Выявление технологически значимых денатурирующих воздействий по уровню олигомеризации и фрагментирования фракций, обогащенных IgG и альбуминами (Удмуртский государственный университет)
|
Есть приложения.
Список сокращений……………3
ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………....4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……8
1.1Общая характеристика иммуноглобулина G 8
1.2 Альбумин.Структура,свойства,функции…14
1.3Инфекционная безопасность плазмы крови19
1.4 Применение фенола в качестве дезинфиктанта ………..…………...………24
1.5 Фракционирование белков сульфатом аммония ……………….…….……. .28
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………32
2.1. Материалы………………………………33
2.2. Приборы и дорогостоящая исследовательская техника…………………….33
2.3. Методы исследования………34
2.3.1. Получение полуфабрикатов………………34
2.3.2. Определение концентрации белка…34
2.3.3. Определение цветности и мутности раствора……………………………..34
2.3.4. Установление заданного рН………34
2.3.5. Диск-электрофорез……………34
2.3.6. Эксклюзионная хроматография……35
2.3.7. Микробиологический анализ……35
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ…37
3.1Получение гамма-глобулинового и альбуминового полуфабриката………..38
3.2 Влияние дезинфектанта гидрофобной природы и неионного детергента на белки гидрофобной природы (иммуноглобулин)……42
3.3 Влияние дезинфектанта гидрофобной природы и неионного детергента на белки гидрофобной природы (альбумин)……46
3.4Микробиологический анализ образцов ……50
ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………...51
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………….52
ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………………….58
Список сокращений……………3
ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………....4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……8
1.1Общая характеристика иммуноглобулина G 8
1.2 Альбумин.Структура,свойства,функции…14
1.3Инфекционная безопасность плазмы крови19
1.4 Применение фенола в качестве дезинфиктанта ………..…………...………24
1.5 Фракционирование белков сульфатом аммония ……………….…….……. .28
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………32
2.1. Материалы………………………………33
2.2. Приборы и дорогостоящая исследовательская техника…………………….33
2.3. Методы исследования………34
2.3.1. Получение полуфабрикатов………………34
2.3.2. Определение концентрации белка…34
2.3.3. Определение цветности и мутности раствора……………………………..34
2.3.4. Установление заданного рН………34
2.3.5. Диск-электрофорез……………34
2.3.6. Эксклюзионная хроматография……35
2.3.7. Микробиологический анализ……35
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ…37
3.1Получение гамма-глобулинового и альбуминового полуфабриката………..38
3.2 Влияние дезинфектанта гидрофобной природы и неионного детергента на белки гидрофобной природы (иммуноглобулин)……42
3.3 Влияние дезинфектанта гидрофобной природы и неионного детергента на белки гидрофобной природы (альбумин)……46
3.4Микробиологический анализ образцов ……50
ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………...51
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………….52
ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………………….58
В настоящее время уже нет сомнения, что биосферно - экологический
кризис на нашей планете – объективная реальность. Он продолжает
интенсивно развиваться, проявляясь прежде всего в том, что мы называем ухудшение качества жизни.
Существующая технократическая цивилизация, ее промышленный
и агропромышленный уклады абсолютно безжалостны к природе планеты [11].
Внимание так же стоит уделить биологическим отходам. Особое внимание уделяют утилизации биоресурсов, способные распространять опасные заболевания [12]. Следует обратить внимание на биологические отходы категорийных компаний животноводства и здравоохранения, которые массово производят опасные ресурсы, в составе которых входит возможный диапазон белков человеческого и животного происхождения.
Технология рекомбинантных ДНК при производстве терапевтических средств и методы очистки атмосферы вод и почвы с использованием биологических объектов не являются универсальными способами решения проблем в области здравоохранения и экологии [49].
В рамках стратегии очистки территории от биологических загрязнений предполагается изучить возможность использования невостребованных биоресурсов для сырьевого обеспечения предприятий фармацевтической биоиндустрии.
Распространение инфекций за счёт наличия в составе фармацевтических биопрепаратов вирусных агентов с позиций ВОЗ представляет собой актуальную научную проблему международного уровня значимости [21]. В технических докладах ВОЗ рекомендуется сконцентрировать усилия на двух основных направлениях исследований и разработок:
во-первых, на совершенствование исследовательских подходов, предназначенных для выявления вирусных агентов в составе индивидуальных сырьевых заготовок;
во-вторых, на создание методов-методологий-стадий предназначенных для дезактивации инфекционности вирусных агентов в составе сырья и полупродуктов без нарушения конформационной нативности целевых белков.
Научная новизна (оригинальность исследовательского подхода)
Данная работа ориентирована на создание оригинальной схемы перевода боенской крови в индивидуальные фракции плазмы, значимые для сырьевого обеспечения предприятий биоиндустрии. Участок по заготовке крови и её сепарированию размещается в категорийном объекте, а для его функционирования не требуется соблюдение стерильных условий [43]. На основе оригинальных нововведений формируются изолированные фракции, обогащенные гидрофобными или гидрофильными белками с нижеследующими показателями качества:
- стандартный белковый спектр полученных фракций и возможность его регулирования в зависимости от целей исследования. Допускается наличие примесных альбумин-трансферриновых белков в составе гамма-глобулиновой фракции. Допускается наличие иммуноглобулина G в составе фракций, обогащенной альбумином.
Теоретическая ценность исследования
Оригинальность исследовательского подхода позволяет исследовать денатурирующие свойства бактерицидно-вироцидных концентраций дезинфектантов на белки с известными гидрофобными свойствами. Теоретическую ценность имеют результаты фракционирования раствора, сложного по составу индивидуальных белков, под действием концентрированных растворов сульфата аммония за счет разведения осаждающего реагента образцами плазмы до обеспечения его содержания в пределах до 33 % [38]. Механизмы формирования белковых агрегатов под действием нейтральных солей базируются на разрушении гидратной оболочки вокруг белковых глобул и реализации белок-белковых взаимодействий под гидрофобным участком, расположенным на поверхности макромолекул [17]. Полученные нами результаты позволяют предположить, что в процессе избирательного осаждения гидрофобных и гидрофильных белков традиционно обсуждаемые электростатические взаимодействия также важны как и гидрофобные силы. В общем случае в рамках выполненного исследования мы намерены получить общественно значимый для биоиндустрии технико-технологический результат.
Полагаем, что результаты инкубирования электрофоретически гомогенных и хроматографически мономерных форм IgG и альбумина КРС не только внесут определенный вклад в расшифровку механизмов белок-белковых взаимодействий, но и наметят перспективные направления исследований для создания технологий, позволяющих удалять ароматические соединения и фенолы (экотоксиканты) из состава пищевых и лекарственных белков.
Практическая ценность работы
Направленность исследования на:
-Обеспечение заготовки биосырья на месте его добычи и производства, на объектах медицины и животноводства.
-Перевозки и хранение отобранного биосырья, без использования системы поддерживающей оптимальной температуры на протяжении всего пути.
-Преобразование имеющихся полуфабрикатов в соответствующие продукты, которые будут доступны для стадий фракционирования.
Цель: изучить влияние дезинфектанта, обладающего вироцидно-бактерицидным механизмом действия на гамма-глобулиновую и альбуминовую фракцию, полученную из плазмы КРС.
Задачи:
1.Получить фракции плазмы крови, обогащенные иммуноглобулином и альбумином.
2.Изучить влияние различных концентраций фенола и тритона Х-100 на показатели мутности в растворах образцов гамма-глобулиновой и альбуминовой фракций плазмы.
3.Обработать полученные фракции растворами с различными концентрациями фенола и тритона Х-100 и изучить их влияние на биохимические показатели.
4.Изучить белковый спектр полученных фракций.
кризис на нашей планете – объективная реальность. Он продолжает
интенсивно развиваться, проявляясь прежде всего в том, что мы называем ухудшение качества жизни.
Существующая технократическая цивилизация, ее промышленный
и агропромышленный уклады абсолютно безжалостны к природе планеты [11].
Внимание так же стоит уделить биологическим отходам. Особое внимание уделяют утилизации биоресурсов, способные распространять опасные заболевания [12]. Следует обратить внимание на биологические отходы категорийных компаний животноводства и здравоохранения, которые массово производят опасные ресурсы, в составе которых входит возможный диапазон белков человеческого и животного происхождения.
Технология рекомбинантных ДНК при производстве терапевтических средств и методы очистки атмосферы вод и почвы с использованием биологических объектов не являются универсальными способами решения проблем в области здравоохранения и экологии [49].
В рамках стратегии очистки территории от биологических загрязнений предполагается изучить возможность использования невостребованных биоресурсов для сырьевого обеспечения предприятий фармацевтической биоиндустрии.
Распространение инфекций за счёт наличия в составе фармацевтических биопрепаратов вирусных агентов с позиций ВОЗ представляет собой актуальную научную проблему международного уровня значимости [21]. В технических докладах ВОЗ рекомендуется сконцентрировать усилия на двух основных направлениях исследований и разработок:
во-первых, на совершенствование исследовательских подходов, предназначенных для выявления вирусных агентов в составе индивидуальных сырьевых заготовок;
во-вторых, на создание методов-методологий-стадий предназначенных для дезактивации инфекционности вирусных агентов в составе сырья и полупродуктов без нарушения конформационной нативности целевых белков.
Научная новизна (оригинальность исследовательского подхода)
Данная работа ориентирована на создание оригинальной схемы перевода боенской крови в индивидуальные фракции плазмы, значимые для сырьевого обеспечения предприятий биоиндустрии. Участок по заготовке крови и её сепарированию размещается в категорийном объекте, а для его функционирования не требуется соблюдение стерильных условий [43]. На основе оригинальных нововведений формируются изолированные фракции, обогащенные гидрофобными или гидрофильными белками с нижеследующими показателями качества:
- стандартный белковый спектр полученных фракций и возможность его регулирования в зависимости от целей исследования. Допускается наличие примесных альбумин-трансферриновых белков в составе гамма-глобулиновой фракции. Допускается наличие иммуноглобулина G в составе фракций, обогащенной альбумином.
Теоретическая ценность исследования
Оригинальность исследовательского подхода позволяет исследовать денатурирующие свойства бактерицидно-вироцидных концентраций дезинфектантов на белки с известными гидрофобными свойствами. Теоретическую ценность имеют результаты фракционирования раствора, сложного по составу индивидуальных белков, под действием концентрированных растворов сульфата аммония за счет разведения осаждающего реагента образцами плазмы до обеспечения его содержания в пределах до 33 % [38]. Механизмы формирования белковых агрегатов под действием нейтральных солей базируются на разрушении гидратной оболочки вокруг белковых глобул и реализации белок-белковых взаимодействий под гидрофобным участком, расположенным на поверхности макромолекул [17]. Полученные нами результаты позволяют предположить, что в процессе избирательного осаждения гидрофобных и гидрофильных белков традиционно обсуждаемые электростатические взаимодействия также важны как и гидрофобные силы. В общем случае в рамках выполненного исследования мы намерены получить общественно значимый для биоиндустрии технико-технологический результат.
Полагаем, что результаты инкубирования электрофоретически гомогенных и хроматографически мономерных форм IgG и альбумина КРС не только внесут определенный вклад в расшифровку механизмов белок-белковых взаимодействий, но и наметят перспективные направления исследований для создания технологий, позволяющих удалять ароматические соединения и фенолы (экотоксиканты) из состава пищевых и лекарственных белков.
Практическая ценность работы
Направленность исследования на:
-Обеспечение заготовки биосырья на месте его добычи и производства, на объектах медицины и животноводства.
-Перевозки и хранение отобранного биосырья, без использования системы поддерживающей оптимальной температуры на протяжении всего пути.
-Преобразование имеющихся полуфабрикатов в соответствующие продукты, которые будут доступны для стадий фракционирования.
Цель: изучить влияние дезинфектанта, обладающего вироцидно-бактерицидным механизмом действия на гамма-глобулиновую и альбуминовую фракцию, полученную из плазмы КРС.
Задачи:
1.Получить фракции плазмы крови, обогащенные иммуноглобулином и альбумином.
2.Изучить влияние различных концентраций фенола и тритона Х-100 на показатели мутности в растворах образцов гамма-глобулиновой и альбуминовой фракций плазмы.
3.Обработать полученные фракции растворами с различными концентрациями фенола и тритона Х-100 и изучить их влияние на биохимические показатели.
4.Изучить белковый спектр полученных фракций.
1. При получении гамма-глобулиновой и альбуминовой фракций белков плазмы с помощью 100% от насыщения сульфата аммония добавление 1% фенола не влияет распределение общего белка во фракциях
2. В гамма-глобулиновой фракции использование 1% тритона Х-100 при инкубировании в 2% феноле снижает показатель мутности в 3,8 раза по сравнению с образцом без тритона Х-100.
3. Инкубирование гамма-глобулиновой фракции с фенолом (1-2%) приводит к увеличению олигомерной фракции при возрастании концентрации фенола. Использование 1% тритона Х-100 способствует повышению содержания высокомолекулярной фракции в образце с 2% фенолом до 89%.
4. Использование 1% Тритона Х-100 при инкубировании образцов альбуминовой фракции снижает денатурирующий потенциал фенола.
5. При инкубировании альбуминовой фракции в феноле (1-2%) добавление 1% тритона Х-100 в инкубационную среду способствует увеличению олигомерной фракции с 2 до 22%.
2. В гамма-глобулиновой фракции использование 1% тритона Х-100 при инкубировании в 2% феноле снижает показатель мутности в 3,8 раза по сравнению с образцом без тритона Х-100.
3. Инкубирование гамма-глобулиновой фракции с фенолом (1-2%) приводит к увеличению олигомерной фракции при возрастании концентрации фенола. Использование 1% тритона Х-100 способствует повышению содержания высокомолекулярной фракции в образце с 2% фенолом до 89%.
4. Использование 1% Тритона Х-100 при инкубировании образцов альбуминовой фракции снижает денатурирующий потенциал фенола.
5. При инкубировании альбуминовой фракции в феноле (1-2%) добавление 1% тритона Х-100 в инкубационную среду способствует увеличению олигомерной фракции с 2 до 22%.