Перечень условных обозначений (сокращений) 4
ВВЕДЕНИЕ 5
Актуальность проблемы 5
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1. Роль энтеробактерий в развитии гнойно-воспалительной и раневой
патологии 8
1.2. Классификация гнойно-воспалительных инфекций. Этиология,
патогенез и клиника 10
1.3. Общая характеристика энтеробактерий и их
свойства 14
1.3.1. Род Escherichia 17
1.3.2. Род Proteus 19
1.3.3. Род Klebsiella 20
1.4. Методы идентификации энтеробактерий 22
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 24
2.2. Выделение бактериальной ДНК 24
2.3. Подбор олигонуклеотидных праймеров 25
2.4. Амплификация участков ДНК геномов микроорганизмов методом
полимеразной цепной реакции 27
2.5. Электрофоретический анализ ДНК в агарозном геле 29
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 31
3.1. Испытание разработанных тест-систем для ПЦР-идентификации
условно-патогенных Enterobacteriaceae 31
3.2. Анализ представленности уропатогенных Enterobacteriaceae в
исследуемом клиническом материале 40
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 46
ВЫВОДЫ 47
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 48
Актуальность проблемы
С гнойными инфекциями человечество знакомо с давних времен и ведет с ней войну уже почти 2,5 тысячи лет. Гнойно-воспалительные заболевания представляют тяжелую нерешенную проблему для медицины.
Гнойные инфекции поражают всевозможные ткани и органы, имеют различный характер, вызываются гноеродной флорой и сопровождаются воспалительной реакцией с образованием гнойного экссудата. Чаще всего эти заболевания поражают людей с ослабленными защитными свойствами организма, часто являются вторичными инфекциями, возникающими в условиях стационара, которые называются госпитальными инфекциями. Уровень заболеваемости госпитальными инфекциями колеблется в пределах от 5 до 500 на 10000 госпитализированных.
Гнойные процессы сопровождаются развитием инфильтратов, флегмон, абсцессов, воспалений в различных полостях, в суставах, костях и.т.п. Инфекции кожи и мягких тканей - служит наиболее частой причиной обращения пациентов в медицинские учреждения за хирургической помощью. В США ИКМТ становятся поводом около 330 000 госпитализаций в год [2]. По оценкам исследователей, каждый год в РФ гнойная инфекция мягких тканей поражает более 700 тысяч госпитализированных [1]. Течение гнойно-воспалительных заболваний колеблется от легких местных поражений до тяжелой генерализованной инфекции. По характеру протекания ГВЗ определяют острую и хроническую инфекцию, она имеет локальный или общий характер[6, 9].
Раневые инфекции - инфекционные процессы, развивающиеся в ранах в результате проникновения в них патогенных микроорганизмов. Развитие инфекционного процесса провоцирует ослабление защитных реакций организма, массы дозы заражения и степени способности инфекционного агента заражать данный организм. Раневые инфекции часто имеют гнойный характер и являются отдельным случаем ГВИ, подчиняясь тем же закономерностям. Инфекции осложняют течение раневого процесса, препятствуют регенерации ран первичным натяжением, нередко сопровождаются тяжелой интоксикацией с травматическим истощением организма, генерализацией инфекции с развитием сепсиса, что может привести к летальному исходу. Возбудители гнойно¬воспалительных, септических и раневых инфекций [9].
В настоящее время важно учитывать значительные изменения в структуре возбудителей воспалительных гнойных процессов, в частности тот факт, что на первое место выдвинулась проблема условно патогенных микроорганизмов, среди которых возрастает значение условно-патогенных энтеробактерий. Наиболее частыми при этом обнаруживаются Escherichaia coli, Proteus vulgaris, и некоторые другие. Для своевременной коррекции подходов к лечению необходим непрерывный мониторинг эпидемической ситуации, в частности в стационарах. При определении таксонономического положения патогенных и условно-патогенных бактерий большое значение имеет разработка ускоренных и наиболее доступных способов изучения характеризующих их свойств. Так как своевременно поставленный этиологический диагноз—это не только снижение стоимости лабораторного исследования, но и вовремя назначенная целенаправленная терапия, уменьшение внутрибольничных инфекций, снижение продолжительности пребывания больного в стационаре. В связи с этим представляется перспективным применение полимеразной цепной реакции [10, 11, 27, 28, 30,].
Объектом исследования были образцы клинического материала (гной), выделенные от 56 больных, страдающими гнойно -
воспалительными инфекциями и раневой патологии.
Исходя из актуальности и практической значимости проблемы
изучения гноеродных энтеробактерий целью работы являлась
молекулярно - генетическая характеристика видового состава микробиоты при различных гнойно-воспалительных заболеваний и оценка роли в этом процессе условно - патогенных энтеробактерий.
Для достижения цели работы были сформулированы следующие задачи:
1. Сбор коллекции клинических образцов у больных с гнойно-воспалительной и раневой патологией.
2. Выделение тотальной ДНК из клинических образцов.
3. Подбор и синтез праймеров, обеспечивающих видовую идентификацию энтеробактерий различных видов.
4. Подбор оптимальных условий для ПЦР.
5. Определение видового состава энтеробактерий в клинических образцах при помощи метода ПЦР.
В ходе выполнения данной работы, нами были собраны клинические образцы, выделенные от 56 больных, страдающими гнойно- воспалительной и раневой патологией. Далее с помощью молекулярно - генетического метода, а именно ПЦР все клинические образцы были исследованы на присутствие в них ДНК Enterobacteriaceae: E. coli, E. cloacae, K. pneumoniae., P. mirabilis., M. morganii, H. alvei., Citrobacter spp.
В ходе выполнения данной работы, нами были подобраны олигонуклеотидные праймеры к уникальным участкам ДНК для идентификации ряда микроорганизмов, вызывающих гнойные инфекции.
В результате анализа клинических материалов наиболее часто обнаруживались E. coli, E. cloacae, K. pneumoniae. По данным исследователей при гнойно-воспалительных заболеваниях наиболее часто выделяются именно эти микроорганизмы, что совпадает с результатами наших исследований. Следовательно, их можно отнести к наиболее часто выделяемым энтеробактериям, при гнойно-воспалительной и раневой патологии. [1]
