ВВЕДЕНИЕ 3
Глава 1 Обзор литературы 5
1.1. Антропогенное загрязнение атмосферного воздуха в городах и методы
оценки уровня загрязнения атмосферного воздуха в России и за рубежом 5
1.1.1 Контактные методы экологического контроля 6
1.1.2. Дистанционные методы экологического контроля 10
1.1.3. Биологические методы экологического контроля 12
1.2. Биолюминесцентный метод оценки качества воздуха 16
1.2.1. Светящиеся бактерии в роли биотестов 16
1.2.2. Биотесты на основе использования ферментативных реакций
светящихся бактерий 19
1.2.3. Воздействие химических соединений на биолюминесцентные тест-объекты 22
Глава 2 Материалы и методы 25
2.1. Пробообработка 25
2.2. Реактивы и материалы 27
2.3. Методика определения активности биферментной системы НАДН:ФМН-
оксидоредуктаза-люцифераза 28
Глава 3 Результаты исследований 30
3.1. Влияние проб воздуха, отобранных с помощью сорбционных трубок, на
активность биферментной системы светящихся бактерий 30
3.2. Влияние проб воздуха, отобранных с помощью медицинских шприцов, на
активность биферментной системы светящихся бактерий 35
3.3. Влияние проб воздуха, отобранных с помощью аспиратора и сосудов
Рихтера на активность биферментной системы светящихся бактерий 37
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 42
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 43
В связи с быстрыми темпами развития промышленности вблизи городов, остро стоит вопрос о решении проблем связанных с выбросами данных предприятий в атмосферу воздуха. Масштаб негативного воздействия на атмосферный воздух неизменно растет, увеличиваются объемы выбросов загрязняющих веществ, растут территории их распространения, тем самым увеличивается отрицательное воздействие не только на здоровье населения, но и на всю экологическую систему планеты (Branco et al., 2014, Rich, 2017, Davalos et al., 2017).
Согласно данным Федеральной службы государственной статистики в 2016году Красноярск находился на 11 месте в рейтинге самых грязных городов России (Андреева, 2016). Общий годовой объем выбросов в атмосферу Красноярска составил около 270 тыс. тонн. Несмотря на то, что Красноярск занимает 11 место в этом рейтинге по экологическим параметрам выбросы в городе Красноярск намного опаснее (преобладание диоксида углерода, формальдегидов, оксидов серы и т.д.), чем в других городах, которые расположены в рейтинге выше.
В Красноярске все чаще стали вводить режим неблагоприятных метеорологических условий (НМУ) препятствующих рассеиванию вредных примесей в воздухе, так называемый режим «черного неба», часто сопровождающийся превышением ПДК вредных веществ в атмосфере. В 2016 году режим НМУ составил 59 дня, а в первом полугодии 2017 года 36 дней. В эти периоды были зафиксированы жалобы жителей Красноярска на приступы удушья, неприятные запахи, привкус хлора на губах (Андреева, 2016).
По данным аналитического обзора Федеральной службы по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды (Росгидромед), доля загрязняющих веществ в городе Красноярск, от автомобилей составляет около 46% от общего числа выбросов. Из промышленных загрязнителей
Результаты мониторинга проводимого ФГБУ "Среднесибирское управление гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды" отражают загрязнения лишь малого количества вредных веществ (формальдегид, фенол, бензапирен, бензол, аммиак, сероводород и т.д., всего 21 вещество) и не представляют реальной картины загрязнения атмосферного воздуха.
Поэтому исследование возможности проведения комплексного метода оценки уровня загрязнения атмосферного воздуха является актуальным. В данной работе предлагается новый методологический подход, для комплексного мониторинга атмосферного воздуха основанный на использовании ферментативных биолюминесцентных систем.
Цель данной работы заключалась в оценке возможности использования ферментативной биолюминесцентной системы светящихся бактерий для комплексного мониторинга загрязнения атмосферного воздуха.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Определить способ пробоотбора атмосферного воздуха для биолюминесцентного анализа;
2. Определить условия проведения биолюминесцентного анализа,обеспечивающие чувствительность к пробам воздуха.
Положения, выносимые на защиту магистерской диссертации:
1. Возможность использования биолюминесцентных платформенных технологий для оценки уровня загрязнения воздуха;
2. Условия проведения биолюминесцентного анализа проб атмосферного воздуха.
Работа выполнена на кафедре биофизика в СФУ, в лаборатории биолюминесцентных технологий.
На основании полученных экспериментальных данных можно сделать следующие выводы:
1. Оптимальным способом пробоотбора атмосферного воздуха в целях использования биолюминесцентного анализа для мониторинга атмосферного воздуха является отбор проб при помощи переносного аспиратора и сосудов Рихтера.
2. Подобраны условия пробоотбора, обеспечивающие чувствительность биферментной системы светящихся бактерий к пробам воздуха. Минимальный объем аспирируемого воздуха должен составлять 60 л. для поглотителей: дисцилированная вода, этиловый спирт; 20 л. для поглотителя ацетон. Остаточная интенсивность свечения биферментной системы составила 80%, 70% и 60% соответственно.
3. Полученные результаты исследования свидетельствуют о возможности применения биолюминесцентных платформенных технологий на основе биферментной системы светящихся бактерий для комплексной оценки загрязнения воздуха.
1. Андреева Е.Ю. Экология Красноярска - реальность и будущее / Е.Ю. Андреева // Сборник мат-лов Межд. конф. студ. аспир. и мол.ученых « Проспект Свободный-2016», Красноярск.-2016. С.3-6.
2. Бубнов А. Г. Биотестовый анализ - интегральный метод оценки качества объектов окружающей среды: учебно-методическое пособие / А. Г. Бубнов, С.А. Буймова, А.А. Гущин, Т.В. Цвекова; ГОУ ВПО Иван.гос.хим-технол.ун-т. -Иваново, 2007. -112С.
3. Вартанов А.З. Методы и приборы контроля окружающей среды и экологический мониторинг: учебно-методическое пособие/ А.З. Вартанов, А.Д. Рубан, В.Л. Шкуратник. -Москва: Изд-во «Горная книга» гос.горн.ун-та, 2009.-640 с.
4. Гиль Т.А. Гашение люминесценции светящихся бактерий как тест для оценки токсичности фенольных компонентов стоков / Т.А. Гиль, А.Э. Балаян, Д.П. Стом //Микробиология, 1983. - Т.52, N6. - С. 1014-1016.
5. Гительзон И.П. Живой свет океана /И.П. Гительзон // Москва: Наука. - 1976. -120 с.
6. Гительзон И. И. Светящиеся бактерии. / Гительзон И.П. Родичева Э. К., Медведева С. Е. и др. //Новосибирск: Наука. -1984.
7. Голиков, Р.А. Характеристика риска здоровья от выбросов и сбросов в
условиях реструктуризации промышленности крупного города: дис. ... канд. мед.наук: 14.02.01/ Голиков Роман Анатольевич. -Новокузнецк,2015. -137 с.
8. ГОСТ 17.2.3.01-86 Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов. - Взамен ГОСТ 17.2.3.01-77; Введ. 01.01.1987. - М.: Изд-во стандартов, 1987. 5 с.
9. Григорьев Ю.С. Биоиндикация загрязнений воздушной среды на основе замедленной флуоресценции хлорофилла листьев и феллодермы деревьев/ Ю.С. Григорьев, М.А. Бучельников // Экология. -1999. - № 4. - С. 303 - 305.
10. Григорьев Ю.С. Флуоресценция хлорофилла в биоиндикации загрязнения воздушной среды / Ю.С. Григорьев // Вестник МАНЭБ т.10, №4: 2005. - с. 77-91.
11. Данилов В. С. Бактериальная биолюминесценция /В.С. Данилов, Н.С. Егоров // Москува: МГУ. -1990.-152 с.
12. Дерябин Д.Г. Бактериальная биолюминесценция: фундаментальные и прикладные аспекты. // М.: Наука. - 2009. - с. 246.
13. Есимбекова Е.Н. Биолюминесцентный экспресс метод определения интегральной токсичности воды и загрязнения воздуха / Е.Н. Есимбекова, Н.В. Римацкая, Н.Е. Суковатая, В.А. Кратасюк // Вестник ОГУ. -2013. -№ 10. - С. 122-127.
14. Качество атмосферного воздуха и здоровье [Электронный ресурс]: Центр
СМИ ВОЗ, информационный бюллетень. / Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ), 2016. - Режим доступа:
http: //www.who. int/mediacentre/factsheets/fs313/ru/
15. Качество воздуха в крупнейших городах России за десять лет 2005-2016: аналитический обзор / ГУ «ГГО», Росгидромед, -Санкт-Петербург, -2016, -133с.
16. Кратасюк В.А. Использование светящихся бактерий в биолюминесцентном анализе / В.А. Кратасюк, И.П. Гительзон //Успехи микробиологии, 1987 - N21 - С. 3-30.
17. Кратасюк В.А. Бактериальная биолюминесценция и биолюминесцентный анализ / В.А. Кратасюк, И.П. Гительзон // Биофизика.- 1982.- Т. 27.- 6. - С. 937 - 953.
18. Кратасюк В.А. Люциферазное биотестирование: биофизические основы, методы и применение: Дис. ... док.биол. наук / В.А. Кратасюк - Красноярск, 1994. - М. 377 с.
19. Кудряшева Н.С. Закономерности ингибирования бактериальной
биолюминесценции invitro хинонами и фенолами - компонентами сточных вод / Н.С. Кудряшева, Е.В. Шалаева, Е.Н. Задорожная, В.А. Кратасюк // Биофизика, 1994. - Т.39, N3. - С. 455-464.
20. Кудряшева Н.С. Действие солей металлов на бактериальные биолюминесцентные системы различной сложности / Н.С. Кудряшева, Е.В. Зюзикова, Т.В. Гутник, А.М. Кузнецов // Биофизика. - 1996. - Т. 41. - 6. - С. 1264 - 1269.
21. Кудряшева Н.С. Физико-химические основы биолюминесцентного анализа / Н.С. Кудряшева, В.А. Кратасюк, Е.Н. Есимбекова// Учебное пособие, - Красноярск: Изд-во КрасГУ, 2002. - 154 с.
22. Кузнецов А.М. Изучение характеристик реагентов для биолюминесцентных биотестов / А.М. Кузнецов, Н.А. Тюлькова, В.А. Кратасюк, В.В. Абакумова, Э.К. Родичева // Сибирский экологический журнал; Красноярск, 1997. - № 5 - С. 459-465.
23. Куц В. В. Ингибиторное действие фенольных экотоксикантов на фотобактерии при различных значениях pH. / В.В. Куц, Ю.М. Ильина, А.Д. Исмаилов, А.И. Нетрусов // Прикл. Биохим. Микробиол. - 2005. - №6. - с. 640-646.
24. Мелехова О.П. Биологический контроль окружающей среды:
биоиндикация и биотестирование: учебное пособие / О.П. Мелехова, Е.Н. Егорова, Т.Н. Евсеева, В.М. Глазер и др.// Москва: Академия. -2007. - 288 С.
25. МУК 1611-77-1719-77. Методическое указания на определение вредных веществ в воздухе - М.: М3 СССР, 1977.- вып.1-5.
26. Неверова О.А. Применение фитоиндикации в оценке загрязнения окружающей среды / О.А. Неверова // Биосфера.- 2012. -Т.1. -№1. -С. 82-92.
27. Никитин О.В. Контроль источников загрязнения атмосферного воздуха / О.В. Никитин. - Казань: Казан.ун-т, 2014. - 32 с.
28. РД 52.04.186-89 Руководство по контролю загрязнения атмосферы. - Введ. 01.07.1991. - М.: Гидрометеоиздат, 1991. - 327с.
29. РД 52.04.823-2015 Руководящий документ. «Массовая концентрация формальдегида в пробах атмосферного воздуха. Методика измерений фотометрическим методом с ацетилацетоном».
30. РД 52.04.799-2014 Руководящий документ «Массовая концентрация
фенола в пробах атмосферного воздуха. Методика измерений фотометрическим методом с использованием 4-аминоантипирина».
31. РД 52.04.792-2014 Руководящий документ «Массовая концентрация оксида и диоксида азота в пробах атмосферного воздуха. Методика измерений фотометрическим методом с использованием сульфаниловой кислоты и I-нафтиламина».
32. РД 52.04.793-2014 Руководящий документ «Массовая концентрация хлорида водорода в пробах атмосферного воздуха. Методика измерений фотометрическим методом».
33. РД 52.04.795-2014 Руководящий документ «Массовая концентрация сероводорода в пробах атмосферного воздуха. Методика измерений фотометрическим методом по реакции образования метиленовой синей».
34. Ревазова Ю.А. Методические рекомендации 01.020-07 Определение токсичности воздушной среды с помощью биотеста «Эколюм»: методические рекомендации разработаны: ГУ НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН (Ревазова Ю.А., Хрипач Л.В.), МГУ им.Ломоносова (Данилов В.С., Князев Т.А.). ФГУЗ ФЦГиЭРоспотребнадзора (Брагина И.В., Ластенко Н.С., Федосеева Т.А.) - М., 2007. - 15с.
35. Соколов С.М. Количественные критерии гигиенической оценки воздействия на организм многокомпонентного загрязнения атмосферного воздуха // С.М. Соколов, Л.М Шевчук // Вестник ВГМУ, Минск. -2015. - Т.14. -№4. - С.86-91.
36. Соколов С. М.К вопросу оценки риска здоровью населения загрязнения атмосферного воздуха // С. С. Соколов, Л.М. Шевчук, А.Н. Ганькин, Н.С. Позняк // Вестник ВГМУ, Минск. -2015. -Т.14. -№4. - С. 92-97.
37. Туровцев В.Д. Биоиндикация: учебное пособие /В.Д. Туровцев, В.С. Краснов // Тверь: ТвГУ. -2005. -178 С.
38. Тушкова Г.Н. Экотоксикологическая оценка поверхностных и подземных вод Алтайского края / Г.Н. Тушкова, Л.С. Эрнестова, И.В. Семенова, Н.А. Рябченко //В кн. Ядерные испытания, окружающая среда, здоровье населения Алтайского края - Т.2, кн.2 - Изд-во АГУ, Барнаул, 1993. - С. 112-123.
39.Чеснокова С. М. Биологические методы оценки качества объектов
окружающей среды : учеб.пособие. В 2 ч. Ч. 1. Методы биоиндикации / С. М. Чеснокова ;Владим. гос. ун-т. - Владимир :Изд- во Владим. гос. ун-та, 2007. - 84 с.
40.Чеснокова С. М. Биологические методы оценки качества объектов
окружающей среды : учеб.пособие. В 2 ч. Ч. 2. Методы биотестирования / С. М. Чеснокова ;Владим. гос. ун-т. - Владимир :Изд- во Владим. гос. ун¬та. - 2008. - 92 с.
41. Якунина И.В. Методы и приборы контроля окружающей среды. Экологический мониторинг: учебное пособие/ И.В. Якунина, Н.С. Попов. -Тамбов: Изд-во Тамб. гос. техн. ун-та, 2009. -188с.
42. Adams M.D. A criticality index for air pollution monitors / M.D. Adams, P.S.
Kanaroglou // Atmospheric pollution research. -2016. -№7. -P.482-487.
43. Adersen Z.J. Newborns health in the Danube Region: Environment,
biomonitoring, interventions and economic benefits in a large prospective birth cohort study / Z.J. Adersen, R.J. Sram, M. Scasny, E.S. Gurzau et al..// Environment International. -2016. -№88. -P. 112-122.
44. Annangi B. Biomonitoring of humans exposed to arsenic, chromium, nickel, vanadium, and complex mixtures of metals by using the micronucleus test in lymphocytes / B. Annangi, S. Bonassi, R. Marcos, A. Hernandez // Mutation Research. - 2016. -№ 770. - P. 140-161.
45. Bansal P. Biomonitoring of air pollution using antioxidative enzyme system in two genera of family Pottiaceae (Bryophyta) / P. Bansal, S. Verma, A.Srivastaya // Environmental pollution, India. -2016. -№ 216. -P. 512-518.
46. Baumann P. Revaluation of the taxonomy of Vibrio, Beneckeaand Photobacterium: abolition of the genus Beneckea./Baumann P., Baumann L., Bang S., Woolkalis M. // Curr. Microbiol. - 1980. - V. 4(3). P. 127-132.
47. Baumann L.The marine gram-negative eubacteria. /Baumann L., Baumann P. // In The procariotes. Stuttgart. Springer-Verlag. - 1981. - P. 83-181.
48. Baumann P. Evolutionary relationships in Vibrio and Photobacterium. A basis for a natural classification./Baumann P., Baumann L., Woolkalis M., Bang S. // Ann. Rev. Microbiol. - 1983. - V. 37. - P.363-398.
49. Belkin Sh. Microbial whole-cell sensing systems of environmental pollutants. // Current Opinion in Microbiology. - 2003. -V.6(3). - P. 206-212.
50. Branco P.T.B.S. The microenvironmental modelling approach to assess children's exposure to air pollution / P.T.B.S. Branco, M.C.M. Alvim-Ferraz, F.G. Martins, S.I.V. Sousa // Environmental Research, 2014. №135. P.317¬332.
51. Bulich A.A Use of the luminescent bacterial system for the rapid assessment of aquatic toxicity / A.A. Bulich, D.Z. Isenberg // Instrum. Soc. Am. Tranc., 1981. - V.20, N1. - P. 29-33.
52. Bulich A. A. A practical and reliable method for monitoring the toxicity of aquatic samples. // Process Biochem. -1982. - V.17. - P.45-47.
53. Danilov V.S. Bacterial luciferase as a biosensor of biologically active compounds. / V.S. Danilov, A.D. Ismailov // In Applied Biosensors, D.Wise ed., Boston. - 1989. - P. 39 -78 .
54. Davalos A. D.Current approaches used in epidemiologic studies to examineshort-term multipollutant air pollution exposures / A. D. Davalos, T. J. Luben, A. H. Herring, J. D. Sacks // Annals of Epidemiology, 2017. № 27. P. 145-153.
55. Gillespie J. Estimation of spatial patterns of urban air pollution over a 4-week period from repeated 5-min measurements / J. Gillespie, N. Masey, M. R. Heal, S. Hamilton, I.J. Beverland // Atmospheric Environment, 2017. №150. P. 295-302.
56. Hastings J.W. Total quantum flux of isotropic sources / J.W. Hastings, G. Weber // Opt. Soc. Am. - 1963. - V.53(12). - P.1410-1415.
57. Hastings J.W. Molecular mechanism in bacterial bioluminescence: on energy storage intermediates and role of aldehyde in the reaction. / J.W. Hastings, Q.H. Gibson, J. Friedland, J. Spudich // Bioluminescence in progress. Acad. Press. - 1965. - P. 151-186.
58. Hastings J.W. Bioluminescence. // Annuel Rev. Biochem. 1968. - V.37. - P. 597-630.
59. Hastings J.W. Structurally-distinct bacterial luciferases / J.W. Hastings, K. Weber, J. Friedland, A. Eberhard, F.W. Mitchell, A. Gunsales // Biochemistry. - 1969. - V.8 (12). - P. 4681-4689.
60. Hastings J.W. and Nealson K.H. Bacterial Bioluminescence // Annu. Rev. Microbiol. - 1977. - V.31. - P. 549-595.
6 1 .Hastings J.W. Biochemistry and physiology of bioluminescent bacteria. / J.W. Hastings, C.J. Potrikus, S.C. Gupta, M. Kurfurst, J.C. Makemson // Adv. Of microb. Physiol. - 1985. - V. 26. - P. 235-291.
62.Heitzer A. Optical biosensor for environmental on-line monitoring of naphthalene and salicylate bioavailability with an immobilized bioluminescent
catabolic reporter bacterium. / A. Heitzer, K. Malachowsky, J. E. Thonnard, P.
R. Bienkowski, D.C. White, and G. S. Sayler // Applied and Environmental Microbiology. - 1994. - V.60(5). - P.1487-1494.
63.Iodice P. Air pollution monitoring using emission inventories combined with the moss bag approach / P. Iodice, P.Adamo, F.Capozzi, A.Di Palma, A. Spagnuolo, S. Giordano // Science of the total environment, Italy. -2016. - №541.-P. 1410-1419.
64. KalinovicT.S. Elder, linden and pine biomonitoring ability of pollution emitted from the copper smelter and the tailings ponds / T.S. Kalinovic, S.M. Serbula, A.A. Radojevic, J.V. Kalinovic, M. M. Steharnik, J.V. Petrovic // Geoderma. - 2016. -№262. -P. 266-275.
65. KratasyukV.A.
PolymerImmobilizedBioluminescentSystemforBiosensorandBioinvestigations / V.A. Kratasyuk, E.N. Esimbekova // PBMSeries - 2003.-V.1/ - P 307-341.
66. Rich D. Q. Accountability studies of air pollution and health effects: lessons learnedand recommendations for future natural experiment opportunities / D. Q. Rich // Environment International, 2017. № 100. P. 62-78.
67.Salo H. Biomonitoring of air pollution in SW Finland by magnetic and chemical measurements of moss bags and lichens / H. Salo, M.S. Bucko, E. Vaahtovuo, J. Limo, J. Makinen, L.J. Pesonen // Journal of geochemical exploration, Finland. -2012. -№115. - P.69-81.
68.Sawidis T. Trees as bioindicator of heavy metal pollution in three European cities / T. Sawidis, J. Breuste, M. Mitrovic, P. Pavlovic, K. Tsigaridas // Environmental pollution. -2011. -№ 159. -P. 3560-3570.
69.Shilo M. Physiological characteristics underlying the distribution patterns of luminous bacteria in the Mediterranean sea and the gulf of Elate./ M. Shilo, T. Yetinson // Appl. Envirom. Microbiol. 1979. - V.38(4), P.577-584.
70.Shimomura O. The aldehyde content of luminous bacteria and of an “aldehydeless” dark mutant. / Shimomura O., Johnson F.H., Morise H. // Proc.
Natl. Acad. Sci.USA. -1974. - V.71(12). - P. 4666-4668.
71.Shimomura O. Bioluminescence: Chemical principles and methods. / Shimomura O. // New Jersey: World Sci. Pub. - 2008. - P. 470.
72. Tarricone K. Toward standardization of sample collection and preservation for the quality of results in biomonitoring with trees / K. Tarricone, G. Wagner, R. Klein // Ecological indicators, Germany. - 2015. -№ 57. -P.341-359.
73. Vukovic G. Activemoss biomonitoring for extensive screening of urban air pollution: Magnetic and chemical analyses / G. Vukovic, M. A. Urosevic, Z. Goryainova, M. Pergal, S. Skriyanj, R. Samson, A. Popovic // Science of the total environment. -2015. -№ 521-522. - P. 200-210.
74. Yordan A.Z. Toxicant detector / A.Z. Yordan, E.R. Schnauss, E.H. Sie, A. Thanos // Pat. USA, 1968. - N 3370175.