ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Виды пчелопродуктов 6
1.1.1 Мёд, его химический состав 6
1.1.2 Пыльца (обножка) и перга, их химический состав 7
1.1.3 Трутневый расплод, его химический состав 9
1.2 Антибактериальные свойства пчелопродуктов 10
1.2.1 Антибактериальная активность мёда 10
1.2.2 Антимикробная активность пыльцы 11
1.2.3 Антибактериальная активность трутневого расплода 133
1.3 Антибактериальные пептиды из продуктов пчеловодства 13
1.3.1 Апидаецин, антибактериальный пептид медоносных пчел 14
1.3.2 Структурные свойства и биологическая активность апидаецинов... 155
1.3.3 Характеристика абаецина, основного антибактериального пептида
медоносных пчёл (Apis Mellifera) 177
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 211
2.1 Материалы исследований 211
2.2 Методы исследований 211
2.2.1 Методы приготовления исследуемых растворов мёда и перги 21
2.2.2 Тангенциальная ультрафильтрация 22
2.2.3 Ионообменная хроматография 23
2.2.4 Гель-фильтрация 255
2.2.5 Определение содержания белка методом Лоури 25
2.2.6 Метод определения углеводов реакцией Селиванова 26
2.2.7 Тестирование препарата на бактерицидность 27
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 29
3.1 Ионообменная хроматография раствора мёда 29
3.1.1 Катионообменная хроматография 29
3.2 Катионообменная хроматография раствора перги 32
3.3 Гель-фильтрация раствора трутневого расплода 33
3.3.1 Определение свободного и внутреннего объёмов колонки, калибровка
колонки 33
3.3.2 Получение фракций низкомолекулярных пептидов методом гель¬фильтрации 34
3.4 Изучение антибактериальной активности фракций белков и пептидов
мёда, перги и трутневого расплода 35
ВЫВОДЫ 41
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 43
В 1928 году Флеминг открыл пенициллин и прошло уже много времени, за которое было разработано немало антибиотиков [25]. Но окончательно победить патогенные микроорганизмы так и не удалось, так как бактерии достаточно быстро вырабатывают резистентность к почти всем антибиотикам. Необоснованное применение антимикробных средств способствовало увеличению резистентности, и это привело к недостатку эффективных лекарственных препаратов. Следовательно, современной тенденцией в фармакологии стал поиск эффективных и, что немаловажно нетоксичных антибиотических веществ растительного и животного происхождения [23, 38, 42].
Среди антибиотических веществ на первом месте находятся пептиды, благодаря своему избирательному действию на клетки бактерий. Препараты на основе пептидов применяют при лечении ряда заболеваний, они оказывают влияние на многие физиологические функции организма [24]. Действие этих препаратов основано на работе по принципу «своих эндогенных регуляторных молекул», являющихся эндогенными факторами регуляции, в связи с этим у них отсутствуют побочные эффекты и проявляется высокая активность даже в малых концентрациях [17].
Основой таких антибактериальных препаратов пептидов могут стать продукты пчеловодства, которые играют огромную роль среди натуральных средств лечения. В качестве источников регуляторных пептидов может выступать в первую очередь мёд, бактерицидные свойства которого известны издавна, а также перга и другие продукты пчеловодства. Мёд, как известно, может долгое время не портится даже при комнатной температуре, не зарастая ни грибами, ни какими-либо другими патогенами. Такие свойства мёд проявляет, благодаря своему уникальному составу: большое содержание сахаров (до 80%), низкое значение рН (из-за наличия в составе органических кислот), а главное, благодаря наличию антибактериальных пептидов. За содержание антибактериальных пептидов в мёде и в других продуктах пчеловодства «ответственна» пчела, так же, как за присутствие гидролитических и других ферментов.
Целью данной работы является выделение и изучение антибактериальных свойств пептидов, полученных из различных продуктов пчеловодства.
Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:
1. Провести анализ литературных данных на тему исследования.
2. Разработать метод выделения пептидов из пчелопродуктов с параллельным отделением пептидной фракции от общей белковой.
3. Изучить биологические свойства, а именно бактерицидную активность, полученных фракций на разных стадиях выделения и очистки.
Бакалаврская работа написана на 48 листах, содержит 11 рисунков и список литературы на русском и английском языках из 52 источников.
1. Разработана технология выделения пептидов из различных продуктов пчеловодства, основанная на ультрафильтрации, гель-фильтрации и ионообменной хроматографии водных растворов мёда, перги, трутневого расплода.
2. Выявлена антибактериальная активность растворов мёда и перги в отношении культур грамотрицательных бактерий E. coli и грамположительных бактерий B. subtilis, в то время как раствор трутневого расплода не проявляет антибактериальный эффект.
3. Установлено, что катионные пептиды мёда и перги обладают выраженным бактерицидным действием.
