Введение 3
Глава 1. Обзор литературы 4
1.1. Биологический метод, вирус опосредованного трансфера гена 5
1.2. Методы невирусной доставки генов. Физические методы трансфекции...6
1.2.1. Электропорация как наиболее эффективный физический метод
трансфекции 9
1.3. Методы невирусной доставки генов. Химические методы трансфекции
(липоплексы, полиплексы, катионные наночастицы) 15
1.3.1. Липофекция 17
1.3.2. Химическая трансфекция с помощью полиплексов 18
1.4. Трансфекция РНК 19
Глава 2. Материалы и методы исследования 20
Глава 3. Полученные результаты и их обсуждение 28
Выводы 33
Список использованных источников 34
Приложения 42
Исследование изменения проницаемости мембран клеток под влиянием электрических импульсов позволит подобрать оптимальные условия (характеристики электрических импульсов, компоненты среды, в которой выполняется электропорация, осмотическое давление) для проведения трансфекции эукариотических клеток.
Объектом исследования явились мононуклеарные клетки человека.
Предметом исследования - проницаемость мембран клеток.
Цель исследования: изучить жизнеспособность макрофагов при изменении проницаемости мембран клеток при использовании различных условий электропорации.
Задачи исследования:
1. Освоить методику выделения моноцитов из периферической крови
доноров-добровольцев, культивирования и дифференцировки
мононуклеарных клеток.
2. Выполнить электропорацию клеток с использованием различных режимов.
3. Изучить жизнеспособность клеток после выполнения электропорации различными способами.
Выпускная квалификационная работа изложена на 45 страницах. Она состоит из оглавления, введения, трех основных глав, выводов. Список использованных источников насчитывает 70 наименований. В работе используются 1 таблица, 12 рисунков, 1 приложение.
1. Освоены методики выделения моноцитов из периферической крови здоровых доноров-добровольцев, культивирования мононуклеарных клеток и их дифференцировки.
2. Выполнена электропорация клеток с использованием прибора Petri Pulser Electrode, BTX, Harvard Apparatus при различных импульсных характеристиках: 50 V - 3 импульса, 50V - 1 импульс, 10 V - 3 импульса.
3. Выявлено изменение жизнеспособности клеток после выполнения электропорации различными способами.
