ИЗУЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В РАМКАХ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЙ ПЕПТИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ
|
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Пептидные препараты и их применение 7
1.1.1 Пептидная фармакокинетика 8
2.1 Доклинические исследования пептидных препаратов 10
2.1.1 Возможные пути введения 14
2.1.2 Физиологические эффекты 15
2.1.3 Патоморфологическая оценкав доклинических исследованиях 17
3.1 Гематологические и биохимические показатели крови, применяемые
для исследований в доклинической оценке безопасности лекарств 19
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВНИЯ 23
2.1 Методы гистологического исследования 23
2.1.1 Окраска гематоксилин-эозином 24
2.1.2 Окраска по методу Вейгерт-Ван-Гизона 24
2.1.3 Трихромное окрашивание по Массону 25
2.1.4 Окрашивание кислым орсеином 26
2.2 Гематологические методы исследования 26
2.2.1 Окраска по Романоскому-Гимзе 26
2.2.2 Подсчет количества форменных элементов крови (лейкоцитов,
эритроцитов) в камере Горяева 27
2.3 Биохимические методы исследования 28
2.3.1 Определение активности аминотрансфераз (АЛТ и ACT) в
сыворотке крови (метод Райтмана-Френкеля) 28
2.3.2 Количественное определение содержания мочевины в сыворотке
крови 29
2.3.3 Количественное определение активности щелочной фосфатазы в
сыворотке крови 29
2.3.4 Определение содержания общего белка в сыворотке крови
биуретовым методом 29
2.3.5 Определение содержания альбумина в сыворотке крови
колориметрическим методом с бромкрезоловым зелёным 30
2.3.6 Количественное определение активности гамма-
глутамилтрансферазы в сыворотке крови методом по конечной точке ... 30
2.3.7 Количественное определение содержания креатинина в сыворотке
крови на основе реакции Яффе с депротеинизацией 30
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 32
3.1 Результаты проведения массометрии внутренних органов
экспериментальных животных и рассчет их массовых коэффициентов 32
3.2 Результаты патоморфологической оценки внутренних органов
животных опытной и контрольной групп 34
3.3. Результаты исследования основных показателей биохимического анализа крови лабораторных животных 45
3.4 Результаты исследования гематологических показателей опытной и контрольной групп 47
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 51
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 53
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Пептидные препараты и их применение 7
1.1.1 Пептидная фармакокинетика 8
2.1 Доклинические исследования пептидных препаратов 10
2.1.1 Возможные пути введения 14
2.1.2 Физиологические эффекты 15
2.1.3 Патоморфологическая оценкав доклинических исследованиях 17
3.1 Гематологические и биохимические показатели крови, применяемые
для исследований в доклинической оценке безопасности лекарств 19
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВНИЯ 23
2.1 Методы гистологического исследования 23
2.1.1 Окраска гематоксилин-эозином 24
2.1.2 Окраска по методу Вейгерт-Ван-Гизона 24
2.1.3 Трихромное окрашивание по Массону 25
2.1.4 Окрашивание кислым орсеином 26
2.2 Гематологические методы исследования 26
2.2.1 Окраска по Романоскому-Гимзе 26
2.2.2 Подсчет количества форменных элементов крови (лейкоцитов,
эритроцитов) в камере Горяева 27
2.3 Биохимические методы исследования 28
2.3.1 Определение активности аминотрансфераз (АЛТ и ACT) в
сыворотке крови (метод Райтмана-Френкеля) 28
2.3.2 Количественное определение содержания мочевины в сыворотке
крови 29
2.3.3 Количественное определение активности щелочной фосфатазы в
сыворотке крови 29
2.3.4 Определение содержания общего белка в сыворотке крови
биуретовым методом 29
2.3.5 Определение содержания альбумина в сыворотке крови
колориметрическим методом с бромкрезоловым зелёным 30
2.3.6 Количественное определение активности гамма-
глутамилтрансферазы в сыворотке крови методом по конечной точке ... 30
2.3.7 Количественное определение содержания креатинина в сыворотке
крови на основе реакции Яффе с депротеинизацией 30
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 32
3.1 Результаты проведения массометрии внутренних органов
экспериментальных животных и рассчет их массовых коэффициентов 32
3.2 Результаты патоморфологической оценки внутренних органов
животных опытной и контрольной групп 34
3.3. Результаты исследования основных показателей биохимического анализа крови лабораторных животных 45
3.4 Результаты исследования гематологических показателей опытной и контрольной групп 47
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 51
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 53
Актуальность исследования. Основная задача доклинического исследования достоверный прогноз безопасности использования лекарственных препаратов. Проблема обнаружения токсических эффектов фармакологических средств в экспериментах остается актуальной, даже не смотря на то, что происходит постоянное развитие методических подходов, которые дают возможность понять степень риска их предстоящего клинического использования, определить возможные органы-мишени, степень повреждения и вероятность их восстановления. Нынешние нормы морали резко ограничивают проведение токсикологических исследований на высших животных, но тем не менее, на сегодняшнее время при выявлении безопасности новых лекарственных средств опыты на животных выбора других возможных решений не имеют. Огромная затрата времени, продолжительность, высокая стоимость исследований на животных делает существенно важным для нашего времени возрастание степени их информативности.
Нынешняя фармакология стремительно развивается и занимается производством действенных лекарственных средств, в основе которых имеются малотоксичные вещества, производством наноразмерных готовых лекарственных форм, которые гарантируют увеличение фармакологического действия и совершенствуют способность препарата усваиваться. С развитием вышеперечисленных направлений стали возникать проблемы в лекарственной токсикологии. К примеру, малотоксичные лекарственные вещества проявляют слабый токсический эффект, который посредством лабораторной диагностики выявить не удается. Большие сложности появляются при определении различий в токсических эффектах схожих по строению фармакологических средств.
Лабораторно-клинические исследования, в частности токсикологическую оценку допустимых лекарственных средств. Но их возможности применяются не полностью. Следует отметить, что патоморфологические исследования оказывают содействие при обнаружении взаимосвязи между строением и способностью фармакологического вещества изменять состоянии и функции живого организма. Также на их основе возможно предсказание токсических эффектов организма на введение препаратов, которые по классификации токсичности принадлежат к малотоксичным веществам.
В лекарственной токсикологии исследования структуры тканей нацелены на обнаружение биологических деструктивных процессов. Приспособительные реакции организма на повреждение тканей и органов на введение фармакологического вещества не учитываются. Проводя анализ компенсаторно-приспособительных процессов можно понять возможный механизм фармакологического действия препарата и на этапе доклинического исследования предсказать другие формы его фармакологической деятельности.
Все вышеупомянутое позволило выявить объект исследования, его цель и задачи.
Объектом исследования являются биохимические и гематологические показатели крови, морфологическое исследование внутренних органов.
Предмет исследования: возможное изменение биохимических, гематологических и морфологических показателей под воздействием пептидного препарата.
Цель работы — изучение биохимических показателей крови и патоморфологическая оценка внутренних органов лабораторных животных в рамках доклинических испытаний пептидных препаратов.
Для реализации поставленной цели выдвинуты следующие задачи:
1. Провести массометрию внутренних органов экспериментальных животных и рассчитать их массовые коэффициенты;
2. Изучить и провести сравнительное патоморфологическое исследование изменений внутренних органов экспериментальных животных под воздействием пептидного препарата;
3. Изучить методы определения биохимических показателей крови и провести их исследование, имеющее значение для оценки функционального состояния органов и тканей;
4. Исследовать и оценить тип проникающей способности токсического действия по гематологическим показателям экспериментальных животных при введении пептидного препарата.
Выпускная квалификационная работа написана на 60 листах, содержит 24 рисунка, 3 таблицы и список литературы на русском и английском языках из 65 источников.
Нынешняя фармакология стремительно развивается и занимается производством действенных лекарственных средств, в основе которых имеются малотоксичные вещества, производством наноразмерных готовых лекарственных форм, которые гарантируют увеличение фармакологического действия и совершенствуют способность препарата усваиваться. С развитием вышеперечисленных направлений стали возникать проблемы в лекарственной токсикологии. К примеру, малотоксичные лекарственные вещества проявляют слабый токсический эффект, который посредством лабораторной диагностики выявить не удается. Большие сложности появляются при определении различий в токсических эффектах схожих по строению фармакологических средств.
Лабораторно-клинические исследования, в частности токсикологическую оценку допустимых лекарственных средств. Но их возможности применяются не полностью. Следует отметить, что патоморфологические исследования оказывают содействие при обнаружении взаимосвязи между строением и способностью фармакологического вещества изменять состоянии и функции живого организма. Также на их основе возможно предсказание токсических эффектов организма на введение препаратов, которые по классификации токсичности принадлежат к малотоксичным веществам.
В лекарственной токсикологии исследования структуры тканей нацелены на обнаружение биологических деструктивных процессов. Приспособительные реакции организма на повреждение тканей и органов на введение фармакологического вещества не учитываются. Проводя анализ компенсаторно-приспособительных процессов можно понять возможный механизм фармакологического действия препарата и на этапе доклинического исследования предсказать другие формы его фармакологической деятельности.
Все вышеупомянутое позволило выявить объект исследования, его цель и задачи.
Объектом исследования являются биохимические и гематологические показатели крови, морфологическое исследование внутренних органов.
Предмет исследования: возможное изменение биохимических, гематологических и морфологических показателей под воздействием пептидного препарата.
Цель работы — изучение биохимических показателей крови и патоморфологическая оценка внутренних органов лабораторных животных в рамках доклинических испытаний пептидных препаратов.
Для реализации поставленной цели выдвинуты следующие задачи:
1. Провести массометрию внутренних органов экспериментальных животных и рассчитать их массовые коэффициенты;
2. Изучить и провести сравнительное патоморфологическое исследование изменений внутренних органов экспериментальных животных под воздействием пептидного препарата;
3. Изучить методы определения биохимических показателей крови и провести их исследование, имеющее значение для оценки функционального состояния органов и тканей;
4. Исследовать и оценить тип проникающей способности токсического действия по гематологическим показателям экспериментальных животных при введении пептидного препарата.
Выпускная квалификационная работа написана на 60 листах, содержит 24 рисунка, 3 таблицы и список литературы на русском и английском языках из 65 источников.
Таким образом, в ходе выполнения бакалаврской работы были изучены биохимические показатели крови и проведена патоморфологическая оценка внутренних органов лабораторных животных в рамках доклинических испытаний пептидных препаратов.
Исходя из полученных результатов, можно сделать следующие выводы:
1. Проведена массометрия и расчет массовых коэффициентов в отношении влияния пептидного препарата на печень, сердце, легкие, селезенку, почки, надпочечники, головной мозг. Выполнено макроскопическое исследование органов опытной и контрольной групп, которое не выявило каких-либо аномальных изменений текстуры.
2. Проведено сравнительное патоморфологическое исследование изменений внутренних органов экспериментальных животных под воздействием пептидных препаратов. В результате проведённого патологоанатомического вскрытия, последующих макроскопических и микроскопических исследований установлено, что пептидный препарат, не вызывал каких-либо существенных изменений строения внутренних органов крыс, включая печень, почки, сердце, легкие, головной мозг, селезенку и надпочечники. Признаков токсичности отмечено не было.
3. Изучено и проведено исследование основных показателей биохимического анализа крови лабораторных животных опытной и контрольной групп. В результате, не было выявлено значительных изменений по сравнению с контролем биохимических показателей крови таких как: ACT, АЛТ, ГГТ, мочевина, креатинин, щелочная фосфатаза, альбумин, общий белок. Это указывает на то, что пептидный препарат при интраназальном введении по 10 мкл/животное в дозе 300 мкг/кг не вызывал неблагоприятного токсического эффекта, так как значения оставались в пределах физиологической нормы.
4. Исследованы гематологические показатели экспериментальных животных. Гематологические параметры оценивались для получения дополнительной информации, связанной с токсичностью. Получены показатели количества лейкоцитов с дифференциальным подсчетом различных форм лейкоцитов, а также эритроцитов и тромбоцитов, а также выполнен анализ подсчета количества лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева. В ходе эксперимента не было выявлено отклонений значений гематологических показателей, результаты оставались в пределах физиологической нормы.
Исследование безопасности пептидного препарата осуществлялось путем проведения общих доклинических экспериментов для выявления потенциальных токсических эффектов. Исходя из результатов, можно сделать вывод о том, что пептидный препарат на основе маточного молочка не обладает токсическими эффектами, и он может быть использован при разработке новых биологически активных добавок и лекарственных средств.
Исходя из полученных результатов, можно сделать следующие выводы:
1. Проведена массометрия и расчет массовых коэффициентов в отношении влияния пептидного препарата на печень, сердце, легкие, селезенку, почки, надпочечники, головной мозг. Выполнено макроскопическое исследование органов опытной и контрольной групп, которое не выявило каких-либо аномальных изменений текстуры.
2. Проведено сравнительное патоморфологическое исследование изменений внутренних органов экспериментальных животных под воздействием пептидных препаратов. В результате проведённого патологоанатомического вскрытия, последующих макроскопических и микроскопических исследований установлено, что пептидный препарат, не вызывал каких-либо существенных изменений строения внутренних органов крыс, включая печень, почки, сердце, легкие, головной мозг, селезенку и надпочечники. Признаков токсичности отмечено не было.
3. Изучено и проведено исследование основных показателей биохимического анализа крови лабораторных животных опытной и контрольной групп. В результате, не было выявлено значительных изменений по сравнению с контролем биохимических показателей крови таких как: ACT, АЛТ, ГГТ, мочевина, креатинин, щелочная фосфатаза, альбумин, общий белок. Это указывает на то, что пептидный препарат при интраназальном введении по 10 мкл/животное в дозе 300 мкг/кг не вызывал неблагоприятного токсического эффекта, так как значения оставались в пределах физиологической нормы.
4. Исследованы гематологические показатели экспериментальных животных. Гематологические параметры оценивались для получения дополнительной информации, связанной с токсичностью. Получены показатели количества лейкоцитов с дифференциальным подсчетом различных форм лейкоцитов, а также эритроцитов и тромбоцитов, а также выполнен анализ подсчета количества лейкоцитов и эритроцитов в камере Горяева. В ходе эксперимента не было выявлено отклонений значений гематологических показателей, результаты оставались в пределах физиологической нормы.
Исследование безопасности пептидного препарата осуществлялось путем проведения общих доклинических экспериментов для выявления потенциальных токсических эффектов. Исходя из результатов, можно сделать вывод о том, что пептидный препарат на основе маточного молочка не обладает токсическими эффектами, и он может быть использован при разработке новых биологически активных добавок и лекарственных средств.
