ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
1.1 Обножка и перга, их происхождение 8
1.1.1 Сбор цветочной пыльцы пчёлами и создание пчелиной обножки ... 8
1.1.2 Происхождение перги и её значение 9
1.2 Химический состав обножки 11
1.2.1 Липиды (жиры) цветочной пыльцы (пчелиной обножки) 13
1.2.2 Витамины цветочной пыльцы (пчелиной обножки) 17
1.2.3 Минеральные вещества в цветочной пыльце (пчелиной обножке) 18
1.2.4 Белки цветочной пыльцы (пчелиной обножки) 20
1.3 Химический состав перги 21
1.3.1 Биологически активные вещества, входящие в состав перги 23
1.4 Биологически активные пептиды и их роль 26
1.4.1 Пептиды пыльцы и перги 28
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 30
2.1 Материалы исследования 30
2.2 Методы исследований 31
2.2.1 Тангенциальная ультрафильтрация 31
2.2.2 Гель-фильтрация 32
2.2.3 Ионообменная хроматография 33
2.2.4 Определение содержания белка методом Лоури 34
2.2.5 Метод определения углеводов реакцией Селиванова 35
2.2.6 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии 35
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 37
3.1 Гель-фильтрация раствора цветочной пыльцы 37
3.1.1 Определение свободного и внутреннего объёмов колонки, калибровка колонки 37
3.1.2 Получение фракций низкомолекулярных пептидов методом гель- фильтрации 38
3.2 Хроматографическое разделение 41
3.3 Катионообменная хроматография 42
3.3.1 Подбор оптимальной дозы наносимого на колонку раствора перги 42
3.3.2 Ход разделения 46
3.4 Анионообменная хроматография 47
3.5 Оценка метода ионообменной хроматографии 48
3.6 Анализ спектра анионных и катионных пептидов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии 49
3.6.1 ВЭЖХ раствора перги 49
3.6.2 ВЭЖХ раствора пыльцы 54
ВЫВОДЫ 56
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 57
Актуальность исследования.В настоящее время в России ведется активная пропаганда здорового образа жизни, и особое внимание уделяется правильному питанию. При этом мёд и другие продукты пчеловодства рекомендуются в качестве неотъемлемого компонента рациона. Они являются перспективным источником биологически-активных веществ для биотехнологии и медицины. К настоящему времени из мёда, маточного молочка и гомогената личинок пчел выделено и охарактеризовано большое количество индивидуальных веществ, комбинации которых широко используются для создания бадов и лекарственных препаратов. Совокупность свойств уже охарактеризованных веществ не может объяснить многообразие фармакологических эффектов продуктов пчеловодства в неочищенном виде. Мёд, прополис, пыльца, перга маточное молочко содержат в своем составе целый комплекс полезных компонентов: углеводов, белков, витаминов, микроэлементов и других биологически активных веществ [52, 68].
Продукты пчеловодства быстро усваиваются, хорошо переносятся, в большинстве случаев не имеют побочного действия и противопоказаний к применению, за что с каждым годом приобретают огромную популярность. Кроме того, широкий спектр биологических эффектов продуктов пчеловодства позволил найти им применениев фармакологии и медицине [24].Создание на их основе биологически активных добавок и лекарственных средств остается актуальным направлением современных исследований.
Данные последних исследований свидетельствуют о достаточно большом содержании регуляторных пептидов, витаминов, минеральных веществ и даже гормонов в пыльце пчел, так называемой пчелиной обножке [57]. Так как биологически активные пептиды влияют практически на все физиологические процессы и регулируют деятельность всех регуляторных систем, перспективным направлением является изучение пептидного спектра 4
пчелопродуктов с целью создания новых лекарственных препаратов на их основе. По своей калорийности и содержанию питательных веществ пыльцу приравнивают к таким продуктам, как пшеничная мука. 20 г пыльцы соответствуют 1 кг мяса, но это в несчетное число раз наиболее ценный белковый продукт. Она является прекрасным лечебным и профилактическим средством при многих заболеваниях, а также биостимулятором, благотворно влияющим на организм. Пыльца содержит все аминокислоты и микроэлементы, необходимые для нормального развития организма. Особенно много в ней калия, меди, железа и кобальта. Провитамина А (каротина) в пыльце в 20 раз больше, чем в моркови. В ней есть витамины группы В, Е, С, D, Р, РР, К и др., фитогормоны, стимулирующие рост тканей, антибактериальные вещества, а также соединения, обладающие противосклеротическим, противовоспалительным, антиоксидантным, капилляроукрепляющим, мочегонным, желчегонным, противоопухолевым и другими свойствами.
240 полезных для организма человека веществ обнаружено в пыльце, в том числе ферменты, играющие важную роль в процессах обмена веществ и регулирующие наиважнейшие биохимические процессы [43]. Пыльца различных растений отличается по своему составу, что сказывается на ее лечебно-профилактических свойствах.
Перга также является одним из ключевых продуктов пчеловодства, содержащим в своем составе усваиваемые белки, пептиды, незаменимые аминокислоты, углеводы, незаменимые жирные кислоты, флавоноиды, минеральные вещества, витамины и другие полезные соединения. Перга является ценным пищевым продуктом и находит широкое применение в качестве биологически активной добавки. Сложный многокомпонентный состав перги обуславливает все многообразие биологических эффектов этогопчелопродукта. Известно, что перга обладает антиоксидантным, противоопухолевым действием, оказывает благотворный эффект на процесс кроветворения. Под действием перги в крови происходит увеличение гемоглобина, эритроцитов и ретикулоцитов. Помимо всего перечисленного перга благоприятно влияет на метаболические процессы, происходящие в организме. Перга, как и пчелиная обножка, имеет следующие биологические эффекты: анаболический, кардиотонический, антитоксический,радиопротекторный, иммуностимулирующий и другие [32]....
1. Разработана технология выделения пептидов из различных продуктов пчеловодства, основанная на ультрафильтрации, гель-фильтрации, ионообменной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии экстракта цветочной пыльцы и раствора перги.
2. Метод гель-фильтрации может служить одним из предварительных этапов подготовки фракций белков и пептидов для их дальнейшего разделения, например, методом ВЭЖХ, как в нашем случае.
3. Показана неэффективность метода ионообменной хроматографии для разделения пептидов перги.
4. Выявлено, что перга и пыльца содержат высокое количество пептидов низкой молекулярной массы.
5. Высокоэффективная жидкостная хроматография может служить методом идентификации ботанического происхождения мёда по обнаружению присутствия в нём пептидов пыльцы.
6. Широкий спектр пептидов низкой молекулярной массы и разнообразный аминокислотный состав обножки и перги предварительно объясняет механизмы физиологических эффектов препаратов на основе данных пчелопродуктов.
1. Аветисянт Г.А. Разведение и содержание пчел. Москва: «Колос», 2005. 271 с.
2. Айвазов Б. В. Практическое руководство по хроматографии. М.: Высшая школа, 1968. 279 с.
3. Асафова Н.Н.,Орлов. Б. Н., Козин Р.Б. Физиологически активные продукты пчелиной семьи. Нижний Новгород: Изд-во Ю.А. Николаев, 2001. 368 с.
4. Астраускене А.Э.,Мачекас К.В., Кадзяускене А.Ю., КондротенеД.И. Ботанический анализ перги // Днепропетровск: Пчеловодство. 1990. С. 1-6.
5. Бантишева Л. Г. Продукты пчеловодства и наше здоровье. Москва, 1992. 448 с.
6. Белки: «Химическая энциклопедия» - изд. «Советская энциклопедия», М., 1988.
7. Борт Р. Лечебная сила мёда прополиса, пыльцы и других продуктов пчеловодства. Харьков, 2016. 96 с.
8. Брок Т. Мембранная фильтрация: пер. с англ. М.: Мир, 1987. 464 с.
9. Биологически активные пептиды, выделенные из укропа пахучего. Бурдина А.В., Ильина А.П., Куликова О.Г., Мальцев Д.И., Ямсков И.А.,Ямскова В.П. Прикладная биохимия и микробиология. 2015. Т. 51. - №3С. 348-353.
10. Глушков Н.М. Цветочная пыльца, собираемая пчелами, и пути ее использования. М.: Московский рабочий, 1964. 152 с.
11. Гомазков О.А. Функциональная биохимия регуляторных пептидов. М.: Наука. 2014, 160с.
12. Гребенников Е.А. Все о мёде. М.: Книжный дом, 2005. 739 с.
13. Доусон Р., Эллиот Д.,Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М.: Мир, 1991. 544 с.
14. Зайцева Г.П., Виноградова Т.В. Пыльца и перга химический и биологический состав. Пасека. Энциклопедия пчеловодства. 2010. С. 1-3.
15. Иванов В.Г. Биологически активные пептиды и их будущее в медицине.М.: Колос С 1982. 418 с....(72)