ВВЕДЕНИЕ 5
1 Обзор литературы 6
1.1 Глиобластома 6
1.1.1 Барьеры при лечении глиобластомы 7
1.1.2 Стандартная диагностика и терапия глиобластомы 8
1.2 Активные формы кислорода 9
1.2.1 Повреждение молекул АФК 11
1.2.2 Роль АФК в патогенезе глиом 11
1.2.3 Применение химиотерапии и определение АФК 12
1.3 Аптамеры, как перспектива в лечении онкопатологий 13
1.3.1 Метод SELEX для отбора аптамеров 14
1.3.2 Преимущества аптамеров перед антителами 15
1.3.3 Преимущества аптамеров в диагностическом применении .. 15
1.4 Квантовые точки 16
1.4.1 Функционализация поверхности и оформление КТ 18
1.4.2 Квантовые точки на основе кадмия (Cd). Исследование токсичности 19
2 Материалы и методы 22
2.1 Материалы и реагенты: 22
2.2 Метод конъюгации квантовых точек с праймерами 23
2.3 Первичная оценка связывания препарата с послеоперационным материалом ткани глиобластомы 24
2.4 Определение острой токсичности спрея in vivo в эксперименте с мышами 26
2.5 Выявление АФК флуоресцентным зондом с помощью микроскопии 28
3 Результаты исследования и обсуждения 30
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 31
СПИСОК СОКРАЩЕНИИ 32
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 33
Глиальные опухоли головного мозга продолжают оставаться актуальной проблемой здравоохранения. Мультиформная глиобластома (ГБМ) является наиболее распространённой глиальной опухолью и самой летальной формой рака головного мозга. Быстрое прогрессирование и анатомическое расположение опухолевого очага ограничивают эффективность терапевтических вмешательств. Это подчёркивает необходимость обнаружения новых способов, инструментов её терапии и резекции.
Ткань, окружающая опухоль, может быть визуально идентична здоровой ткани, однако она трансформируется и содержит злокачественные клетки, которые за короткое время могут стать точкой роста новой опухоли.
Аптамеры, специфичные для опухолевых клеток и связанные с флуоресцентными красителями, которые можно обнаружить с помощью стандартных хирургических микроскопов, могут помочь решить проблему полной резекции злокачественных очагов в пораженном мозге.
Цель работы: разработать метод интраоперационного окрашивания глиобластомы с использованием аптамеров, конъюгированных с квантовыми точками (QD), оценив их токсичность in vivo.
Задачи:
1. Поиск наиболее оптимальных методов конъюгации квантовых точек с аптамерами.
2. Визуализация способности конъюгатов квантовых точек с аптамерами выявлять опухолевые клетки в ткани глиобластомы.
3. Визуальная оценка токсичности конъюгатов квантовых точек с аптамерами in vivo.
Работа выполнена в Лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий Красноярского государственного медицинского университета имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого.
В лабораторных условиях был разработан метод интраоперационного окрашивания глиобластомы с использованием аптамеров, конъюгированных с квантовыми точками (QD). Способность полученного препарата конъюгатов квантовых точек с аптамерами визуализировать опухолевые клетки в ткани глиобластомы подтвердилась.
За счёт яркости квантовых точек опухолевые клетки стало возможным визуализировать без хирургического микроскопа, используя только ультрафиолетовый фонарь и соответствующий фильтр. Кроме того, QD, в отличие от большинства нанозондов, обладают красной флуоресцентной эмиссией, которая является предпочтительным цветом в биологических исследованиях из-за явлений аутофлуоресценции клеток в диапазоне 400-600 нм.
Важно отметить, что токсичность препарата не была выявлена. Поэтому он имеет потенциал быть использованным для пациентов при интраоперационной визуализации злокачественных очагов глиобластомы.
