ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Многоэтапность иммунной защиты 7
1.1.1 Врожденный иммунитет 8
1.1.2. Клеточные факторы врожденного иммунитета 10
1.1.3. Роль лейкоцитарных показателей в иммунитете 12
1.1.4 Адаптивный иммунитет 15
1.2. Липополисахариды 17
1.2.1 Структура молекул ЛПС 17
1.2.2. Иммунобиологические свойства ЛПС 19
1.2.3. Распознавание ЛПС как «чужого» в системе врожденного
иммунитета 21
1.3. Иммуномодуляторы, их классификация 24
1.4. Строение и химический состав бактериальной клетки 30
1.5. Семейство Enterobacteriaceae 35
1.6. Род Escherichia 38
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 42
2.1. Материалы исследования 42
2.2. Методы исследования 43
2.2.1. Биологические методы исследования 43
2.2.2. Экспериментальная часть in vivo 48
2.2.3. Иммунологические методы исследования 49
2.2.3.1. Определение концентрации IgG и комплексов C1q-IgG в сыворотке
крови мышей 49
2.2.3.2. Исследование поглотительной способности фагоцитов
периферической крови 51
2.2.3.3. Функциональная активность фагоцитов по показателям НСТ-
теста 51
2.2.3.4. Подсчет лейкоцитарной формулы 52
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 54
3.1. Уровень IgG и иммунных комплексов C1q-IgG в сыворотке
крови 54
3.2. Фагоцитарная активность нейтрофилов 58
3.3. Метаболическая активность нейтрофилов по показателям НСТ-теста
>••••••••••• >>• •••••••>••••••••••••• >>• >••••••••••• >>• >••••••••••• >>• ••>.••• ^^^2
3.4. Количественный состав форменных элементов крови 67
ВЫВОДЫ 73
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 74
ПРИЛОЖЕНИЕ 83
Актуальность исследования. Липополисахарид (ЛПС) - полифункциональный компонент наружной мембраны всех грамотрицательных бактерий, который отвечает за многие иммунологические и патогенетические особенности течения инфекционного процесса [Гурбанова С.Ф., 2007]. Широкий спектр
биологических свойств ЛПС объясняет большое внимание клиницистов и экспериментаторов к данному макромолекулярному компоненту микробной клетки [Оноприенко Н.Н., 2008].
По литературным данным известно, что циркуляция ЛПС в норме в системном кровотоке является основным фактором повышения неспецифической резистентности организма к инфекциям [Рябиченко, Е.В. с соавт., 2004, 2005]. Однако при патологических состояниях
высвобождение ЛПС сопровождается лихорадкой, септическими состояниями [Руднов В.А., 2003.], мультиорганными поражениями [Пак С.Г., 2004; Арутюнов Г.П. и др., 2003; Харланова Н.Г. и др., 2004], шоком и даже летальными исходами.
В основе биологических эффектов лежит ЛПС-ассоциированная эндотоксинемия. При этом бактериальные ЛПС благодаря их уникальному химическому строению могут взаимодействовать с «То11»-подобными рецепторами типа 4 (TLR-4) и вызывать сверхсильный иммунный ответ. Данный процесс опосредуется активацией сразу нескольких
патогенетически значимых механизмов, обусловленных экспрессией генов интерлейкина-1 (IL-1), интерлейкина-6 (IL-6), фактора некроза опухолей-а (TNF-а) и оксида азота (NO)[Fujihara M., 2003].
Установлено, что ЛПС грамотрицательных условно - патогенных бактерий родов Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Haemophilus, Bacteroides, Prevotella и Fusobacterium являются биологически активными веществами, которые влияют на функциональную активность моноцитов и лимфоцитов крови человека. Они стимулируют секреторную функцию моноцитов и Т-хелперов, усиливают функциональную активность фагоцитов, что приводит к увеличению продукции провоспалительных цитокинов, которые необходимы для инициации гуморального и клеточного иммунитета [Косенко Ю.В., 2006].
Таким образом, литературные данные указывают на важную роль бактериальных ЛПС или эндотоксинов (ЭТ) для нормального развития и функционирования иммунной системы организма. Однако, механизм их действия на иммунную систему мало изучен и учитывая, что ключевым звеном иммунных реакций при инфекциях, вызванными грамотрицательными бактериями, является TLR-опосредованная
активация фагоцитоза целью исследования явилась: Оценка влияния липополисахарида из клеточной стенки E.coli на некоторые показатели клеточного и гуморального иммунитета у лабораторных мышей.
Задачи исследования:
1. Индуцировать иммунодефицит у лабораторных мышей путем введения им циклофосфана.
2. Определить фагоцитарную (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс) и метаболическую активность нейтрофилов (по восстановлению нитросинего тетразолия) в крови мышей с моделированным иммунодефицитом после курса введения липолисахарида E.coli.
3. Установить влияние липолисахарида E.coli на количественный состав форменных элементов крови (лейкоцитов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов) и значение лейкоцитарного индекса.
4. Провести количественную оценку уровня иммуноглобулинов G и их комплексов с субкомпонентом первого фактора компонента комплемента - C1q в сыворотке крови мышей после применения курса терапии препаратом липолисахарида E. coli.
1. Липополисахариды E.coli оказывают иммунокорригирующее действие, восстанавливая метаболическую систему фагоцитоза, тем самым, повышая эффективность борьбы клеток иммунной системы с патогенами.
2. Наиболее эффективным иммуномодулирующим действием из трех изученных фракций ЛПС обладает ЛПС-3. Действие ЛПС-1 и ЛПС-2 сопоставимо с действием иммуностимулирующего препарата Ликопид.
3. Введение липополисахарида E.coli способствует повышению
уровня IgG и их комплексов с субкомпонентом системы
комплемента C1q, снижающегося под действием цитостатика
циклофосфана, что свидетельствует о его иммуномодулирующем действии.
4. Применение препарата ЛПС вызывает положительные сдвиги в количественном составе клеток крови иммунодефицитных животных.
5. Таким образом, показанная на иммунодефицитных мышах иммуностимулирующая активность ЛПС открывает возможность продолжения данных исследований, а также дает возможность предполагать эффективность ее применения для человека
