Перечень условных обозначений (сокращений) 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Роль энтеробактерий в развитии инфекций мочевыводящих путей 7
1.2. Классификация ИМП. Этиология, патогенез и клиника 12
1.3. Общая характеристика энтеробактерий и их уропатогенные свойства 21
1.3.1. Род Escherichia 22
1.3.2. Род Proteus 24
1.3.3. Род Klebsiella 25
1.4. Диагностика инфекций, вызванных уропатогенными энтеробактериями 28
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 32
2.1. Выделение бактериальной ДНК 32
2.2. Подбор олигонуклеотидных праймеров 33
2.3. Амплификация участков ДНК геномов микроорганизмов методом полимеразной цепной реакции 34
2.4. Электрофоретический анализ ДНК в агарозном геле 37
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 39
3.1. Идентификация энтеробактерий молекулярно - генетическими методами 39
3.2. Анализ представленности уропатогенных Enterobacteriaceae в исследуемом клиническом материале 48
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 54
ВЫВОДЫ 55
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 56
Бактериальные инфекции являются наиболее частыми заболеваниями человека на протяжении всей его жизни. В течение тысячелетий инфекции были основной причиной смерти. К бактериальным инфекциям принадлежат и инфекции мочевыводящих путей (ИМП). Среди всех заболеваний мочевыводящих путей инфекционно - воспалительные болезни занимают первое место и имеют высокий удельный вес (60-70%), как среди городского, так и сельского населения [Кузнецова О.П., 1996; Скрябин Г. Н., 2006].
В различных регионах земного шара на ИМП приходится 2 - 6% обращений к семейным врачам. В общей структуре заболеваемости населения Российской Федерации, болезни мочеполовой системы к концу 90-х годов составили 7 - 10%, то есть прирост урологической заболеваемости составил почти 50% [Лопаткин Н.А., 2004].
Ежегодно инфекции мочевыводящих путей (ИМП) поражают около 150 миллионов человек в мире. Одной из наиболее частых причин урогенитальной патологии являются условно - патогенные микроорганизмы из семейства Enterobacteriaceae [Нисевич Н.И., 1995].
Мочеполовая система не является оптимальной для большинства микроорганизмов ввиду непостоянства рН, осмотического давления , ограниченного набора питательных веществ и других неблагоприятных факторов. Тем не менее, уропатогенные микробы успешно выживают в неблагоприятных условиях мочевыводящих путей. Кроме того, продолжительность антимикробной терапии при ИМП способствует возникновению микробных штаммов с повышенной лекарственной резистентностью [Farmer J.J., 1985; Гребельная Н.В., 2004].
ИМП, вызванные условно - патогенными энтеробактериями, остаются актуальной проблемой, поскольку эти инфекции характеризуются широким распространением, тяжестью течения, повышением лекарственной резистентности возбудителей, изменением этиологической структуры и степени вирулентности указанных энтеробактерий. Невзирая на клиническую важность уропатогенных энтеробактерий, эти микроорганизмы недостаточно изучены на сегодня. Одной из причин этого являются методические сложности с выделением и характеристикой уропатогенных микроорганизмов. В связи с этим, определённую научную перспективу могут иметь молекулярно¬генетические методы, в том числе типирование микроорганизмов и получение новых эпидемиологических данных [Foxman B. В., 2002; Chan J.F., 2015].
Объектом исследования были образцы клинического материала (моча), выделенные от 94 больных, страдающими мочекаменной болезнью и инфекциями мочевыводящих путей.
Исходя из актуальности и практической значимости проблемы изучения уропатогенных энтеробактерий целью работы являлась молекулярно - генетическая характеристика видового состава микробиоты при различных инфекционных заболеваниях мочевыводящих путей и оценка роли в этом процессе условно - патогенных энтеробактерий.
Для достижения цели работы были сформулированы следующие задачи:
1. Сбор клинического материала от пациентов с различными клиническими формами урогенитальной патологии.
2. Выделение и очистка тотальной ДНК из клинического материала.
3. Проведение ПЦР - анализа выделенной ДНК для их видовой идентификации.
В ходе выполнения данной работы, нами были собраны клинические образцы, выделенные от 94 больных, страдающими мочекаменной болезнью и инфекциями мочевыводящих путей. Далее с помощью молекулярно - генетического метода все клинические образцы были исследованы на присутствие в них ДНК Enterobacteriaceae: Proteus spp., Citrobacter spp., Morganella morganii, Escherichia coli, Klebsiella spp., Hafnia alvei. В ходе выполнения данной работы, нами были подобраны олигонуклеотидные праймеры к уникальным участкам ДНК для идентификации ряда микроорганизмов, вызывающих ИМП. В результате анализа клинических материалов наиболее часто обнаруживались Escherichia coli., Klebsiella spp., Proteus spp. По данным американских исследователей при МКБ и ИМП наиболее часто выделяются именно эти микроорганизмы, что совпадает с результатами наших исследований [Stamm W.E., 2003]. Тем самым их можно отнести к наиболее часто выделяемым энтеробактериям, при МКБ и ИМП.
Таким образом, обнаружение данных энтеробактерий методом ПЦР позволяет предполагать о том, что они могут быть этиологическими агентами развития воспалительных заболеваний в мочевыводящих путях, которые в свою очередь часто ассоциированы с мочекаменной болезнью.
