ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 5
1.1 Пептиды и их значение 5
1.2 Обмен регуляторных пептидов 7
1.3 Методология изучения содержания пептидов в живых объектах... 10
1.4 Химический состав меда 14
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 22
2.1 Материалы исследования 22
2.2 Методы исследования 22
2.2.1 Гель-фильтрация 22
2.2.2 Метод ионообменной хроматографии 23
2.2.3 Определение белка и пептидов по Лоури и по Бредфорду 26
2.2.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография 27
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 29
3.1 Изучение пептидов меда методом гель-фильтрации и ионообменной
хроматографии 29
3.2 Изучение пептидов меда методом ультрафильтрации и ВЭЖХ 35
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 43
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 44
Мед - уникальный природный дар, который получил широкое признание ни только как высококалорийный и максимально сбалансированный по пищевым факторам продукт питания, но и как оздоравливающий фактор применяемый в диетологии, медицине, спорте, косметике [6, 62]. Спектр пищевых продуктов, содержащих мед, а также оздоравливающих преператов (БАДы) чрезвычайно широк и, по- видимому, в силу повышающего интереса исследователей к физиологически активным регуляторам обмена веществ природного происхождения несомненно будет увеличиваться [20, 21].
Биологическая ценность меда определяется химическим составом его компонентов как растительного, так и животного происхождения, сочетающего в себе ни только необходимые вещества для построения органов, систем, организма в целом при развитии, росте подрастающего поколения и поддержания жизнеспособности пчелиной семьи, но и все необходимые вещества, управляющие обменными процессами в организме на всех стадиях существования особей пчел, включая обеспечение защиты от неблагоприятных факторов воздействия. На сегодня в меде идентифицировано свыше 300 компонентов различной химической природы. Многие из них хорошо изучены и по их биологической роли [5].
Остается, однако, много вопросов, касающихся понимания молекулярно-биохимических механизмов, лежащих основе
положительного действия меда, роли при этом отдельных компонентов, обуславливающих физиолого-биохимический эффект.
В последние годы в качестве факторов регуляции обмена веществ в организме большая роль отводится веществам пептидной природы [2, 3, 4]. Пептиды обнаруживаются во всех биологических объектах и чрезвычайно разнообразны как по строению, так и по физиолого-биохимическому действию на живые организмы [30]. Они обладают очень высокой биологической активностью и действуют в чрезвычайно малых концентрациях [30, 63].
Мы предположили, что подобные вещества присутствуют в меде и они ответственны за определенные его физиологические свойства. На сегодня пептиды меда остаются не изученными. В последние несколько лет на кафедре «Общая биология и биохимия» Пензенского государственного университета велись активные исследования по изучению пептидного состава пчелопродуктов, включая пчелиный мёд, а также изучение биологически активных свойств выделенных пептидных фракций.
Цель нашей работы заключается в выделении и изучении химикофизических свойств пептидов мёда двумя подходами - классическим, с применением сочетания методов высаливания, гель-фильтрации и ионообменной хроматографии и современным, с применением аппаратных методов ультрафильтрации и ВЭЖХ.
В связи с поставленной целью в работе решаются следующие задачи:
Изучение и анализ современных литературных данных о методах определения качества и натуральности мёда, его химическом составе, содержании в его составе биологически активных компонентов.
Разработка метода выделения пептидной фракции из мёда.
Изучение физико-химических свойств пептидных фракций мёда методами хроматографии.
Бакалаврская работа изложена на 49 листах, содержит 5 рисунков, и список литературы из 64 источников, 46 на русском и 18 на английском языках.
В результате проведенной работы было разработано несколько методик анализа пептидных компонентов мёда, включающих в себя определения белка методом Лоури, Бредфорда, гель-фильтрацию и ионообменную хроматографию. Второй подход основан на применении аппаратных методик - ультрафильтрации и ВЭЖХ. Учитывая природные факторы ранее исследованных сортов мёда, можно предположить, что описанные нами виды могут использоваться в качестве фармакологических препаратов.
Таким образом из проделанной работы можно сделать следующие выводы:
1. Показано, что среднее содержание пептидов в мёде составляет 0,4% от сухой массы, что составляет около 50% от общего содержания лоури-положительных компонентов. Данные показатели характерны для натурального мёда, и могут использоваться для определения качества и натуральности мёда.
2. Методами гель-фильрации и ионообменной хроматографии было установлено, что содержание положительно и отрицательно заряженных групп пептидов мёда примерно одинаково. При этом спектр пептидов достаточно широк - от молекулярной массы 300 до 10000 Да.
3. Методом ВЭЖХ после ультрафильтрации было установлено, что в подобранных нами условиях хроматографирования пептиды меда с молекулярной массой до 5000 Да представлены группой из как минимум 11 индивидуальных пептидов.
4. Наиболее подходящим методом экспресс-анализа качества мёда на основе определения пептидных компонентов является высокоэффективная жидкостная хроматография, которая позволяет не только оценить общее количество пептидов, но и идентифицировать их спектр.
