📄Работа №184574
Тема: Частота встречаемости нетуберкулезных микобактерий при хронической обструктивной болезни легких
Тип работы
Дипломные работы, ВКР
Предмет
Биология
Объем:
98 листов
Год:
2017
Просмотров:
51
4980
руб.
🛒 Купить работу
Не подходит эта работа?
Закажите новую по вашим требованиям
Узнать цену на написание
Закажите новую по вашим требованиям
Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
📋 Содержание
Список сокращений и условных обозначений 3
ВВЕДЕНИЕ 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Микрофлора легких человека 8
1.2. Предполагаемые возбудители ХОБЛ 11
1.2.1. Факторы и механизмы вирулентности микобактерий 17
1.3. Лабораторные методы исследования хронической обструктивной болезни
легких 19
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 24
2.1. Объекты и материалы исследования 24
2.2. Методы исследования 24
2.3. Выделение ДНК 25
2.4. ПЦР-анализ препаратов ДНК клинического материала 27
2.5. Детекция ПЦР-продуктов методом агарозного гель-электрофореза 29
2.5.1. Статистический анализ 31
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 32
3.1. Подбор родоспецифичных праймеров 32
3.2. Детекция микобактерий в клиническом материале методом ПЦР 33
3.3. Исследование показателей анализа крови при ХОБЛ 41
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 49
ВЫВОДЫ 50
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 51
ВВЕДЕНИЕ 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1. Микрофлора легких человека 8
1.2. Предполагаемые возбудители ХОБЛ 11
1.2.1. Факторы и механизмы вирулентности микобактерий 17
1.3. Лабораторные методы исследования хронической обструктивной болезни
легких 19
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 24
2.1. Объекты и материалы исследования 24
2.2. Методы исследования 24
2.3. Выделение ДНК 25
2.4. ПЦР-анализ препаратов ДНК клинического материала 27
2.5. Детекция ПЦР-продуктов методом агарозного гель-электрофореза 29
2.5.1. Статистический анализ 31
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 32
3.1. Подбор родоспецифичных праймеров 32
3.2. Детекция микобактерий в клиническом материале методом ПЦР 33
3.3. Исследование показателей анализа крови при ХОБЛ 41
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 49
ВЫВОДЫ 50
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 51
📖 Введение
Актуальность проблемы. По данным Всемирной организации здравоохранения на сегодняшний день хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) занимает 4 место по смертности в мире в возрастной группе старше 45 лет, при этом смертность неуклонно растет (Чучалин, 2003; Шмелев, 2003). Данные о распространенности, болезненности и смертности от ХОБЛ заметно недооценивают общий ущерб от болезни, так как обычно ХОБЛ не распознается и не фиксируется до тех пор, пока не становится клинически значимой. Значительный рост повсеместного ущерба от ХОБЛ отражается в увеличении курения, профессиональных факторах, наследственной предрасположенности, а также изменение возрастной структуры населения (Трухан, Викторова, 2013).
Заболевание проявляется в том, что оно развивается на протяжении длительного времени и поражает человека в период наивысшей жизненной активности. На первых этапах ХОБЛ протекает без клинических проявлений, больные жалоб не имеют (Чучалин, 2003; Шмелев, 2003).
Доказано, что наиболее частыми причинами обострений ХОБЛ являются бактериальные и вирусные респираторные инфекции и загрязняющие вещества в атмосферном воздухе, однако причиной примерно 20-30% случаев обострений установить не удается. (White, et al., 2003; Veeramachaneni, Sethi, 2006; Papi et al, 2006). Среди бактерий при обострении ХОБЛ обнаруживаются нетипируемые Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae и Moraxella catarrhalis, энтеробактерии и Pseudomonas aeruginosa. Но в последнее время исследование нетуберкулезных микобактерий показало их этиологическую значимость (Sethi et al., 2002; Veeramachaneni, Sethi, 2006; Авдеев, 2009).
Род микобактерий насчитывает более 50 видов и подвидов микобактерий (Оттен, Васильев, 2005; Отева, Полонская, 2013).
Считается, что большинство пациентов заражаются нетуберкулезными микобактериями из окружающей среды, но механизм их поступления в организм точно не известен, при этом нетуберкулезные микобактерии могут играть важную роль в возникновении респираторных заболеваний (Falkinham, 2002; Falkinham, 2003; Отева, Полонская, 2013).
Микобактериозы легких получили в последние годы известность в связи с улучшением лабораторных методов выделения и идентификации нетуберкулезных микобактерий. Диагностика микобактериоза остается сложной проблемой, так как большая часть нетуберкулезных микобактерий является условно-патогенной и до настоящего времени не разработаны методы постановки диагноза и подходы к лечению этого заболевания (Литвинов и др., 2008; Суркова и др., 2015).
Цель исследования
Совершенствование методологии ПЦР-детекции нетуберкулезных микобактерий в клиническом материале и экспериментальная оценка частоты их встречаемости при ХОБЛ.
Задачи исследования
1. Сбор клинического материала (мокроты).
2. Выделение ДНК с помощью набора «АмплиПрайм ДНК-сорб-АМ».
3. Амплификация ДНК с родоспецифичными праймерами.
4. Анализ частоты встречаемости микобактерий при ХОБЛ и сравнение с другими диагнозами.
Практическая значимость
На основании проведенных исследований предложена тест-система, обеспечивающая лабораторную детекцию нетуберкулезных микобактерий при ХОБЛ на ранних стадиях заболевания, при которых детекция возбудителя обычными методами проблематична. Проведена сравнительная характеристика информативности разработанной тест-системы для обнаружения нетуберкулезных микобактерий в клиническом материале.
Заболевание проявляется в том, что оно развивается на протяжении длительного времени и поражает человека в период наивысшей жизненной активности. На первых этапах ХОБЛ протекает без клинических проявлений, больные жалоб не имеют (Чучалин, 2003; Шмелев, 2003).
Доказано, что наиболее частыми причинами обострений ХОБЛ являются бактериальные и вирусные респираторные инфекции и загрязняющие вещества в атмосферном воздухе, однако причиной примерно 20-30% случаев обострений установить не удается. (White, et al., 2003; Veeramachaneni, Sethi, 2006; Papi et al, 2006). Среди бактерий при обострении ХОБЛ обнаруживаются нетипируемые Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae и Moraxella catarrhalis, энтеробактерии и Pseudomonas aeruginosa. Но в последнее время исследование нетуберкулезных микобактерий показало их этиологическую значимость (Sethi et al., 2002; Veeramachaneni, Sethi, 2006; Авдеев, 2009).
Род микобактерий насчитывает более 50 видов и подвидов микобактерий (Оттен, Васильев, 2005; Отева, Полонская, 2013).
Считается, что большинство пациентов заражаются нетуберкулезными микобактериями из окружающей среды, но механизм их поступления в организм точно не известен, при этом нетуберкулезные микобактерии могут играть важную роль в возникновении респираторных заболеваний (Falkinham, 2002; Falkinham, 2003; Отева, Полонская, 2013).
Микобактериозы легких получили в последние годы известность в связи с улучшением лабораторных методов выделения и идентификации нетуберкулезных микобактерий. Диагностика микобактериоза остается сложной проблемой, так как большая часть нетуберкулезных микобактерий является условно-патогенной и до настоящего времени не разработаны методы постановки диагноза и подходы к лечению этого заболевания (Литвинов и др., 2008; Суркова и др., 2015).
Цель исследования
Совершенствование методологии ПЦР-детекции нетуберкулезных микобактерий в клиническом материале и экспериментальная оценка частоты их встречаемости при ХОБЛ.
Задачи исследования
1. Сбор клинического материала (мокроты).
2. Выделение ДНК с помощью набора «АмплиПрайм ДНК-сорб-АМ».
3. Амплификация ДНК с родоспецифичными праймерами.
4. Анализ частоты встречаемости микобактерий при ХОБЛ и сравнение с другими диагнозами.
Практическая значимость
На основании проведенных исследований предложена тест-система, обеспечивающая лабораторную детекцию нетуберкулезных микобактерий при ХОБЛ на ранних стадиях заболевания, при которых детекция возбудителя обычными методами проблематична. Проведена сравнительная характеристика информативности разработанной тест-системы для обнаружения нетуберкулезных микобактерий в клиническом материале.
✅ Заключение
Исследование ДНК, выделенной из образцов клинического материала (мокроты), показало, что ПЦР-анализ является высокоспецифичными и чувствительными, что является важным фактором при лабораторной диагностике, а подобранные родоспецифичные праймеры действительно обладают высокой специфичностью и могут применятся при исследовании клинического материала на наличие бактерий рода Mycobacterium.
Как было показано, при диагностике микобактериозов нельзя опираться на данные показателей крови, так как статистически значимой разницы между значениями у пациентов с патологиями дыхательных путей нет. Кроме того, все эти показатели практически находились в пределах нормы.
ПЦР - диагностика при ХОБЛ обладает рядом преимуществ: высокой и регулируемой специфичностью, высокой чувствительностью, возможностью идентификации возбудителя в течение нескольких часов, не требует специальных условий доставки и хранения материала.
Как было показано, при диагностике микобактериозов нельзя опираться на данные показателей крови, так как статистически значимой разницы между значениями у пациентов с патологиями дыхательных путей нет. Кроме того, все эти показатели практически находились в пределах нормы.
ПЦР - диагностика при ХОБЛ обладает рядом преимуществ: высокой и регулируемой специфичностью, высокой чувствительностью, возможностью идентификации возбудителя в течение нескольких часов, не требует специальных условий доставки и хранения материала.
ИЛИ
Поиск аналога
📕 Список литературы
🖼 Скриншоты
🛒 Оформить заказ
⚡ Работу высылаем в течении 5 минут после оплаты.