ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Нормальная микрофлора влагалища 7
1.2. Бактериальный вагиноз. 9
1.3. Микрофлора влагалища при БВ 10
1.4. Диагностика БВ 17
1.4.1 Критерии R. Amsel, 1983 17
1.4.2 Классификация Кира Е.Ф., 1995 19
1.4.3 Классификация Мавзютова А.Р., 1998 20
1.4.4 Бактериологический анализ. 22
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 23
2.1 Анамнез и взятие материала 23
2.2 Бактериоскопическое исследование (микроскопия)
микрофлоры влагалища 25
2.3 Выделение ДНК 27
2.4 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме
реального времени 29
2.5 Методы статистической обработки 33
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 34
3.1 Результаты бактериоскопического исследования. Определение со¬
стояния микрофлоры влагалища и степени БВ 34
3.2 Анализ полученных результатов 37
ВЫВОДЫ 48
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 49
ПРИЛОЖЕНИЕ 56
Актуальность проблемы
Бактериальный вагиноз (БВ) занимает ведущее место в структуре гинекологической патологии у женщин репродуктивного возраста. На сегодняшний день существует несколько методов диагностики этого состояния полового тракта женщины, в то же время нет их единой интерпретации. Эталоном имеющихся классификаций данного состояния женщины являются критерии R. Amsel, которые включают клинические проявления и результаты лабораторных исследований, информативность которых существенно разнится и недостаточна для получения диагностически значимых (в том числе для определения терапевтической тактики) данных о видовом составе микробиоты. Однако, все клинические проявления есть результат изменения микрофлоры влагалища у женщин. Вагинальная микрофлора в норме представлена четырьмя доминирующими типами лактобактерий: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri и L. iners. Важно, что L. iners нельзя признать однозначно полезной — она хорошо приспосабливается даже к условиям баквагиноза. Вместе с тем на репродуктивное здоровье женщины могут влиять БВ-ассоциированные бактерии: Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp.
Для ранней диагностики данного состояния самым перспективным является метод ПЦР в режиме реального времени. Этот метод отличается высокой чувствительностью, возможностью идентифицировать специфические фрагменты ДНК выявляемых микроорганизмов в клиническом материале без выделения чистой культуры. Огромным преимуществом является то, что появляется возможность оценить не только качественный, но и количественный состав микробиоты влагалища.
Цель исследования
Разработка тест-системы для диагностики бактериального вагиноза методом ПЦР в режиме реального времени.
Задачи исследования
1. Сбор клинического материала от пациенток с различными симптомами, характерными для проявления бактериального вагиноза, бактерио- скопическое исследование и дифференцировка БВ по степени тяжести.
2. ПЦР-исследование клинического материала в режиме реального времени на клинических образцах с лабораторно подтвержденным диагнозом БВ.
3. Анализ, полученных в ходе исследования данных, их статистическая обработка. Выявление взаимосвязи между БВ ассоциированными микроорганизмами, различными штаммами лактобактерий с клиническими проявлениями бактериального вагиноза.
4. Конструирование тест-системы для ПЦР в режиме реального времени. Оценка возможности ее использования для этиологической диагностики степени БВ.
Научная новизна.
Сконструирована тест-система для быстрой и точной диагностики бактериального вагиноза. Изучена взаимосвязь между различными штаммами лактобактерий, БВ-ассоциированными микроорганизмами и клиническими проявлениями данного состояния женщины. Оценка состава микрофлоры влагалища при БВ является важным шагом для понимания динамики и функционирования экосистем. Изучение того, как различные виды бактерий взаимодействуют при БВ, поможет осветить патофизиологию этого общего, плохо изученного синдрома.
Практическая значимость
Результаты исследований могут быть использованы для этиологической расшифровки бактериального вагиноза методом ПЦР в режиме реального времени. Разработаны и внедрены в практическое здравоохранение новые диагностические подходы, основанные на более широком применении ПЦР в режиме реального времени. Предложенный вариант оценки этиологической структуры дисбиоза влагалища и степени его выраженности позволяет оптимизировать и индивидуализировать лечение и способствует решению одной из важнейших медико-социальных проблем — диагностики заболеваний репродуктивных путей женщин на ранних стадиях. Результаты проделанной работы могут быть применимы в медицине, в практическом здравоохранении, в лабораторной диагностике для оценки качественного и количественного состояния микробиоты влагалища женщины.
1) Создана молекулярно-генетическая мультиплексная тест-система, обеспечивающая мультиплексную детекцию Atopobium vaginae, Lep- totrichia amnionii, Sneathia sanguinegens, Eggerthella spp., L. crispatus, L. gasseri, L. jensenii и L. iners в клиническом материале.
2) Установлено, что преобладание в клиническом материале L. crispatus, L. gasseri, L. jensenii соответствует нормоценозу влагалища.
3) Показано, что преобладание L. iners соответствует промежуточному типу микробиоценоза влагалища, описываемому как «Lactobacillus ниже нормы» и требует проведения профилактики БВ.
4) Выявлено, что Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. характеризуются высокой частотой обнаружения при бактериальном вагинозе (75-98%). Это свидетельствует о диагностическом значении их выявления. Единичные случаи обнаружения БВ-ассоциированных микроорганизмов при нор- моценозе и промежуточном типе могут указывать на развитие рецидива БВ.
5) Подтверждено, что доминирование Atopobium vaginae, Leptotrichia amnionii, Sneathia sanguinegens и Eggerthella spp. в клиническом материале соответствует состоянию бактериальный вагиноз.
