Список сокращений 3
Введение 4
Глава 1. Обзор литературы 7
1.1 Анатомическое строение здорового волоса 7
1.2 Фазы жизненного цикла волос 9
1.3 Дерматомикозы 11
1.4 Микроспория 10
1.5 Лабораторные исследования 13
1.6 Специальные исследования 14
1.7 Трихофития 14
1.8 Клиническая картина 15
1.9 Патогенез 16
1.10 Диагностика 17
1.10.1 KOH микроскопия 17
1.10.2 Выделение возбудителя в культуре 18
1.10.3 ПЦР 19
1.10.4 Электрофоретический метод детекции в агарозном геле...22
1.11 Лечение 24
1.12 Противоэпидемическкие мероприятия 28
Глава 2. Материалы и методы 31
2.1 Объект исследования 31
2.2 KOH микроскопия 31
2.3 Культуральное исследование 32
2.4 Выделение ДНК 33
2.5 Постановка ПЦР 34
2.6 Электрофоретический метод детекции в агарозном геле 35
2.7 Статистическая обработка полученных результатов 39
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждения 40
Заключение 48
Выводы 49
Список литературы 50
Приложение 55
Актуальность проблемы
На сегодняшний день в Республике Башкортостан наметилась тенденция к стабилизации показателей заболевания трихофитией, однако заболеваемость остается выше средних показателей по России. Основными возбудителями трихофитии в РБ является зоофильные дерматофиты. По данным клинической лаборатории РКВД г. Уфа в этиологической структуре трихофитии преобладает Trichophyton verrucosum.
Большая роль в выявлении и идентификации вида патогенных грибов отводится лабораторным методам диагностики возбудителя. В настоящее время наиболее широко используется микроскопия неокрашенных препаратов с предварительной обработкой патологического материала раствором едкого калия (KOH-тест). При исследовании обнаруживаются нити мицелия и споры гриба, диаметром 4 - 6 мкм, которые располагаются внутри волоса продольными цепочками, полностью его заполняя. Микроскопия обычно не позволяет идентифицировать грибы до вида по их морфологии.
При проведении культурального исследования используют посев на среду Сабуро. Колонии являются медленнорастущими и формируются к концу первого месяца после посева. Культура похожа на диск с приподнимающимся, морщинистым центром серовато-желтоватогого цвета и беловатой зоной по периферии. Недостатком культурального метода являются большие временные затраты.
Вследствие с выше изложенным, метод ПЦР обладает более высокой чувствительностью и специфичностью, поэтому даже минимальные количества возбудителя могут быть обнаружены в клиническом материале.
Целью исследования является оценка эффективности использования метода полимеразной цепной реакции, по сравнению с микроскопическим и культуральным методами в лабораторной диагностике зооантропонозной трихофитии на эпидемиологически обоснованных адекватных группах сравнения.
Задачи исследования:
1. Сбор клинического материала от пациентов с подозрением на трихофитию.
2. Исследование пораженных волос традиционными методами (микроскопия и культуральный метод).
3. Выделение ДНК из клинического материала.
4. Проведение ПЦР - анализа.
Материалы и методы исследования:
• Объект исследования - пациенты с подозрением на трихофитию.
• Клинический материал - волосы и чешуйки кожи.
• KOH- микроскопия.
• Посев материала на среду Сабуро.
• ПЦР.
Новизна исследования: Разработка метода экспресс-диагностики зооантропонозной трихофитии для надежной, высокоспецифичной и высокочувствительной детекции T. verrucosum.
Этапы исследования: 2014-2015 гг. - изучение и анализ литературы по теме курсовой и дипломной работы; сбор клинического материала, выделение ДНК грибов и проведение ПЦР.
2015-2016 гг. - обработка полученных данных, оформление и защита дипломной работы.
Микроскопический метод является простым в работе и не требует высоких экономических затрат, но не может определить возбудитель до вида.
Культуральный метод - это специфический диагностический тест, при котором возможно определить возбудителя до вида, но требуются высокие экономические и временные затраты, прежде чем результат будет получен.
Полимеразная цепная реакция является высокочувствительным и высокоспецифичным методом, который имеет единственный недостаток - это высокие экономические затраты.
Таким образом, ПЦР анализ отличается самым высоким процентом выявляемости, по сравнения с микроскопическим и культуральным методами, в лабораторной диагностике зооантропонозной трихофитии.
