Введение 4
Глава 1. Обзор литературы 6
1.1 Методы изучения кариотипа рыб 6
1.2 Митогены 11
1.3 Жаберный аппарат рыб как источник делящихся клеток.... 22
Глава 2. Материалы и методы 26
Глава 3. Результаты и обсуждение 29
1.1 Результаты исследования 29
1.2 Обсуждение результатов 33
Глава 4. Выводы 38
Список литературы 39
В современной ихтиологии для решения ряда вопросов, связанных с исследованием эволюционных процессов, механизмом видообразования, репродуктивной изоляции, для уточнения систематического положения организмов всё чаще используется кариотип животных (Мельниченко и др., 2000; Праздников, 2013; Cataudellaetal., 1977). Последние достижения в анализе кариотипа связаны с использованием и развитием методов молекулярной биологии и цитологических подходов (Пикалова, 2007). Актуальность
цитогенетических исследований рыб обусловлена созданием межвидовых гибридов и изучением их биологических и хозяйственно - полезных признаков в научных целях и для товарного выращивания (Насибов и др., 2007; Макоедов, 2000; Lee, 1987).
Для изучения кариотипов необходима ткань организма, обладающая высокой митотической активностью, например, ткани почек и жабр (Goldetal., 1990; Pourkazemietal., 2011). Но у рыб,обитающих в холодных водах, пролиферация снижена, так как они являются пойкилотермными организмами - с непостоянной температурой тела. Понижениетемпературы воды у пойкилотермных организмов замедляет жизненные процессы в организме (Винберг, 1976). Для получения большого количества метафазных пластинок у таких рыб необходимо использовать методики, включающие не только выделение хромосом, а также увеличение митотической активности.
На данный момент существует множество методов определения кариотипа, например, метод регенерации плавников, хромосомные препараты из эмбрионов и личинок, лимфоцитов. Также существует методика культуры тканей, но она является достаточно сложной, так как требует большой осторожности, внимания, времени и различных препаратов, чтобы обеспечить нарастание клеток. Необходимы стерильные условия, чтобы избежать заражения культуры тканей патогенами. Данная методика подходит только для
лабораторий, которые оснащены специальными оборудованиями для
поддержания жизни клеток (Ozouf-Costaz C. etal., 2015).
Чтобы получить большое количество препаратов и хорошего качества, некоторые ученые используют различные митогенные вещества, к которым относятся хлорид кобальта, фитогемагглютини (ФГА), хлебопекарские дрожжи, экстракт звездчатки обыкновенной и другие. Наиболее часто исследователи стали использовать ФГА, но его применение не стандартизировано, и различные виды рыб нуждаются в различных дозировках и времени выдерживания. Поэтому данный препарат требует проверки. (Моргулис, 2006; Бодоев и др., 2011; Nasrietal., 2011; Kilicetal., 2016; Ganaietal., 2011).
В настоящее время исследователи кариотипов не только рыб, но и других живых существ, используют различные методы для создания препаратов. Однако до сих пор не создан универсальный метод получения метафазных пластинок, который даст наилучший результат, то есть большое количество хромосом на одном препарате. Учёные пробуют различные методики, которые уже были созданы до них, и также пытаются внести туда свои изменения, помогающие получить наиболее хорошие результаты (Pukhtayevych, 2014; Kilic-Demiroketal, 2004; Dai, 2013).
Цель: Протестировать несколько методов повышения митотической активности для соматических тканей рыб.
Задачи:
• Оценить влияние инъекции фитогемагглютинина на митотическую активность почечной ткани карася серебряного и пескаря;
• Оценить влияние кратковременного осмотического шока на митотическую активность жаберной ткани пескаря;
• Дать сравнительную оценку эффективности существующих и использованных в работе методов повышения митотической активности рыб.
В ходе проведённых экспериментов с использованием митогена фитогемагглютинина выживаемость всех особей составила 100 %. В данном эксперименте в общей сумме было взято 20 рыб различного пола, среди них были 2 особи карася серебряного Carassiusgibelio(Boch, 1782)и 18 особей пескаря обыкновенного Gobiogobio(.nHHHefi, 1758). Пол данных особей не учитывался, так как митоген действовал на соматические клетки. Из всех выбранных рыб 10 было взято для контрольного значения, они обитали в таких же условиях и на протяжении такого же времени (1 неделя), что и исследуемая группа.
[изъято 9 страниц]
1) При использовании раствора ФГА, взятого в концентрации 0,002%, действовавшего в течение 7 дней, количество метафазных пластинок увеличилось в 2,01 раза;
2) У рыбы, обитавшей в течение 4 дней в воде, где солёность составляла 5%о, количество метафазных пластинок увеличилось в 2,07 раза;
3) После исследования существующих методов, по увеличению пролиферации соматических клеток, было выявлено, что наилучшими являются методы с использованием:
• 0,2% раствора ФГА, где применяется 0,04% раствор колхицина - увеличение метафазных пластинок в 2,01 раза;
• при воздействии личинок глохидий в течение 4 дней количество метафазных пластинок увеличивается в 10 раз;
• при введении рыбы в состояние осмотического шока пролиферация увеличивается в 2,07 раз (солёность воды 5%).
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
