ИЗУЧЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ МАКРОФАГОВ ПРИ ИЗМЕНЕНИИ ПРОНИЦАЕМОСТИ МЕМБРАН КЛЕТОКРАЗЛИЧНЫМИ СПОСОБАМИ-Дипломная работа

Содержание

Введение 3
Глава 1. Обзор литературы 4
1.1. Биологический метод, вирус опосредованного трансфера гена 5
1.2. Методы невирусной доставки генов. Физические методы трансфекции...6
1.2.1. Электропорация как наиболее эффективный физический метод
трансфекции 9
1.3. Методы невирусной доставки генов. Химические методы трансфекции
(липоплексы, полиплексы, катионные наночастицы) 15
1.3.1. Липофекция 17
1.3.2. Химическая трансфекция с помощью полиплексов 18
1.4. Трансфекция РНК 19
Глава 2. Материалы и методы исследования 20
Глава 3. Полученные результаты и их обсуждение 28
Выводы 33
Список использованных источников 34
Приложения 42

Введение

Исследование изменения проницаемости мембран клеток под влиянием электрических импульсов позволит подобрать оптимальные условия (характеристики электрических импульсов, компоненты среды, в которой выполняется электропорация, осмотическое давление) для проведения трансфекции эукариотических клеток.
Объектом исследования явились мононуклеарные клетки человека.
Предметом исследования - проницаемость мембран клеток.
Цель исследования: изучить жизнеспособность макрофагов при изменении проницаемости мембран клеток при использовании различных условий электропорации.
Задачи исследования:
1. Освоить методику выделения моноцитов из периферической крови
доноров-добровольцев, культивирования и дифференцировки
мононуклеарных клеток.
2. Выполнить электропорацию клеток с использованием различных режимов.
3. Изучить жизнеспособность клеток после выполнения электропорации различными способами.
Выпускная квалификационная работа изложена на 45 страницах. Она состоит из оглавления, введения, трех основных глав, выводов. Список использованных источников насчитывает 70 наименований. В работе используются 1 таблица, 12 рисунков, 1 приложение.

Возникли сложности?

Нужна помощь преподавателя?

Помощь в написании работ!

ДИПЛОМНЫЕ МАГИСТЕРСКИЕ ДИССЕРТАЦИИ

КУРСОВЫЕ СТАТЬИ ВКР

Заключение

1. Освоены методики выделения моноцитов из периферической крови здоровых доноров-добровольцев, культивирования мононуклеарных клеток и их дифференцировки.
2. Выполнена электропорация клеток с использованием прибора Petri Pulser Electrode, BTX, Harvard Apparatus при различных импульсных характеристиках: 50 V - 3 импульса, 50V - 1 импульс, 10 V - 3 импульса.
3. Выявлено изменение жизнеспособности клеток после выполнения электропорации различными способами.

Литература

1. Соловьева, В.В. Перенос рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки (трансфекция) с помощью гистонов и других ядерных белков / В.В. Соловьева, Н.В. Кудряшова, А.А. Ризванов // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2011. - Том VI, №3. - С. 29-40.
2. Aluigi, M. Nucleofection is an efficient nonviral transfection technique for human bone marrowderived mesenchymal stem cells / M. Aluigi, M. Fogli, A. Curti, A. Isidori, E. Gruppioni, C. Chiodoni, M.P. Colombo, P. Versura, A. D’Errico-Grigioni, E. Ferri, M. Baccarani, R.M. Lemoli // Stem Cells. - 2006. - Vol. 24. - P. 454-461.
3. Balicki, D. Structure and function correlation in histone H2A peptide- mediated gene transfer / D. Balicki, C.D. Putnam, P.V. Scaria et al. // PNAS USA.
- 2002. - Vol. 99, No 11. - P. 7467-7471.
4. Bangari, D.S. Current strategies and future directions for eluding adenoviral vector immunity / D.S. Bangari, S.K. Mittal // Curr Gene Ther. - 2006.
- Vol. 6. - P. 215-226.
5. Barrett, L.E. Region-directed phototransfection reveals the functional significance of a dendritically synthesized transcription factor / L.E. Barrett, J.Y. Sul, H. Takano, E.J. Van Bockstaele, P.G. Haydon, J.H. Eberwine // Nature Methods. - 2006. - Vol. 3(6). - P. 455-460.
6. Bushman, F. Genome-wide analysis of retroviral DNA integration / F. Bushman, M. Lewinski, A. Ciuffi, S. Barr, J. Leipzig, S. Hannenhalli, C. Hoffmann // Nat Rev Microbiol. - 2005. - Vol. 3. - P. 848-858.
7. Cai, D. Highly efficient molecular delivery into mammalian cells using carbon nanotube spearing / D. Cai, J.M. Mataraza, Z.-H. Qin, Z. Huang, J. Huang, T.C. Chiles, D. Carnahan, K. Kempa, Z. Ren // Nature Methods. - 2005. - Vol. 2. - P. 449-454.
8. Chen, C. Membrane electroporation theories: a review / C. Chen, S.W. Smye, M.P. Robinson, J.A. Evans // Med Biol Eng Comput. - 2006. - Vol. 44. - P. 5-14.
9. Dobson, J. Gene therapy progress and prospects: magnetic nanoparticle-based gene delivery / J. Dobson // Gene Therapy. - 2006. - Vol. 13(4).
- P. 283-287.
10. Eisenbraun, M.D. Examination of parameters affecting the elicitation of humoral immune responses by particle bombardment-mediated genetic immunization / M.D. Eisenbraun, D.H. Fuller, J.R. Haynes // DNA Cell Biol. - 1993.
- Vol. 12, No 9. - P. 791-797.
11. Ewert, K.K. Non-viral gene delivery with cationic liposome-DNA complexes / K.K. Ewert, A. Ahmad, N.F. Bouxsein, H.M. Evans, C.R. Safinya // Methods Mol Biol. - 2008. - Vol. 433. - P. 159-75.
12. Flotte, T.R. Gene therapy: The first two decades and the current state- of-the-art / T.R. Flotte // J Cell Physiol. - 2007. - Vol. 213. - P. 301-305.
13. Fontaine, C. The orphan nuclear receptor Rev-Erbalpha is a peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) gamma target gene and promotes PPARgamma-induced adipocyte differentiation / C. Fontaine, G. Dubois, Y. Duguay, T. Helledie, N. Vu-Dac, P. Gervois, F. Soncin, S. Mandrup, J.C. Fruchart, J. Fruchart-Najib, B. Staels // J Biol Chem. - 2003. - Vol. 278. - P. 37672-37680.
14. Gehl, J. Electroporation: theory and methods, perspectives for drug delivery, gene therapy and research / Gehl, J. // Acta Physiologica Scandinavica. - 2003. - Vol. 177, No 4. - P. 437-447.
15. Glover, D.J. Towards safe, non-viral therapeutic gene expression in humans / D.J. Glover, H.J. Lipps, D.A. Jans // Nat Rev Genet. - 2005. - Vol. 6(4).
- P. 299-310....70