Тема: РАЗРАБОТКА МЕТОДОЛОГИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ ДЕТЕКЦИИ ДЕЛЕЦИИ 14 ЭКЗОНА ГЕНА МЕТ

Рак легкого - злокачественное образование, возникающее в эпителиальной ткани легкого под воздействием факторов риска, таких как курение, наследственная предрасположенность, неблагоприятные факторы окружающей среды [Pre-neoplastic and neoplastic changes ..., 2014]. На сегодняшний день рак легкого является одним из самых распространенных видов онкологических заболеваний в мире. Согласно данным на 2020 год рак легкого среди всех видов рака у мужчин занимает 1 место в структуре заболеваемости и структуре смертности, составляя 1,43 и 1,19 миллионов случаев соответственно, у женщин 2 место по структуре заболеваемости и структуре смертности, составляя 0,77 и 0,61 миллионов случаев соответственно [Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN ..., 2021].
Рак легкого по патоморфологическим характеристикам делят на два типа: немелкоклеточный и мелкоклеточный [Semenova et al., 2015]. Немелкоклеточный рак легкого включает 3 основных гистологических подтипа: аденокарциному,
плоскоклеточный и крупноклеточный рак. Гистологические типы рака различаются по характеру онкогенеза, клиническому течению и молекулярно-генетическим характеристикам, что получило отражение в различных вариантах лекарственной терапии [Davidson et al., 2013]. Немелкоклеточный рак в 70 % случаев выявляется на поздних стадиях заболевания, когда больные уже неоперабельны и лечение сводится к химиотерапии, при этом ответ на лечение и общая выживаемость невелики, медиана выживаемости составляет примерно 1 год при III или IV стадиях заболевания. В связи с этим актуальным является поиск мишеней и разработка более эффективных препаратов для лечения данного типа рака легкого [Genomic profiles specific ..., 2011].
С 2003 года идет интенсивная разработка противоопухолевых препаратов. Наиболее успешно развивается таргетная терапия, с появлением которой онкология продвинулась вперед от использования тестов для одного гена к множественному молекулярному тестированию. Мишенями персонализированной медицины являются биомаркеры (62 %) и рецепторы (31 %) [Falconi et al., 2014]. Одним из биомаркеров немелкоклеточного рака легкого являются мутации гена MET. Частота встречаемости делеции 14 экзона гена MET (METex14) составляет 3-4 % случаев данного типа рака. Среди других гистологических типов рака легкого делеция 14 экзона гена MET встречается в 1 % случаев
плоскоклеточного рака, в 2 % аденокарцином, в 6 % случаев аденосквамозной карциномы, в 13 % случаев саркаматоидного рака легкого. Распространенность делеции 14 экзона при саркоматоидных карциномах легкого может варьировать от 4,9 % до 31,8 % [Subramanian, Tawfik, 2021].
Ген MET (mesenchymal-epithelial transition factor) - протоонкоген, кодирующий тирозинкиназный белок. Ген вовлечен в сигнальные пути процессов эмбриогенеза, выживания, миграции и инвазии клеток. Делеция 14 экзона данного гена является неблагоприятным прогностическим фактором у пациентов. Ген МЕТ кодирует рецептор фактора роста гепатоцитов, который действует на клетки различных типов. При связывании лиганда рецептор претерпевает конформационные изменения, приводящие к активации его цитоплазматического домена и передаче сигнала вторичным мессенджерам, что направлено на стимуляцию пролиферации клеток [Subramanian, Tawfik, 2021].
Таргетная терапия - это терапия, направленная на подавление молекул, идентифицированных до этого как основные участники патогенеза опухолевых клеток [Моисеенко, 2010]. Новые лекарственные противоопухолевые препараты ежегодно изучаются в сотнях доклинических и клинических программ. Апробируются различные схемы, в которых таргетные препараты назначаются в монорежиме, в комбинациях друг с другом, в сочетании с химиопрепаратами. Использование таргетных препаратов позволяет улучшить клиническую эффективность лечения в целевых группах, а также снизить его себестоимость за счет отказа от заведомо неэффективных вмешательств. Для повышения эффективности таргетной терапии необходим поиск новых драйверных мишеней и создание препаратов, направленных против них, а также разработка мультитаргетного подхода [Проблемы и перспективы совершенствования ..., 2014].
Цель исследования: разработать метод определения делеции 14 экзона гена MET у пациентов с раком легкого в соответствии с клиническими рекомендациями.
Задачи:
1. Изучить статус мутации гена EGFR у пациентов с аденокарциномой легкого.
2. Оптимизировать метод поиска делеции 14 экзона гена MET с помощью секвенирования по методу Сэнгера.
3. Изучить статус мутации гена MET у пациентов с аденокарциномой легкого без мутаций гена EGFR.
1 Обзор литературы
1.1 Факторы риска развития рака легкого
Канцерогенез в бронхиальном эпителии - это многоэтапный процесс, происходящий под воздействием множества факторов, приводящих к изменению морфологии эпителия. Курение - один из главных факторов риска развития рака легкого. Проведенное клиническое исследование у пациентов с раком легкого показало, что риск его возникновения возрастал с увеличением продолжительности воздействия табачного дыма на эпителий легких. Это характерно для всех гистологических типов рака, но в большей степени для плоскоклеточного. Отмечено, что при прекращении курения риски значительно снижаются, в особенности для клеток бронхиального эпителия [Lubin, Blot, 1984].
Горение табака в сигаретах достигается при температуре 900 °С, это приводит к пиролизу, окислению, гидрогенизации, декарбоксилированию и дегидратации его компонентов. Было определено около 3000 химических веществ, входящих в состав табачного дыма. Обычно табачный дым преобладает в 2 фазах: в виде летучей или газообразной фазы; и в виде смолы или фазы частиц. Компоненты сигаретного дыма подразделяют на кислые, нейтральные и основные группы компонентов [Smoking and lung cancer: an overview, 1984].
Группа нейтральных компонентов содержит множество полиядерных ароматических углеводородов и проявляет большую часть канцерогенной активности, связанной с сигаретным дымом. К известным канцерогенам этой фракции относятся бензопирен и дибензантрацен, а также инсектициды на основе хлорированных углеводородов. Они вызывают как доброкачественные, так и злокачественные опухоли. Группа кислых компонентов содержит соединения, проявляющие коканцерогенную и опухолестимулирующую активность, а также ряд сильнодействующих мутагенов. Коканцерогены определяются как слабые канцерогены, которые усиливают активность других канцерогенов. К группе основных компонентов относятся никотин и W- нитрозонорникотин. Аналогичные соединения содержатся в кислой фракции табачной смолы [Van Duuren, 1973]. При сжигании табака из никотина и родственных ему алкалоидов образуется ряд канцерогенных нитрозаминов. Два из этих специфичных для табака нитрозаминов: W-нитрозонорникотин и 4-(метилнитрозамино)-1-(3-пиридил)-1-бутанон, являются исключительно сильными канцерогенами. Было высказано предположение, что высокая концентрация нитрозаминов в нюхательном табаке является причиной рака ротовой полости [Smoking and lung cancer: an overview, 1984].

Купить

1. Частота мутаций гена EGFR у 50 некурящих пациентов с аденокарциномой легкого составляет 36,0 %, из них 72,2 % мутаций выявлено у женщин, 27,8 % - у мужчин.
2. Оптимизирован метод поиска делеции 14 экзона гена МЕТ. Разработаны 2 пары специфичных праймеров к его нуклеотидной последовательности, и определена оптимальная температура их отжига, равная 60 °С.
3. Среди 32 пациентов с аденокарциномой легкого с отрицательным статусом мутации гена EGFR делеции 14 экзона гена МЕТ не обнаружено.

Купить