: лекарственной толерантности, ослаблению лечебного
эффекта, дисбактериозу полости рта и желудочно-кишечного тракта и т.д. Основные лечебные мероприятия направлены на купирование воспалительного процесса в пародонте, предупреждение распространения процесса вглубь, восстановление анатомической структуры пародонта, достижение стабильной ремиссии. [Григорьян А.С. с соавт., 2009; Ламонт
P. Дж. с соавт., 2010; Недосеко В.Б. с соавт., 2010; Gamboa F. Et al., 2013].
Следовательно, вопросы диагностики, профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта остаются актуальными. Успех лечения напрямую зависит от своевременной диагностики, комплексного подхода к лечению, адекватного консервативного и хирургического лечения.
Современные молекулярно-генетические методы исследования открывают широкие возможности для ранней диагностики, оценки и прогнозирования лечения пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта. [Янушевич О.О. с соавт., 2010; Зорина О.А. с соавт., 2011; Иванюшко Т.П. с соавт., 2011; Eke P.I., 2011]. Ранняя и точная диагностика может позволить в будущем уменьшить распространение пародонтита и прогрессию его течения.
Цель исследования
Молекулярно-генетическое исследование состава и количественного содержания пародонтопатогенных микроорганизмов в ротовой полости пациентов для оценки эффективности лечения пародонтита.
Задачи исследования
1. Сбор клинического материала из пародонтальных карманов и слюны больных хроническим генерализованным пародонтитом средней и тяжелой степени тяжести.
2. Выделение бактериальной ДНК из собранного клинического материала.
3. ПЦР-анализ образцов ДНК, выделенных из клинических образцов больных пародонтитом на наличие участков генов 16S рРНК Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Streptococcus oralis, Streptococcus sanguis и Streptococcus sobrinus.
4. Количественный анализ методом ПЦР в режиме реального времени содержания участков генов 16S рРНК Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Streptococcus oralis, Streptococcus sanguis и Streptococcus sobrinus в положительных клинических образцах больных пародонтитом до и после лечения.
Практическая значимость
Сконструирован калибровочный образец pAL-TAStrSob16S (7,08х1011 копий ДНК/мл) для количественного определения содержания пародонтопатогенных бактерий Porphyromonas gingivalis,
Treponema denticola, Streptococcus oralis, Streptococcus sanguis,
Streptococcus sobrinus в выравненных по объему клинических образцах с помощью метода ПЦР в режиме реального времени.
Область применения результатов исследования
Идентификация основных возбудителей пародонтита методом ПЦР и количественная оценка эффективности терапии методом ПЦР в режиме реального времени может стать основой при ранней диагностики, постановки диагноза, мониторинга и прогнозирования течения воспалительных заболеваний пародонта.
Купить

1. Установлено, что у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом средней и тяжелой степени тяжести в содержимом пародонтальных карманов преобладают пародонтопатогенные виды - Streptococcus sobrinus (6,4*108 копий ДНК/мл) и Porphyromonas gingivalis (7,5*107 копий ДНК/мл). В образцах слюны у больных достоверно чаще обнаруживаются пародонтопатогены - Streptococcus sobrinus (3,6*108 копий ДНК/мл) и Treponema denticola (1,3*107 копий ДНК/мл).
2. Обнаружение пародонтопатогена Streptococcus sobrinus методом ПЦР в содержимом пародонтальных карманов значимо как в монокультуре, так и в ассоциации Streptococcus mutans - Streptococcus oralis - Streptococcus sanguis - Streptococcus sobrinus. Соответственно выявление данного пародонтопатогена в содержимом пародонтальных карманов и/или в слюне у больных хроническим генерализованым пародонтитом имеет диагностическое значение.
3. Пародонтопатогенные микроорганизмы Streptococcus oralis, Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis и Streptococcus sobrinus наиболее чаще образуют микробные ассоциации: Streptococcus mutans - Streptococcus oralis - Streptococcus sanguis - Streptococcus sobrinus (34%), Streptococcus mutans - Streptococcus sanguis - Streptococcus oralis (34%) в содержимом пародонтальных карманов и Streptococcus mutans - Streptococcus oralis (61%) в слюне.
4. Комбинированное лечение, включающее Vector-терапию и
курс антибиотиков характеризуется наибольшей эффективностью, регрессией воспалительных реакций в тканях пародонта, улучшением клинического течения пародонтита, увеличением ремиссии, а также снижением общей бактериальной обсемененности тканей пародонтопатогенами Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola и представителями условно-патогенной микрофлоры полости рта Streptococcus oralis, Streptococcus sanguis, Streptococcus sobrinus.

Купить