ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.Определение Giardia lamblia 6
1.1. Систематическое положение Giardia lamblia 6
1.2. Морфология Giardia lamblia 7
1.3.Экология Giardia lamblia 9
1.4.Эпидемиология . Giardia lamblia 10
1.5. Патогенез Giardia lamblia 12
1.6. Клиническая картина Giardia lamblia 14
1.7.Значение в патологии животных и человека 17
1.8.Природный резервуар Giardia lamblia 19
2.1. Лабораторная диагностика лямблиозной инвазии 19
2.1.1. Иммунологическая (серологическая) диагностика лямблиоза 21
2.1.2. Копровоскопия 22
3.1. Микроскопические методы диагностики лямблиоза 22
3.1.1. Исследование дуоденального содержимого путем микроскопии
осадка 23
4.1. Методы седиментации 23
4.1.1. Формалин - эфирный метод 23
4.1.2. Уксусно - эфирный метод 26
4.1.3. Модификация метода седиментации с применением одноразовых
концентратов PARASEP 29
4.1.4. Модификация метода седиментации с применением системы
Real 30
5.1. Методы детекции во внешней среде 31
5.1.1. Метод последовательной фильтрации через систему прозрачных
аналитически - трековых мембран (АТМ.) 32
5.1.2. Метод иммуномагнитного разделения и мечения флуоресцирующими антителами (IMS) 33
6.1. Полимеразная цепная реакция 39
7.1. Профилактика 41
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования 43
2.2. Метод осаждения 44
2.2.1. Микросокпический метод исследования 45
2.3. Генетические методы исследования.
2.3.1. Выделение ДНК 45
2.3.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 47
2.3.3.Электрофоретический анализ продуктов амплификации 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Микроскопический метод исследования обсемененности Giardia lamblia
объектов окружающей среды в ходе оценки степени их инфекционной опасности 52
3.2. ПЦР анализ 53
3.3. Сравнение методов микроскопии и ПЦР 56
ВЫВОДЫ 57
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 58
Актуальность темы
Лямблиоз является актуальной проблемой как у детей, так и у взрослых, его распространенность в детской популяции составляет 355 случаев на 100000 детского населения. Актуальность ляблиоза у детей во многом обусловлена тем, что его клинические проявления часто маскируются различными вариантами гастроэнтерологической патологии, включая функциональные нарушения желудочно - кишечного тракта, синдромы избыточного роста кишечной микрофлоры в тонком кишке, а также развитием аллергических заболеваний.
Источником лямблиозной инвазии является инвазированный человек, который выделяет в окружающую среду зрелые инвазионные цисты. Сравнительно плотная, хорошо очерченная оболочка цист позволяет переносить различные воздействия внешней среды без всякого вреда для себя.
Цисты хорошо приспосабливаются и сохраняются в окружающей среде: в водопроводной и прудовой воде способны выжить в течение 1 - 3 месяцев при температуре воды от 4 до 20С, в сточной воде в летнее время цисты выживают до 3 - 4 месяцев, в почве способны выживать до 3 недель, на продуктах питания сохраняют жизнеспособность от нескольких часов до нескольких суток. Цисты устойчивы к действию хлора, переносят замораживание и нагревание до 50 градусов.
Так как цистные формы лямблий являются основным фактором передачи лямблиоза, а в распространении большую роль играют объекты окружающей среды необходимо более подробно изучить обсемененность Giardia lamblia в объектах окружающей среды.
Цель исследования
Произвести сравнительную оценку обсемененности G.lamblia различных объектов окружающей среды для изучения степени их инфекционной опасности.
Задачи исследования
1. Сбор клинического материала в виде смывов с предметов обихода, собранные из детских дошкольных учреждений. Микроскопия микропрепаратов, для определения наличия или отсутствия цист Giardia lamblia.
2. Выделение ДНК микроорганизмов из собранного клинического материала.
3. Подбор и синтез праймеров.
4. Проведение ПЦР-анализа выделенной ДНК при помощи
подобранных праймеров.
5. Анализ преимуществ и ограничений существующих методов.
1. Объекты внешней среды в детских дошкольных учреждениях обсеменены Giardia lamblia и инфекционную угрозу для детей.
2. При использовании традиционных методов детекции G.lamblia характерна низкая чувствительность, т.к. не было обнаружено ни одного положительного результата.
3. Геном G.lamblia включает консервативные участки, к которым могут быть подобраны праймеры, применимые для конструирования тест- систему по детекции указанных микроорганизмов.
4. При исследовании объектов внешней среды может использоваться ПЦР, поскольку в наших исследованияхэтот метод позволил выявить специфические фрагменты ДНК лямблий .
5. Информативность ПЦР в сравнении с микроскопией существенно выше, т.к. выявляемость G.lamblia методом ПЦР составила 15%, при микроскопии - 0%.
