Совершенствование экспрессных методов индикации микобактерий туберкулеза

ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА 1. Анализ эпидемиологической обстановки по туберкулёзу и современного состояния экспресс-диагностики его возбудителя (обзор литературы) 14
1.1. Эпидемиологическая обстановка по туберкулезу в России. 14
1.2. Анализ современного состояния конструирования диагностических препаратов и индикации возбудителя туберкулеза. 22
1.3. Носители иммобилизованных систем твёрдофазного иммуноанализа 39
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. Материалы и методы 48
2.1. Штаммы микроорганизмов, взятые в работу 48
2.2. Питательные среды, условия культивирования микроорганизмов 48
2.3. Объекты исследования 54
2.4. Получение антигенных комплексов микроорганизмов 54
2.5. Лабораторные животные, использованные в экспериментах 54
2.6. Методы иммунизации животных 55
2.7. Методы контроля антигенов и сывороток 55
2.8. Выделение иммуноглобулинов 55
2.9. Получение и контроль иммунофлуоресцирующих конъюгатов 56
2.10. Получение и контроль липосом 56
2.11. Получение и контроль иммуноферментных конъюгатов 56
2.12. Физико-химические методы
56
2.13. Иммунохимические методы анализа 57
2.14. Лиофилизация биологического материала 57
2.15. Характеристика реагентов, используемых для получения магно- иммуносорбентов
2.16. Методы математической и статистической обработки материалов
ГЛАВА 3. Получение высокоактивного специфического биологического сырья (антигенов и антител) для конструирования диагностических препаратов
3.1. Получение антигенных комплексов микобактерий туберкулёза
3.2. Получение специфической туберкулёзной сыворотки
ГЛАВА 4. Получение иммуноферментных препаратов для экспресс-диагностики туберкулёза
4.1. Получение иммунопероксидазного конъюгата
4.2. Получение липосом и липосомально-иммунопероксидазного конъюгата
ГЛАВА 5. Получение туберкулёзных суспензионных диагности- кумов
5.1. Биотехнология изготовления латексного диагностикума
5.2. Разработка биотехнологии получения алюмосиликатного диагно- стикума
ГЛАВА 6. Конструирование магнитоуправляемых иммуносорбентов для экспресс-диагностики микобактерий туберкулёза
6.1. Разработка метода селективного концентрирования возбудителя туберкулёза на магноиммуносорбенте с последующей постановкой иммуноферментного анализа.
6.2. Разработка метода селективного концентрирования возбудителя туберкулёза на магноиммуносорбенте с последующей постановкой количественного иммунофлуоресцентного анализа
ГЛАВА 7. Изучение диагностической ценности разработанных диагностикумов и тест-систем для выявления антигена
возбудителя туберкулеза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 118
ВЫВОДЫ 128
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 148
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 149
ПРИЛОЖЕНИЯ ОТСУТСТВУЮТ

Купить

Анализ сложившейся эпидемиологической ситуации показывает, что заболеваемость туберкулёзом в нашей стране носит характер эпидемии (Онищенко Г.Г., 2002; Пунга В.В., Капков Л.П., 1999). По данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) в промежутке времени с 2000 по 2020 гг. туберкулёзом в мире заболеют около 200 млн. человек, умрут около 35 млн. человек, будут инфицированы приблизительно 1 млрд. человек (WHO Fact Sheet, 2000). В связи с этим, одной из важных задач мировой медицины является разработка надёжных (активных и специфических), простых в использовании и дешёвых средств для быстрого выявления возбудителя в исследуемом материале.
В нашей стране при диагностике туберкулёза большое внимание уделяется культуральным методам, за рубежом - микроскопии мазка. Но оба эти метода имеют существенные недостатки. Культивирование с момента посева составляет три месяца, причём положительных результатов- 0,5-14 % (Клименко М.Т. с соавт, 1985; Клименко М.Т. с соавт., 1987; Литвинов В.И., 1996). При микроскопии мазка (флуоресцентной) наблюдается до 14 % положительных результатов (Канюк А.Н., 1995). Таким образом, данные методы не могут претендовать на роль основных в лабораторной диагностике туберкулёза. Известны способы диагностики туберкулёза с помощью эритроцитарных диагностикумов (Архангельский Н.И. с соавт., 1985), реакции аг- регатагглютинации (Хоменко А.Г. с соавт,1992), реакции агглютинации латекса, масс-спектроскопии (Маякова Т.И. с соавт., 1995), но данные методы трудоёмки и малоактивны. Существуют препараты для ПЦР-диагностики, но они отличаются значительной дороговизной и сложностью исполнения и поэтому распространения ещё не получили. В связи с этим, актуальным является разработка диагностических препаратов и методов исследований, обладающих высокой специфической активностью, экспрессностью и информативностью.
ЦЕЛЬ И ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Цель исследования:
совершенствование биотехнологий иммунобиологических препаратов для экспресс-диагностики микобактерий туберкулёза.
Основные задачи исследования:
- отработать методические подходы по извлечению полноценных антигенных комплексов из микробных биомасс возбудителя туберкулёза и получить высокоактивные иммунные туберкулёзные сыворотки;
- разработать магнитные сорбенты с фиксированными на их поверхности антигенами гетерологичных штаммов для удаления из туберкулёзных иммунных сывороток неспецифических антител;
- отработать биотехнологию изготовления высокочувствительных и стабильных туберкулёзных липосомально-иммунопероксидазных конъюгатов;
- разработать эффективные способы получения суспензионных диагности- кумов на основе полиакролеиновой (латексной) и алюмосиликатной матриц для реакций агглютинации;
- отработать биотехнологию аффинных сорбентов с магнитными свойствами для диагностики туберкулёза в экспрессных методах (иммуноферментном анализе - ИФА, количественном иммунофлуоресцентном анализе - КИФА);
- определить диагностическую ценность применения разработанных иммунобиологических препаратов на экспериментальном и клиническом материале.
...
Купить