ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Физические свойства и способы сохранения трутневого гомогената... 6
Е2 Химический состав трутневого гомогената 6
ЕЗ Применение трутневого гомогената 14
1.4 Пептиды, их классификация 16
1.5 Дегидрогеназы 18
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 23
2.1 Материал исследования 23
2.2 Методы Исследований 23
2.2.1. Метод гель-фильтрации 23
2.2.2 Определение содержания пептидов методом Лоури 24
2.2.3 Тангенциальное ультрафильтрация 25
2.2.4 Культивирование микроорганизмов 26
2.2.5 Определение общей дегидрогеназной активности 27
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 28
3.1 Построение калибровочных кривых по БСА 28
3.2 Получение фракций низкомолекулярных пептидов раствора гомогената
трутневого расплода методом гель-фильтрации 28
3.3 Получение чистых культур 30
3.4 Определение дегидрогеназной активности микроорганизмов 36
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 41
СПИСОК ЛИТЕРАТУРА 42
Продукты пчеловодства, такие как мед, прополис, маточное молочко, пчелиный хлеб, пыльца, собранная пчелами, пчелиный воск и яд, известны и ценятся людьми на протяжении тысячелетий. В то же время существует большое количество публикаций, посвященных изучению биологической активности продуктов пчеловодства, однако большинство из них сконцентрированы на изучении пчелиного мёда и маточного молочка. Трутневый расплод остаётся слабо изученным с точки зрения причин биологической активности этого продукта пчеловодства.
Трутневый расплод представляет собой личинки, вылупившиеся из неполодотворённых маткой яиц. Гомогенат личинок трутневого расплода широко используется в народной медицине как средство, обладающее ранозаживляющим, адаптогенным, противовспалительным и иммуномодулирующим эффектами. Гомогенат готовится из личинок трутней различного возраста и может поставляться конечному потребителю в виде различных форм (суспензия,, лиофилизат, адсорбированный на носителе и т. Д-)
Благодаря исследованиям, было доказано, что в состав трутневого гомогената входит большое количество пептидов. Известно, что пептиды влияют на многие процессы жизнедеятельности и регулируют деятельность многих систем органов, однако отсутствуют данные о влиянии пептидов трутневого расплода на дегидрогеназную активность микроорганизмов [33].
Дегидрогеназы — это группа ферментов, которые катализируют реакции, связанные с процессами дыхания, гликолиза и брожения. Дегидрогеназы входят в состав всех органов и тканей растений, животных и микроорганизмов. Дегидрогеназы относятся к оксиредуктазам и являются катализаторами при переносе водорода от субстрата, который окисляется (RH2), на акцепторы (R1), которые восстанавливаются: RH2+ R1 —► R + R1H2
Дегидрогеназы играют большую роль в функционировании ферментативных систем организмов. Большую роль играют алкогольдегидрогеназа, лактатдегидрогеназа, сукцинатдегидрогеназа и др. ферменты, которые участвуют в процессах брожения и гликолиза [7].
Изучение дегидрогеназной активности бактерий и веществ, влияющих на неё, имеет большое практическое значение. Ферменты-дегидрогеназы, такие как, например, ацетальдегид-алкогольдегидрогеназа (adliE), являются ключевым метаболическим ферментом в бактериальной физиологии и патогенности. Они превращают аиетил-КоА в этанол через промежуточное звено ацетальдегида во время ферментации этанола в анаэробной среде. Дополнительно определение дегидрогеназной активности цианобактерий, позволяет определить уровень химического загрязнения среды [19]
Изучение влияния пептидов трутневого расплода на дегидрогеназную активность микроорганизмов позволяет изучить общую биологическую активно данных соединений. Изменение в общей дегидрогеназной активности, которое может наблюдаться у бактериальных культур, подверженных действию пептидов трутневого расплода, свидетельствует о том, что данные пептиды обладают определённой биологической активностью и могут быть использованы для дальнейшего изучения основ проявления таковой, ведь изменение дегидрогеназной активности бактериальной культуры является одним из вариантов ответа клеток на стимулы внешней среды, и наблюдается, например, при стрессовом воздействии на микроорганизмы (загрязнение окружающей среды, воздействие антибиотиков, нефтеродуктов, пестицидов и т. п.)
Цель работы: изучение влияния пептидов трутневого расплода на дегидрогеназную активность микроорганизмов.
Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:
Задачи исследования:
1. Фракционировать пептиды трутневого расплода.
2. Подготовить тестовые культуры микроорганизмов.
3. Изучить влияние полученных фракций пептидов трутневого расплода на дегидрогеназную активность тестовых микроорганизмов.
Выпускная квалификационная работа написана на 47 листах, содержит 12 рисунков, 4 таблицы и список цитируемой литературы из 43 источников на русском и английском языках.
В настоящее время продукты пчеловодства очень эффективно используются в современной медицине в качестве лечебных и профилактических средств. Большой интерес представляет трутневый расплод. Он по сведению многих пчеловодов, очень близок по составу и характеристикам с маточным молочком и в активный период сезона в большом количестве имеется во всех пчелиных семьях.
Исследования последних лет показало, что в гомогенате личинок трутневого расплода пчёл в достаточном количестве содержатся пептиды. Но изучено и охарактеризовано было небольшое количество индивидуальных пептидов. Так как биологически активные пептиды влияют на многие процессы жизнедеятельности и регулируют многие системы органов, очень перспективным направлением является изучение пептидов трутневого расплода для создания в будущем лекарственных препаратов и биологически активных добавок.
В ходе исследования было изучено влияние пептидов трутневого расплода на дегидрогеназную активность микроорганизмов .
По результатам исследования можно сделать следующие выводы:
1. В состав трутневого расплода входят пептиды, которые можно выделить и фракционировать методом гель-фильтрации
2. Полученные фракции пептидов изменяют дегидро геназную активность микроорганизмов рода Azotobacter, Clostridium и вида Bacillus subtilis
3. Дегидрогеназная активность микроорганизмов вида Bacillus subtilis увеличивается при действии пептидов различной концентрации.
4. Не выявлена закономерность влияния пептидов разной концентрации на дегидрогеназную активность микроорганизмов рода Clostridium, Azotobacter, Дегидрогеназная активность данных микроорганизмов может как повышаться, так и понижаться.
