ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ФРАКЦИИ ПЕПТИДОВ ПЕРГИ С МОЛЕКУЛЯНОЙ МАССОЙ 5-10 кДА
|
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Биологические и физиологические свойства перги 7
1.2 Биохимический состав перги 13
1.3 Липиды (жиры) цветочной пыльцы (пчелиной обножки) 17
1.2 Регуляторные пептиды и физиолого-биохимические аспекты их действия 27
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИ 28
2.1 Материал исследования 28
2.2 Методы исследования 28
2.2.1 Определение общего белка методом Лоури 28
2.2.2 Гель-фильтрация 29
2.2.3 Подготовка колонки для гель-фильтрации 30
2.2.4 Определение рабочего объёма колонки, калибровка колонки 30
2.2.5 Получение фракций пептидов методом гель-фильтрации 31
2.2.6 Определение молекулярной массы пептидов методом гельфильтрации 32
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 33
3.1 Разработка метода получения пептидов перги 34
3.2 Результаты определения белков и пептидов методом Лоури 35
3.3 Результаты гель-фильтрации 40
ВЫВОДЫ 46
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 47
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Биологические и физиологические свойства перги 7
1.2 Биохимический состав перги 13
1.3 Липиды (жиры) цветочной пыльцы (пчелиной обножки) 17
1.2 Регуляторные пептиды и физиолого-биохимические аспекты их действия 27
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИ 28
2.1 Материал исследования 28
2.2 Методы исследования 28
2.2.1 Определение общего белка методом Лоури 28
2.2.2 Гель-фильтрация 29
2.2.3 Подготовка колонки для гель-фильтрации 30
2.2.4 Определение рабочего объёма колонки, калибровка колонки 30
2.2.5 Получение фракций пептидов методом гель-фильтрации 31
2.2.6 Определение молекулярной массы пептидов методом гельфильтрации 32
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 33
3.1 Разработка метода получения пептидов перги 34
3.2 Результаты определения белков и пептидов методом Лоури 35
3.3 Результаты гель-фильтрации 40
ВЫВОДЫ 46
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 47
Все более широкое применение продуктов пчеловодства в качестве лечебных и профилактических средств является характерной особенность современной медицины[29,21]. Медоносная пчела - это прекрасный природный фармацевт, который существовал 56 млн. лет до появления первобытного человека. Ещё до научных исследований люди знали, что мед помогает сохранить бодрость и юность, поэтому использовали его и как продукт питания,а также как и лекарство.Мёд пчелиный — продукт, представленный собой частично переваренный в зобе медоносной пчелы нектар. Мед по своему составу является весьма сложным продуктом. Многие исследования показали, что мёд состоит из таких химических составляющих, как сахара вода, гидроксиметилфурфурол (ГМФ), флавоноиды, а также минералы и азотсодержащие вещества.
В настоящее время развитие современного пчеловодства позволило шире развернуть научную работу по изучению механизма действия продуктов, вырабатываемых медоносной пчелой, на организм человека и внедрению их в медицинскую практику. Появился термин «апитерапия».Пчелиная семья даёт человеку возможность получить целебные продукты: мед, воск, прополис,пчелиный хлеб (перга), маточное молочко, пчелиный яд, трутневый расплод (личиночное молочко), забрус, подмор, пыльцу и даже пчелиную огнёвку. Все эти пчелопродукты используются в различных отраслях промышленности, сельского хозяйства и медицине [5].
В долгой истории человечества перга считалася не только питательным веществом, но также и лекарством. Медицинское направление, называемое апитерапией, развилось в последние годы и сейчас предлагает способы лечения многих заболеваний с помощью перги и других продуктов пчеловодства.
В современном мире значительно увеличились знания о химическом составе продуктов пчеловодства, механизмах их действия на организм человека и о возможностях применения их с лечебной целью при самых различных заболеваниях.
В настоящее время одним из самых перспективных направлений в фармакологии является создание биологически активных препаратов на основе биологически активных веществ природного происхождения. Такие препараты характеризуются высокой биологической активностью, менее выраженным побочным действием и высокой биодоступностью.
Ведется активный поиск новых источников природных пептидов, а также разрабатываются всё новые методы химического синтеза пептидных молекул для дальнейшего введения пептидных препаратов в производство.
На данный момент химический синтез новых биологически активных пептидов является весьма затратным и трудоемким процессом. В связи с этим, сейчас более активно ведется работа по выделению биологически активных пептидов из природных источников.
В данной работе особое внимание уделено пчелиной перге. Это уникальное хранилище витаминов и микроэлементов. Перга благотворно влияет на любые виды обмена: минеральный и углеводный, белковый и жировой. Перга оказывает цитотоксическое действие на злокачественно перерожденные клетки, обладает более выраженными антитоксическими свойствами. Она способствует повышению содержания в крови эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина, обеспечивает нормализацию количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы. В состав перги входят биологически активные пептиды, влияющие на физиологические процессы и оказывающие положительный эффект на деятельность большинства регуляторных систем. Следует отметить, что препараты, на основе природных пептидов находят применение при лечении широкого спектра патологий. Они оказывают положительное влияние на физиологические функции организма, являются эндогенными факторами регуляции обменных процессов, то есть действуют по принципу «своих регуляторных молекул», этим объясняется отсутствие побочных эффектов, мягкий модуляторный характер действия и высокая активность [16, 33].
Продукты пчеловодства являются перспективным источником биологически-активных веществ для биотехнологии и медицины. К настоящему времени из мёда, маточного молочка и гомогената личинок пчел выделено и охарактеризовано большое количество индивидуальных веществ, комбинации которых широко используются для создания бадов и лекарственных препаратов. Совокупность свойств уже
охарактеризованных веществ не может объяснить многообразие фармакологических эффектов продуктов пчеловодства в неочищенном виде. Мед, цветочная пыльца (обножка), маточное молочко, прополис - уникальные продукты природы, содержащие в сбалансированном сочетании ряд важнейших биологически активных компонентов: белков, липидов, аминокислот, витаминов, ферментов, макро- и микроэлементов. Обладая достаточно высокой терапевтической активностью, они действуют мягче, физиологичнее синтетических лекарственных средств, характеризуются высокой степью безопасности, а относительная дешевизна делает их доступными практически для всех социальных слоев населения [39,41].
Данные исследований последних лет свидетельствуют о достаточно высоком содержании регуляторных пептидов, витаминов, минеральных веществ и даже гормонов в пыльце пчел, так называемой пчелиной обножке. Поскольку биологически активные пептиды влияют практически на все физиологические процессы и регулируют деятельность всех регуляторных систем, перспективным направлением является изучение пептидного спектра пчелопродуктов с целью создания новых лекарственных препаратов на их основе.
По своей калорийности и содержанию питательных веществ пыльца приравнивается к таким продуктам, как пшеничная мука. 20 г пыльцы соответствуют 1 кг мяса, но это в несчетное число раз более ценный белковый продукт. Она является прекрасным лечебным и профилактическим средством при многих заболеваниях, а также биостимулятором, благотворно действующим на организм. Пыльца содержит все микроэлементы и аминокислоты, необходимые для нормального развития организма. Особенно много в ней калия, железа, меди и кобальта. Провитамина А (каротина) в пыльце в 20 раз больше, чем в моркови.
В ней есть витамины группы В, Е, С, D, Р, РР, К и др., фитогормоны, стимулирующие рост тканей, антибактериальные вещества, а также соединения, обладающие противосклеротическим,
противовоспалительным, капилляроукрепляющим, антиоксидантным, мочегонным, желчегонным, противоопухолевым и другими свойствами.
240 полезных для организма человека веществ обнаружено в пыльце, в том числе ферменты, играющие важную роль в процессах обмена веществ и регулирующие важнейшие биохимические процессы. Пыльца различных растений отличается по своему составу, что сказывается на ее лечебно-профилактических свойствах.
В пыльце, собранной пчелами, и перге содержатся биологически активные вещества не только растительного, но и животного (пчелиного) происхождения. Этим объясняется их наиболее ярко выраженный терапевтический эффект по сравнению с настоями и отварами лекарственных трав.
Цель данной работы - выделение и изучение физико-химических свойств пептидов перги.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Разработать способ получения экстракта перги;
2. Определить содержание общего белка методом Лоури;
3. Выделить пептидную фракцию перги методом гель
фильтрации
В настоящее время развитие современного пчеловодства позволило шире развернуть научную работу по изучению механизма действия продуктов, вырабатываемых медоносной пчелой, на организм человека и внедрению их в медицинскую практику. Появился термин «апитерапия».Пчелиная семья даёт человеку возможность получить целебные продукты: мед, воск, прополис,пчелиный хлеб (перга), маточное молочко, пчелиный яд, трутневый расплод (личиночное молочко), забрус, подмор, пыльцу и даже пчелиную огнёвку. Все эти пчелопродукты используются в различных отраслях промышленности, сельского хозяйства и медицине [5].
В долгой истории человечества перга считалася не только питательным веществом, но также и лекарством. Медицинское направление, называемое апитерапией, развилось в последние годы и сейчас предлагает способы лечения многих заболеваний с помощью перги и других продуктов пчеловодства.
В современном мире значительно увеличились знания о химическом составе продуктов пчеловодства, механизмах их действия на организм человека и о возможностях применения их с лечебной целью при самых различных заболеваниях.
В настоящее время одним из самых перспективных направлений в фармакологии является создание биологически активных препаратов на основе биологически активных веществ природного происхождения. Такие препараты характеризуются высокой биологической активностью, менее выраженным побочным действием и высокой биодоступностью.
Ведется активный поиск новых источников природных пептидов, а также разрабатываются всё новые методы химического синтеза пептидных молекул для дальнейшего введения пептидных препаратов в производство.
На данный момент химический синтез новых биологически активных пептидов является весьма затратным и трудоемким процессом. В связи с этим, сейчас более активно ведется работа по выделению биологически активных пептидов из природных источников.
В данной работе особое внимание уделено пчелиной перге. Это уникальное хранилище витаминов и микроэлементов. Перга благотворно влияет на любые виды обмена: минеральный и углеводный, белковый и жировой. Перга оказывает цитотоксическое действие на злокачественно перерожденные клетки, обладает более выраженными антитоксическими свойствами. Она способствует повышению содержания в крови эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина, обеспечивает нормализацию количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы. В состав перги входят биологически активные пептиды, влияющие на физиологические процессы и оказывающие положительный эффект на деятельность большинства регуляторных систем. Следует отметить, что препараты, на основе природных пептидов находят применение при лечении широкого спектра патологий. Они оказывают положительное влияние на физиологические функции организма, являются эндогенными факторами регуляции обменных процессов, то есть действуют по принципу «своих регуляторных молекул», этим объясняется отсутствие побочных эффектов, мягкий модуляторный характер действия и высокая активность [16, 33].
Продукты пчеловодства являются перспективным источником биологически-активных веществ для биотехнологии и медицины. К настоящему времени из мёда, маточного молочка и гомогената личинок пчел выделено и охарактеризовано большое количество индивидуальных веществ, комбинации которых широко используются для создания бадов и лекарственных препаратов. Совокупность свойств уже
охарактеризованных веществ не может объяснить многообразие фармакологических эффектов продуктов пчеловодства в неочищенном виде. Мед, цветочная пыльца (обножка), маточное молочко, прополис - уникальные продукты природы, содержащие в сбалансированном сочетании ряд важнейших биологически активных компонентов: белков, липидов, аминокислот, витаминов, ферментов, макро- и микроэлементов. Обладая достаточно высокой терапевтической активностью, они действуют мягче, физиологичнее синтетических лекарственных средств, характеризуются высокой степью безопасности, а относительная дешевизна делает их доступными практически для всех социальных слоев населения [39,41].
Данные исследований последних лет свидетельствуют о достаточно высоком содержании регуляторных пептидов, витаминов, минеральных веществ и даже гормонов в пыльце пчел, так называемой пчелиной обножке. Поскольку биологически активные пептиды влияют практически на все физиологические процессы и регулируют деятельность всех регуляторных систем, перспективным направлением является изучение пептидного спектра пчелопродуктов с целью создания новых лекарственных препаратов на их основе.
По своей калорийности и содержанию питательных веществ пыльца приравнивается к таким продуктам, как пшеничная мука. 20 г пыльцы соответствуют 1 кг мяса, но это в несчетное число раз более ценный белковый продукт. Она является прекрасным лечебным и профилактическим средством при многих заболеваниях, а также биостимулятором, благотворно действующим на организм. Пыльца содержит все микроэлементы и аминокислоты, необходимые для нормального развития организма. Особенно много в ней калия, железа, меди и кобальта. Провитамина А (каротина) в пыльце в 20 раз больше, чем в моркови.
В ней есть витамины группы В, Е, С, D, Р, РР, К и др., фитогормоны, стимулирующие рост тканей, антибактериальные вещества, а также соединения, обладающие противосклеротическим,
противовоспалительным, капилляроукрепляющим, антиоксидантным, мочегонным, желчегонным, противоопухолевым и другими свойствами.
240 полезных для организма человека веществ обнаружено в пыльце, в том числе ферменты, играющие важную роль в процессах обмена веществ и регулирующие важнейшие биохимические процессы. Пыльца различных растений отличается по своему составу, что сказывается на ее лечебно-профилактических свойствах.
В пыльце, собранной пчелами, и перге содержатся биологически активные вещества не только растительного, но и животного (пчелиного) происхождения. Этим объясняется их наиболее ярко выраженный терапевтический эффект по сравнению с настоями и отварами лекарственных трав.
Цель данной работы - выделение и изучение физико-химических свойств пептидов перги.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Разработать способ получения экстракта перги;
2. Определить содержание общего белка методом Лоури;
3. Выделить пептидную фракцию перги методом гель
фильтрации
1. Разработан метод получения пептидов перги, молекулярной массой преимущественно 5-10 кДа.
2. Выявлено, что перга содержит достаточное количество
пептидов средней молекулярной массы.
3. Перга содержит большое количество пептидов, которые могут быть разделены на отдельные пептиды сочетанием биохимических методов.
2. Выявлено, что перга содержит достаточное количество
пептидов средней молекулярной массы.
3. Перга содержит большое количество пептидов, которые могут быть разделены на отдельные пептиды сочетанием биохимических методов.
