Список сокращений и условных обозначений 3
Введение 4
ГЛАВА 1. Обзор литературы 6
1.1. Исторический очерк 6
1.2. Состав микрофлоры влагалища 8
1.3. Биопленка 10
1.4. Диагностика бактериального вагиноза 11
1.5. Передача бактериального вагиноза 15
ГЛАВА 2. Материалы и методы 17
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждения 18
3.1. Сравнение массы цервикальной слизи взятой ложкой
Фолькмана и цитощеткой 18
3.2. Сравнение полученных данных по микроорганизмам от RT-PCR
при заборе цервикальной слизи ложкой Фолькмана и цитощеткой 18
3.3. Разделение женщин на группы по возрастному признаку и
проведение статистического анализа 24
3.4. Выведение формулы для определения концентрации
микроорганизмов при проведении RT-PCR 27
Заключение 28
Выводы 29
Список литературы 30
Приложения 34
Актуальность проблемы. Одной из наиболее актуальных проблем, связанных с репродуктивным здоровьем женщины, является бактериальный вагиноз (БВ) или дисбиоз влагалища (ДВ). По данным мировой статистики, бактериальному вагинозу принадлежит одно из первых мест среди заболеваний влагалища. Частота его распространения в популяции колеблется от 12 до 80% и зависит от контингента обследованных женщин. БВ выявляется при патологических вагинальных выделениях у 87% женщин, частота выявления заболевания у беременных достигает 37%. (Малова, 2013).
По мнению экспертов Всемирной организации здравоохранения, ситуация, связанная с инфекционными заболеваниями женских половых органов, является следствием недостаточной научной разработки вопроса, а также различий в методологических подходах. У клиницистов нередко возникают сложности при оценке результатов обследования, определении целесообразности назначаемого лечения и выборе лекарственных препаратов, в связи с двойственной природой условно-патогенных микроорганизмов (УПМ), поскольку присутствуют они в качестве комменсалов в составе нормальной микрофлоры здоровых людей, а также регистрируются как этиопатогены при различных местных и генерализованных процессах. (Осацкая, 2013).
Микробиота женского урогенитального тракта является одновременно и простой, и сложной. Простота заключается в том, что обычно, несмотря на ежедневное воздействие мочи и экскретов желез, в ней постоянно присутствует примерно 10 видов микроорганизмов. Ее сложность связана с варьированием количественных параметров и возможным таксономическим разнообразием - от бактерий и простейших до грибов и вирусов. (Рищук, 2013). Известно, что первым признаком вагинальных дисбиотических нарушений является снижение концентраций лактофлоры или потеря ею антагонистических свойств. При этом нарушение микроэкологии влагалища имеют отношение к выкидышам и преждевременным родам, септическим осложнениям послеродового периода, инфекциям и воспалительным заболеваниям органов малого таза, повышенному риску заражения и дальнейшей трансмиссии инфекций, передающихся половым путем (ИППП), в том числе и ВИЧ. (Рыбина, 2015).
Несмотря на достаточно высокий уровень развития современной клинической микробиологии, этиология и патогенез БВ остаются предметом дискуссии. (Назарова, 2013).
Немаловажным также является и то, чем производится забор материала. Разные зонды для забора цервикальной слизи могут выдавать разные результаты при проведении RT-PCR (real-time PCR), что в свою очередь может сказать на постановке правильного диагноза и корректности назначаемого лечения. Поэтому целью дипломной работы является выведение формулы для определения концентрации микроорганизмов, содержащихся в цервикальной слизи, что позволит унифицировать получаемые результаты.
Цель исследования: разработка методики расчёта
количественных данных при использовании ПЦР в реальном времени для диагностики бактериального вагиноза.
Задачи:
1. Произвести взвешивание взятого материала цитощеткой и ложкой Фолькмана, установить если ли достоверные различия между количеством взятого материала;
2. Установить наличие достоверного различия при заборе цервикальной слизи между цитощеткой и ложкой Фолькмана по данным RT-PCR;
3. Установить наличие достоверного различия при разбитии женщин на группы по возрастному признаку;
4. Выведение формулы для нахождения концентрации микроорганизмов при проведении RT-PCR.
Тест-система «Фемофлор» компании ООО «НПО ДНК-Технология» получила широкое распространение при постановке бактериального вагиноза, но не обладает той точностью при постановке диагноза, которой могла бы обладать. Постановка диагноза основывается на относительных показателях, выражаемых в lg - отношение определенного микроорганизма к ОБМ (общая бактериальная масса). Но так как ОБМ это абсолютный показатель, то он может широко варьировать от многих факторов (способ забора материала, метод выделения ДНК. Так цервикальную слизь можно забирать разными способами - ложкой Фолькмана или цитощеткой, что уже существенно влияет на конечный результат.
К тому же, по моему мнению, сама интерпретация диагноза является не точной. В ее основе лежит соотношение Lactobacillus spp. к условно¬патогенной микрофлоре. Так если концентрация Lactobacillus spp. ниже 80%, то уже выставляется диагноз как умеренный дисбиоз, хотя в норме концентрация Lactobacillus spp. от ОБМ может составлять и 50%. Так же сомнительным является переход от умеренного к выраженному дисбиозу, поскольку L. iners может сохранять высокие концентрации при наличии БВ.
Выше сказанное говорит о том, что требуется выведение нового способа для определения концентрации и пересмотр некоторых параметров интерпретации результатов. Поставив в основу постановки диагноза определение концентрации в копий ДНК/мг в абсолютных значениях позволит повысить точность постановки диагноза, более корректно назначать лечение и следить за его ходом, что в свою очередь позволит уменьшить число рецидивов. Более того можно будет вывести границы для условно-патогенной микрофлоры, когда она переходит к патогенному действию, что тоже может позволить избежать не нужного лечения.
