Комплексное лечение гнойных ран с использованием аллогенного биополимера
|
ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………4 – 8
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Историческая справка………………………………………….9 – 11
1.2. Современные аспекты лечения гнойных ран………………..11 – 27
1.3. Коллагенообразование и применение биополимеров
коллагена для лечения ран……………………………………27 – 31
ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ, МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ.
2.1. Основные методы исследования………………………………..32 – 39
2.2. Методы лечения больных……………………………………….39 – 42
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Результаты исследования альфа-гемолитической
активности микробной флоры ран………………………………42 – 46
3.2. Результаты исследования LT- энтеротоксигенности
синегнойной палочки……………………………………………..46 – 48
3.3. Результаты определения плазмокоагулазной
активности стафилококка…………………………………………48 – 51
3.4. «Легочная модель»………………………………………………...51 – 52
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Сравнительная характеристика больных
в исследуемых группах……………………………………….…..53 – 59
4. 2. Сравнительная характеристика результатов лечения
больных в исследуемых группах………………………………..59 – 60
4.2.1. Сравнительная характеристика динамики заживления
ран в исследуемых группах…………………………………….60 – 64
4.2.2. Сравнительная характеристика морфологических
изменений в исследуемых группах……………………………64 – 72
4.2.3. Сравнительная характеристика изменений лабораторных
показателей крови у больных в исследуемых группах………72 – 75
4.2.4. Сравнительная характеристика показателей оксигемометрии у больных в исследуемых группах……………………75 - 76
4.2.5. Сравнительная характеристика бактериальной обсемененности ран у больных в исследуемых группах…………………76 – 78
ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………...79 – 88
ВЫВОДЫ……………………………………………………………….89
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ……………………………….90
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………...91-119
Sl.ppt
Автореферат.doc
Выводы.doc
Выписка ученого совета.doc
Доклад.doc
Лицо.doc
Лицо автореферат.doc
Практические рекомендации.doc
Резензия.doc
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Историческая справка………………………………………….9 – 11
1.2. Современные аспекты лечения гнойных ран………………..11 – 27
1.3. Коллагенообразование и применение биополимеров
коллагена для лечения ран……………………………………27 – 31
ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ, МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ И ЛЕЧЕНИЯ.
2.1. Основные методы исследования………………………………..32 – 39
2.2. Методы лечения больных……………………………………….39 – 42
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Результаты исследования альфа-гемолитической
активности микробной флоры ран………………………………42 – 46
3.2. Результаты исследования LT- энтеротоксигенности
синегнойной палочки……………………………………………..46 – 48
3.3. Результаты определения плазмокоагулазной
активности стафилококка…………………………………………48 – 51
3.4. «Легочная модель»………………………………………………...51 – 52
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Сравнительная характеристика больных
в исследуемых группах……………………………………….…..53 – 59
4. 2. Сравнительная характеристика результатов лечения
больных в исследуемых группах………………………………..59 – 60
4.2.1. Сравнительная характеристика динамики заживления
ран в исследуемых группах…………………………………….60 – 64
4.2.2. Сравнительная характеристика морфологических
изменений в исследуемых группах……………………………64 – 72
4.2.3. Сравнительная характеристика изменений лабораторных
показателей крови у больных в исследуемых группах………72 – 75
4.2.4. Сравнительная характеристика показателей оксигемометрии у больных в исследуемых группах……………………75 - 76
4.2.5. Сравнительная характеристика бактериальной обсемененности ран у больных в исследуемых группах…………………76 – 78
ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………...79 – 88
ВЫВОДЫ……………………………………………………………….89
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ……………………………….90
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………...91-119
Sl.ppt
Автореферат.doc
Выводы.doc
Выписка ученого совета.doc
Доклад.doc
Лицо.doc
Лицо автореферат.doc
Практические рекомендации.doc
Резензия.doc
Проблема лечения гнойных ран относится к числу наиболее старых разделов медицины и является одной из главных проблем хирургии. В последние годы внимание многих исследователей привлекает увеличение летальных исходов от гнойно-воспалительных осложнений ран. Так, по данным С.В. Придоровского с соавт. (1995) и других летальность при некоторых нозологических формах составляет от 30 до 60% и постепенно достигает при генерализации инфекционного процесса уровня доантибиотического периода. По данным Costas М.et al. (1993) количество гнойно-септических осложнений в 1980-90 годы увеличилось, по сравнению с предыдущим десятилетием, в 4-5 раз, а по данным В.М. Тимербулатова (2000) риск послеоперационных инфекционных осложнений составляет около 20%.
Многие авторы резкое увеличение удельного веса больных с гнойными осложнениями связывают с нерациональным использованием в практике антибактериальных препаратов и иммунодепрессантов, распространением в природе штаммов условно-патогенных бактерий, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, и снижением общей резистентности организма (Сахаутдинов В.Г.,1990, Габидуллин З.Г.,1995, Сидоренко С.В.,1995, Марютин П.В.,1998).
Лечение гнойной раны должно носить активный характер и быть направлено на максимальное сокращение всех фаз раневого процесса (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1990, Мехтиев Н.М., 2000). В связи с этим в последнее время широкое применение для лечения гнойных ран нашли коллагенсодержащие препараты (Даценко Б.М. и др., 1986, Гарипов Р.М.,1992, Афиногенов Г.Е. и др.,1998).
Цель работы
Целью настоящего исследования явилось совершенствование лечения гнойных ран путем использования аллогенного биоматериа-ла, импрегнированного антибиотиками.
Задачи исследования
1. Изучить частоту встречаемости условно-патогенной бактериальной флоры при гнойных осложнениях ран.
2. С целью выяснения этиологической значимости условно-патогенной бактериальной флоры в каждом конкретном случае изучить их альфа-гемолитическую, LT-энтеротоксигенную и плазмокоагулазную активность.
3. Разработать аллогенный биоматериал с антибактериальным действием, и на модели экспериментальной инфекции изучить его влияние на возбудителей гнойного раневого процесса.
4. Разработать метод лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей с использованием аллогенного биоматериала.
5. Изучить непосредственные результаты комплексного лечения больных с гнойными ранами традиционным и разработанным методами.
Научная новизна
Впервые разработан аллогенный биоматериал «Аллоплант», импрегнированный антибиотиками, и, на основании проведенных исследований, доказана его эффективность в лечении больных с гнойными ранами.
«Аллоплант», импрегнированный антибиотиками, оказывает выраженное антимикробное действие и стимулирующее влияние на репаративные процессы в ране, что выявлено на большом клиническом материале.
Запатентован штамм бактерий Morganella morganii, обладающий высокой LT-энтеротоксигенностью, выделенный при ассоциированной стафилококко-синегнойной инфекции (патент РФ №2113474 от 20.06.98г.).
Практическая ценность работы
Заключается в клиническом обосновании целесообразности применения аллогенного биоматериала в лечении больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей.
Метод местного лечения гнойных ран с использованием алло-генного биоматериала эффективен, легко осуществим и не вызывает осложнений.
Предложенный комплексный метод лечения гнойных ран сокращает сроки лечения и может применяться в условиях хирургических отделений стационаров.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на совместном заседании кафедр общей хирургии с курсом урологии, хирургических болезней № 1 и № 2, хирургии с курсом эндохирургии ИПО, микробиологии, патологической анатомии и проблемной комиссии "Основные проблемы хирургии"
Основные положения, выносимые на защиту
1.Патогенные свойства штаммов синегнойной палочки и стафилококка более выражены в ассоциации микроорганизмов.
2.Аллогенный биоматериал, импрегнированный антибиотиками, на модели экспериментальной инфекции оказывает выраженное антимикробное действие на штаммы синегнойной палочки и стафилококка в монокультуре и ассоциации.
3.Аллогенный биоматериал, импрегнированный антибиотиками, является эффективным средством при лечении больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей.
4.При комплексном лечении гнойных ран с использованием аллогенного биоматериала процесс заживления ран ускоряется, что обеспечивает сокращение сроков лечения больных.
Реализация работы
Разработанный метод лечения гнойных ран с использованием стимулятора регенерации серии «Аллоплант» с импрегнированными антибиотиками применяется в повседневной практике противосептического центра РКБ им. Г.Г. Куватова.
Решение поставленных задач осуществлялось на базе РКБ им. Г. Г. Куватова (гл. врач Муртазин З.Я.), кафедре общей хирургии с курсом урологии (зав. кафедрой профессор М.А. Нартайлаков) Башкирского государственного медицинского университета (ректор профессор В.М. Тимербулатов) и Всероссийского центра пластической хирургии глаза (руководитель профессор Э.Р. Мулдашев).
Изготовление аллогенного биоматериала, импрегнированного антибиотиками, проводилось совместно с сотрудником лаборатории «Аллоплант» Всероссийского центра пластической хирургии глаза к.ф.н. Хасановым Р.А.
Морфологические исследования выполнены совместно с заведующим патологоанатомическим бюро РКБ им. Г.Г. Куватова Ткаченко В.Н.
Микробиологические исследования выполнены под руководством заведующего кафедрой микробиологии БГМУ профессора Габидуллина З.Г.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, получены 1 патент на изобретение и 2 удостоверения на рационализаторские предложения.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, включающих обзор литературы, общую характеристику методов обследования и лечения, результаты экспериментальных и клинических исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций.
Работа иллюстрирована 17 таблицами, 14 рисунками, 2 клиническими примерами.
Список литературы содержит 208 источников, из которых 149 отечественных и 59 зарубежных авторов.
Многие авторы резкое увеличение удельного веса больных с гнойными осложнениями связывают с нерациональным использованием в практике антибактериальных препаратов и иммунодепрессантов, распространением в природе штаммов условно-патогенных бактерий, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, и снижением общей резистентности организма (Сахаутдинов В.Г.,1990, Габидуллин З.Г.,1995, Сидоренко С.В.,1995, Марютин П.В.,1998).
Лечение гнойной раны должно носить активный характер и быть направлено на максимальное сокращение всех фаз раневого процесса (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1990, Мехтиев Н.М., 2000). В связи с этим в последнее время широкое применение для лечения гнойных ран нашли коллагенсодержащие препараты (Даценко Б.М. и др., 1986, Гарипов Р.М.,1992, Афиногенов Г.Е. и др.,1998).
Цель работы
Целью настоящего исследования явилось совершенствование лечения гнойных ран путем использования аллогенного биоматериа-ла, импрегнированного антибиотиками.
Задачи исследования
1. Изучить частоту встречаемости условно-патогенной бактериальной флоры при гнойных осложнениях ран.
2. С целью выяснения этиологической значимости условно-патогенной бактериальной флоры в каждом конкретном случае изучить их альфа-гемолитическую, LT-энтеротоксигенную и плазмокоагулазную активность.
3. Разработать аллогенный биоматериал с антибактериальным действием, и на модели экспериментальной инфекции изучить его влияние на возбудителей гнойного раневого процесса.
4. Разработать метод лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей с использованием аллогенного биоматериала.
5. Изучить непосредственные результаты комплексного лечения больных с гнойными ранами традиционным и разработанным методами.
Научная новизна
Впервые разработан аллогенный биоматериал «Аллоплант», импрегнированный антибиотиками, и, на основании проведенных исследований, доказана его эффективность в лечении больных с гнойными ранами.
«Аллоплант», импрегнированный антибиотиками, оказывает выраженное антимикробное действие и стимулирующее влияние на репаративные процессы в ране, что выявлено на большом клиническом материале.
Запатентован штамм бактерий Morganella morganii, обладающий высокой LT-энтеротоксигенностью, выделенный при ассоциированной стафилококко-синегнойной инфекции (патент РФ №2113474 от 20.06.98г.).
Практическая ценность работы
Заключается в клиническом обосновании целесообразности применения аллогенного биоматериала в лечении больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей.
Метод местного лечения гнойных ран с использованием алло-генного биоматериала эффективен, легко осуществим и не вызывает осложнений.
Предложенный комплексный метод лечения гнойных ран сокращает сроки лечения и может применяться в условиях хирургических отделений стационаров.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на совместном заседании кафедр общей хирургии с курсом урологии, хирургических болезней № 1 и № 2, хирургии с курсом эндохирургии ИПО, микробиологии, патологической анатомии и проблемной комиссии "Основные проблемы хирургии"
Основные положения, выносимые на защиту
1.Патогенные свойства штаммов синегнойной палочки и стафилококка более выражены в ассоциации микроорганизмов.
2.Аллогенный биоматериал, импрегнированный антибиотиками, на модели экспериментальной инфекции оказывает выраженное антимикробное действие на штаммы синегнойной палочки и стафилококка в монокультуре и ассоциации.
3.Аллогенный биоматериал, импрегнированный антибиотиками, является эффективным средством при лечении больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей.
4.При комплексном лечении гнойных ран с использованием аллогенного биоматериала процесс заживления ран ускоряется, что обеспечивает сокращение сроков лечения больных.
Реализация работы
Разработанный метод лечения гнойных ран с использованием стимулятора регенерации серии «Аллоплант» с импрегнированными антибиотиками применяется в повседневной практике противосептического центра РКБ им. Г.Г. Куватова.
Решение поставленных задач осуществлялось на базе РКБ им. Г. Г. Куватова (гл. врач Муртазин З.Я.), кафедре общей хирургии с курсом урологии (зав. кафедрой профессор М.А. Нартайлаков) Башкирского государственного медицинского университета (ректор профессор В.М. Тимербулатов) и Всероссийского центра пластической хирургии глаза (руководитель профессор Э.Р. Мулдашев).
Изготовление аллогенного биоматериала, импрегнированного антибиотиками, проводилось совместно с сотрудником лаборатории «Аллоплант» Всероссийского центра пластической хирургии глаза к.ф.н. Хасановым Р.А.
Морфологические исследования выполнены совместно с заведующим патологоанатомическим бюро РКБ им. Г.Г. Куватова Ткаченко В.Н.
Микробиологические исследования выполнены под руководством заведующего кафедрой микробиологии БГМУ профессора Габидуллина З.Г.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, получены 1 патент на изобретение и 2 удостоверения на рационализаторские предложения.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, включающих обзор литературы, общую характеристику методов обследования и лечения, результаты экспериментальных и клинических исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций.
Работа иллюстрирована 17 таблицами, 14 рисунками, 2 клиническими примерами.
Список литературы содержит 208 источников, из которых 149 отечественных и 59 зарубежных авторов.
Лечение гнойных ран представляет одну из важнейших проблем практического здравоохранения. Существует множество разнообразных методов и способов лечения гнойных ран, но ни один не удовлетворяет хирургов полностью.
В последние годы внимание многих исследователей привлекает увеличение летальных исходов от гнойно-воспалительных осложнений ран. Так, по данным С. В. Придоровского с соавт. (1995) и других летальность при некоторых нозологических формах составляет от 30 до 60% и постепенно достигает при генерализации инфекционного процесса уровня доантибиотического периода. По данным Cos-tas М.et al. (1993) количество гнойно-септических осложнений в 1980-90 годы увеличилось, по сравнению с предыдущим десятилетием, в 4-5 раз.
Многие авторы резкое увеличение удельного веса больных с гнойными осложнениями связывают с нерациональным использованием в практике антибактериальных препаратов и иммунодепрессантов, распространением в природе штаммов условно-патогенных бактерий, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, и снижением общей резистентности организма (Сахаутдинов В. Г.,1990, Габидуллин З. Г.,1995, Сидоренко С. В.,1995, Марютин П. В.,1998).
Лечение гнойной раны должно носить активный характер и быть направлено на максимальное сокращение всех фаз раневого процесса. В связи с этим в последнее время широкое применение для лечения гнойных ран нашли коллагенсодержащие препараты (Даценко Б. М. и др., 1986, Гарипов Р. М.,1992, Афиногенов Г. Е. и др.,1998).
Проблема создания и применения препаратов из коллагена в медицине разрабатывается с 1962 года. Препараты коллагена обладают такими качествами, как отсутствие антигенных и токсических свойств, защита раневой поверхности от инфекции и плазмопотери, стимуляция регенерации тканей, а также могут образовывать комплексы с лекарственными веществами, что еще более усиливает стимулирующий эффект коллагена [60,69,73,188].
Способность различных микробов проникать в макроорганизм и размножаться зависит не только от защитных сил мапроорганизма, но и от факторов патогенности микроорганизма. Стафилококк и синегнойная палочка в ассоциации обладают достаточно выраженными факторами патогенности.
Изложенные проблемы определили цель настоящей работы –на экспериментальной модели инфекции определение факторов патогенности стафилококка и синегнойной палочки и влияние аллогенного биоматериала на эти факторы, а также разработку и внедрение в клинику комплексного лечения гнойных ран с использованием стимулятора регенерации серии «Аллоплант», импрегнированного антибиотиками.
В экспериментальной части своей работы мы исследовали альфа-гемолитическую активность стафилококка и синегнойной палочки, плазмокоагулазную активность стафилококка и термолабильную энтеротоксигенность синегнойной палочки, а также определяли вирулентность вышеуказанных микроорганизмов. Исследования проводили как с монокультурами, так и с ассоциациями.
Альфа-гемолитическую активность определяли на 2% агаре Хоттингера, который является мясопептонным агаром, содержащим 5% суспензию эритроцитов кролика или 0 (I) группы человека. При этом суточную агаровую культуру засевали уколом на агар Хоттин-гера и инкубировали в термостате при температуре 37оС в течение 24 часов. Степень альфа-гемолитической активности определяли по зоне гемолиза (5-8мм – высокая; 3-5мм – средняя; 1-3мм – слабая; отсутствие гемолиза – отрицательная).
Для определения плазмокоагулазной активности бактериальной флоры одну петлю чистой культуры вносили в стерильные пробирки, содержащие по 0,5мл свежей плазмы кроликов, и помещали их в термостат. Результат проверяли через 30 минут, 2 часа, 4 часа и на другой день. Положительный результат характеризуется уплотнением плазмы.
Определение термолабильной энтеротоксигенности бактериальной флоры проводили на тесте отека лап мышей, разработанным Вартанян Ю. П. и соавт. Вводили 0,05мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры в подушечку левой задней лапы белых мышей. Через 24 часа мышей умерщвляли эфиром. По разнице веса ампутированных по голеностопному суставу опытной (левой) и контроль-ной (правой) лап, взвешенных на торсионных весах, высчитывали показатель отека лап в мг. За положительный принимали показатель в 65мг и более.
Изучение вирулентности бактериальной флоры проводили методом интраназального заражения белых мышей массой 16 – 18 грамм («Легочная модель» Войно-Ясенецкой / 1957 /).
В результате изучения данных экспериментов было установлено, что стафилококк и синегнойная палочка в ассоциированных инфекциях обладают более высокой альфа-гемолитической активностью, нежели в монокультурах. Штаммов стафилококка с высокой и средней альфа-гемолитической активностью было выявлено на 23,4% больше в ассоциации, а штаммов синегнойной палочки - на 20% больше.
При изучении результатов определения LT-энтеротоксигенности синегнойной палочки и плазмокоагулазной активности стафилококка также выявлено, что при ассоциированных инфекциях высокоактивных штаммов синегнойной палочки больше на 4,8%, а стафилококка – на 25,6%.
На «легочной модели» доказано, что вирулентных штаммов больше в ассоциациях на 13,3% для стафилококка и 33,3% для синегнойной палочки.
Далее нами было изучено влияние лечебных мероприятий на состояние факторов патогенности микроорганизмов. В контрольную группу вошел бактериологический материал от больных, получавших лечение традиционными методами, а в основную – получавших лечение с использованием аллогенного биоматериала. В процессе лечения в обеих группах количество высокоактивных штаммов уменьшалось, тогда как количество штаммов, обладающих малой активностью, увеличивалось, однако, при использовании стимулятора регенерации серии «Аллоплант», импрегнированного антибиотика-ми, это было более выражено.
При анализе полученных данных нами было установлено, что в результате лечения в основной группе синегнойная палочка теряет больше высокоактивных штаммов для альфа-гемолитической активности на 2,2% в монокультуре, и на 2,2% - в ассоциации, для термолабильной энтеротоксигенности – в основной группе не высеяно, в контрольной 1 штамм.
Стафилококк также теряет больше высокоактивных штаммов в основной группе: для альфа-гемолитической активности в монокультуре – на 1,8%, в ассоциации – на 2,5%, для плазмокоагулазной активности – на 0,6 в монокультуре и на 1,5% больше в ассоциации.
Увеличение неактивных штаммов микроорганизмов в основной группе также происходит интенсивнее. При изучении альфа-гемолитической активности в монокультуре синегнойной палочки неактивных штаммов больше на 8%, в ассоциации – на 3,3%; для стафилококка – 4% и 1,3%.
Количество неактивных штаммов синегнойной палочки при изучении LT-энтеротоксигенности увеличилось на 4,3% в монокультуре и на 4,7% в ассоциации.
При анализе результатов определения плазмокоагулазной активности стафилококка выявлено, что в основной группе количество неактивных штаммов больше на 3% в монокультуре и на 3,7% в ассоциации.
В последние годы внимание многих исследователей привлекает увеличение летальных исходов от гнойно-воспалительных осложнений ран. Так, по данным С. В. Придоровского с соавт. (1995) и других летальность при некоторых нозологических формах составляет от 30 до 60% и постепенно достигает при генерализации инфекционного процесса уровня доантибиотического периода. По данным Cos-tas М.et al. (1993) количество гнойно-септических осложнений в 1980-90 годы увеличилось, по сравнению с предыдущим десятилетием, в 4-5 раз.
Многие авторы резкое увеличение удельного веса больных с гнойными осложнениями связывают с нерациональным использованием в практике антибактериальных препаратов и иммунодепрессантов, распространением в природе штаммов условно-патогенных бактерий, обладающих множественной лекарственной устойчивостью, и снижением общей резистентности организма (Сахаутдинов В. Г.,1990, Габидуллин З. Г.,1995, Сидоренко С. В.,1995, Марютин П. В.,1998).
Лечение гнойной раны должно носить активный характер и быть направлено на максимальное сокращение всех фаз раневого процесса. В связи с этим в последнее время широкое применение для лечения гнойных ран нашли коллагенсодержащие препараты (Даценко Б. М. и др., 1986, Гарипов Р. М.,1992, Афиногенов Г. Е. и др.,1998).
Проблема создания и применения препаратов из коллагена в медицине разрабатывается с 1962 года. Препараты коллагена обладают такими качествами, как отсутствие антигенных и токсических свойств, защита раневой поверхности от инфекции и плазмопотери, стимуляция регенерации тканей, а также могут образовывать комплексы с лекарственными веществами, что еще более усиливает стимулирующий эффект коллагена [60,69,73,188].
Способность различных микробов проникать в макроорганизм и размножаться зависит не только от защитных сил мапроорганизма, но и от факторов патогенности микроорганизма. Стафилококк и синегнойная палочка в ассоциации обладают достаточно выраженными факторами патогенности.
Изложенные проблемы определили цель настоящей работы –на экспериментальной модели инфекции определение факторов патогенности стафилококка и синегнойной палочки и влияние аллогенного биоматериала на эти факторы, а также разработку и внедрение в клинику комплексного лечения гнойных ран с использованием стимулятора регенерации серии «Аллоплант», импрегнированного антибиотиками.
В экспериментальной части своей работы мы исследовали альфа-гемолитическую активность стафилококка и синегнойной палочки, плазмокоагулазную активность стафилококка и термолабильную энтеротоксигенность синегнойной палочки, а также определяли вирулентность вышеуказанных микроорганизмов. Исследования проводили как с монокультурами, так и с ассоциациями.
Альфа-гемолитическую активность определяли на 2% агаре Хоттингера, который является мясопептонным агаром, содержащим 5% суспензию эритроцитов кролика или 0 (I) группы человека. При этом суточную агаровую культуру засевали уколом на агар Хоттин-гера и инкубировали в термостате при температуре 37оС в течение 24 часов. Степень альфа-гемолитической активности определяли по зоне гемолиза (5-8мм – высокая; 3-5мм – средняя; 1-3мм – слабая; отсутствие гемолиза – отрицательная).
Для определения плазмокоагулазной активности бактериальной флоры одну петлю чистой культуры вносили в стерильные пробирки, содержащие по 0,5мл свежей плазмы кроликов, и помещали их в термостат. Результат проверяли через 30 минут, 2 часа, 4 часа и на другой день. Положительный результат характеризуется уплотнением плазмы.
Определение термолабильной энтеротоксигенности бактериальной флоры проводили на тесте отека лап мышей, разработанным Вартанян Ю. П. и соавт. Вводили 0,05мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры в подушечку левой задней лапы белых мышей. Через 24 часа мышей умерщвляли эфиром. По разнице веса ампутированных по голеностопному суставу опытной (левой) и контроль-ной (правой) лап, взвешенных на торсионных весах, высчитывали показатель отека лап в мг. За положительный принимали показатель в 65мг и более.
Изучение вирулентности бактериальной флоры проводили методом интраназального заражения белых мышей массой 16 – 18 грамм («Легочная модель» Войно-Ясенецкой / 1957 /).
В результате изучения данных экспериментов было установлено, что стафилококк и синегнойная палочка в ассоциированных инфекциях обладают более высокой альфа-гемолитической активностью, нежели в монокультурах. Штаммов стафилококка с высокой и средней альфа-гемолитической активностью было выявлено на 23,4% больше в ассоциации, а штаммов синегнойной палочки - на 20% больше.
При изучении результатов определения LT-энтеротоксигенности синегнойной палочки и плазмокоагулазной активности стафилококка также выявлено, что при ассоциированных инфекциях высокоактивных штаммов синегнойной палочки больше на 4,8%, а стафилококка – на 25,6%.
На «легочной модели» доказано, что вирулентных штаммов больше в ассоциациях на 13,3% для стафилококка и 33,3% для синегнойной палочки.
Далее нами было изучено влияние лечебных мероприятий на состояние факторов патогенности микроорганизмов. В контрольную группу вошел бактериологический материал от больных, получавших лечение традиционными методами, а в основную – получавших лечение с использованием аллогенного биоматериала. В процессе лечения в обеих группах количество высокоактивных штаммов уменьшалось, тогда как количество штаммов, обладающих малой активностью, увеличивалось, однако, при использовании стимулятора регенерации серии «Аллоплант», импрегнированного антибиотика-ми, это было более выражено.
При анализе полученных данных нами было установлено, что в результате лечения в основной группе синегнойная палочка теряет больше высокоактивных штаммов для альфа-гемолитической активности на 2,2% в монокультуре, и на 2,2% - в ассоциации, для термолабильной энтеротоксигенности – в основной группе не высеяно, в контрольной 1 штамм.
Стафилококк также теряет больше высокоактивных штаммов в основной группе: для альфа-гемолитической активности в монокультуре – на 1,8%, в ассоциации – на 2,5%, для плазмокоагулазной активности – на 0,6 в монокультуре и на 1,5% больше в ассоциации.
Увеличение неактивных штаммов микроорганизмов в основной группе также происходит интенсивнее. При изучении альфа-гемолитической активности в монокультуре синегнойной палочки неактивных штаммов больше на 8%, в ассоциации – на 3,3%; для стафилококка – 4% и 1,3%.
Количество неактивных штаммов синегнойной палочки при изучении LT-энтеротоксигенности увеличилось на 4,3% в монокультуре и на 4,7% в ассоциации.
При анализе результатов определения плазмокоагулазной активности стафилококка выявлено, что в основной группе количество неактивных штаммов больше на 3% в монокультуре и на 3,7% в ассоциации.