ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Маточное молочко - биологический продукт, состав и свойства 6
1.2 Физико-химические свойства маточного молочка 8
1.3 Химический состав маточного молочка 9
1.4 Роль маточного молочка в выращивании личинок маток пчел 13
1.5 Белки маточного молочка 14
1.6 Физиологические свойства белков маточного молочка 17
1.7 Действие маточного молочка на организм человека. Медико-биологическая активность маточного молочка 18
1.8 Каталазная активность микроорганизмов 20
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 22
2.1 Материалы исследования 22
2.2 Методы исследования 22
2.2.1 Тангенциальная ультрафильтрация 22
2.2.2 Гель-фильтрация 25
2.2.3 Метод Лоури 25
2.2.4 Определение каталазной активности 25
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 27
3.1 Построение калибровочных кривых по БСА 27
3.2 Получение белковых фракций маточного молочка методом гель-фильтрации 27
3.3 Получение тестовых культур микроорганизмов и контроль их качества 29
3.4 Определение каталазной активности микроорганизмов 34
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 39
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
На сегодняшний день практически весь спектр продуктов пчеловодства широко используется в народной медицине. Маточное молочко, прополис, трутневый расплод, пчелиный мёд, перга применяются как биологически активные добавки к пище и паралекарствснные средства. Изучение биологической активности данных продуктов пчеловодства является перспективной задачей, т. к. многие заболевания человека и другие неблагоприятные явления, такие как антибиотикорезистентность, поиск новых биологически активных соединений и прочее, является передовым направлением биологической науки. Таким образом, изучение биологически активных продуктов пчел, а именно изучение свойств маточного молочка, является весьма актуальным и действительно очень важным нс только для общебиологического интереса, а также для медицины и ветеринарии.
Проведено значительное количество исследований, которые показывают, насколько широк спектр применения биологически активных продуктов пчел в животноводстве, медицине и ветеринарной практике. Из меда, трутневого расплода и маточного молочка выделено и охарактеризовано огромное количество индивидуальных веществ, сочетание которых используются для создания лекарственных средств и биологически активных добавок.
Благодаря своему уникальному составу, оно оказывает на организм иммуномодулирующее действие, общетонизирующее, стимулирует обменные процессы, способствует повышению устойчивости к различным инфекциям, интенсивным физическим нагрузкам, а также успешно применяется при лечении многих заболеваний сердечно-сосудистой, бронхо¬легочной систем, желудочно-кишечного тракта, однако механизм действия маточного молочка на организм пока еще недостаточно изучен, что обуславливает ограниченное применение этого продукта в различных практических целях. Таким образом, изучение биологической активности различных компонентов маточного молочка является актуальной и перспективной задачей.
Целью данного исследования было изучение биологической активности белков маточного молочка на примере влияния белковых фракций маточного молочка на каталазную активность модельных микроорганизмов.
В соответствии с поставленной целью были решены следующие задачи:
1. Выделить белковую фракцию маточного молочка с использованием различных методов фракционирования биомолекул.
2. Получить накопительные, а зачем чистые тестовые культуры микроорганизмов рода Clostridium, Azotobacterи вида Bacillus subtilis.
3. Воздействовать на тестовые культуры полученными белковыми фракциями маточного молочка и изучить их биологическое действие на примере изменения каталазной активности микроорганизмов.
Дипломная работа написана на 44 листах, содержит 5 таблиц, 12 рисунков и 45 источников литературы.
Продукты пчеловодства пользуются большой популярностью в качестве исходного сырья для производства биологически активных добавок. Однако существует достаточно мало исследований на тему изучения механизмов проявления биологической активности маточного молочка, трутневого расплода, перги и т.д. Одним из перспективных направлений исследований в данной области является изучение белково-пептидного состава продуктов пчеловодства.
В данной работе была изучена биологическая активность белковых фракций маточного молочка: влияние на каталазную активность бактерий рода рода Clostridium, Azotobacter и вида Bacillus subtilis.
В ходе исследования было изучено влияние белков маточного молочка на каталазную активность микроорганизмов.
Но результатам исследования можно сделать следующие выводы:
1. В состав маточного молочка входят белки, которые можно выделить и фракционировать методом гель-фильтрации.
2. Полученные в результате исследования фракции белков изменяют каталазную активность микроорганизмов рода Clostridium и вида Bacillus subtilis.
3. Каталазная активность микроорганизмов Azotobacter остается неизменной.
1. Белик Э.В. Большой современный справочник пчеловода - Донецк, 2004.
2. Бердышев Г.Д., Жданов Г. Продукты пчеловодства в биологии и медицине /Деп. в ВИНИТИ 01.08.91 №3328-139 // Пермь: Перм. Госмедин-т., 1991. 1963 с.
3. Бондаренко И.Ф. Биологически активные продукты пчеловодства и их использование//Горький, 1990. С.102-104.
4. Бондарчук Л. И., Кожура И.М., Рябуха В.И., Противоопухолевые свойства маточного молочка //Апитерапия сегодня: Тез. докл. V науч.- практ. конф, по апитерапии. Рыбное, 1997. С. 93-94.
5. Брагин Е.О. Нейрохимические механизмы регуляции болевой чувствительности // М.- Издательство университета дружбы народов. 1991. - С. 248.
6. Брок, Т. Мембранная фильтрация: пер. с англ. / Т. Брок. - М.: Мир, 1987.464 с.
7. Вахонина Т. В., Кривцов И. И., Бурмистрова Л.А, Агафонов А.В. Маточное молочко: химический состав, свойства, хранение И Современные технологии в пчеловодстве: Материалы научно-практической конференции - Рыбное, НИИ пчеловодства, 2004.
8. Вахонина Т.В. Биологически активные продукты пчеловодства И Т.В. Вахонина-Рязань, 1993. С. 20-23.
9. Вахонина Т.В., Покровский С.А. Природный пчелиный продукт маточное молочко и его биологически активные вещества //XXXI Международный конгресс по пчеловодству Апимодии, Варшава, Польша. - Бухарест: Апимондия, 1987.С.511.
10. Габитова Д. М., Рыжикова В. О., Рыжикова М. А. Антиоксидантная защитная система организма // Башкирский химический журнал. 2006. Т. 13. № 2. С. 94-96
11. Дубцова Е.А. Состав, биологические свойства меда, пыльцы и маточного молочка и возможность их применения в лечебном питании И Экспериментальная и клиническая гас троэнтерология 2009. №3 С.36-41.
12. Кривцов Н.И., Лебедев В.И. Получение и использование продуктов пчеловодства. - М.: Нива России, 1993.285 с.
13. Кривцов Н.И., Лебедев В.И. Продукты пчеловодства/ 2-е изд. - М.: Нива Росеи, 1995.254 с.
14. Кривцов НИ., Лебедев В.И. Продукты пчеловодства/2-е изд. - М.: Нива Росеи, 1995.25 с.
15. Лудянский Э.А. Апитерапия. - Вологда: Полиграфист, 1994.458 с.
16. Магдалска 3. Попытка лечения расстройств системы свертывания крови и аплазии при помощи маточного молочка //XXXI Международный конгресс по пчеловодству. Бухарест: Апимондия, 1987. С. 497.
17. Макарова В.Г., Рябков А.Н. Узбекова Д.Г и др Изучение кардиопротекторного действия продуктов пчеловодства. // Апитерапия сегодня: Тез. Докл. III науч.- практ. Конф. Рыбное, 1994.С. 7-9
18. Макарова В.Г., Сауткин М.Ф., Узбекова Д.Г. Влияние некоторых композиций продуктов пчеловодства на физическое состояние человека // Апитерапия сегодня: (сб. 10): материалы междунар. науч-практ. конф. По апитерапии. - Рыбное: НИИП, 2002.С. 16-189
19. Неделька А.Ф. Маточное молочко как биогенный стимулятор в комплексном лечении дистрофии сетчатки и зрительного нерва // Продукты пчеловодства в сельском хозяйстве и медицине: Тез. докл. обл. конф. - Вологда, 1987.С. 58-59.
20. Рязанцева Л. Т. Ферменты-антиоксиданты: структурно-функциональные свойства и роль в регулировании метаболических процессов // Вести. Воронежского гос. техн, ун-та. 2011. Т. 7. № 2. С. 126-129
21. Симакова В.М., Алексеева В.А., Исаева И.В., Плетень А.П. Исследование состава маточного молочка // Фармация. М.: 1995.244 - 307 с.
22. Скоупс, Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс. М.: Мир, 1985. - 358 с.
23. Такенака Т., Протеины, пептиды и аминокислоты, содержащиеся в маточном молочке. // 29-Международный конгресс по пчеловодству, 1983, Будапешт, Венгрия. Бухарест:Изд-во Апимондии. С. 185
24. Хисматулина Н.З. Апитерапия.- Пермь: Мобиле, 2005 - 296
25. Чудаков В.Г. Технология продуктов пчеловодства. М.: Колос, 1979-160 с.
26. Чулошникова И. А., Иващенко М.Н. Влияние молочка пчелиного маточного на некоторые биохимические показатели крови И Апитерапия сегодня: (сб. 10): материалы международной научно-практической конференции по апитерапии. - Рыбное: НИИП, 2002.С.107- 109
27. Шимут Я., Биликова К., Ковачкова Е. Содержащиеся в маточном молочке белки как средство разработки необходимых для здоровья средств. Laboratory of Genetic Enginering, Institute of Chemistry 11 Bratislava: 2009
28. Bilikova K., Hanes J., Nordhoff E., Saenger W., Klaudiny J., Simuth J. Apisimin, a new valin-rich peptide from honeybee (Apis mellefera L.) royal jelly: purification and molecular characterization. FEBS Letters 528: 2002.P. 125 - 129
29. Brouwers E.V.M. Measurement of hypopharyngeal gland activity in the honeybee. J. Apic. Res. 21: 1982.P. 193-198.
30. Fujiwara S., Imai J., Fujiwara M., Yaeshima T., Kawashima T. And Kobayshi K. A protent antibacterial protein in royal jelly. Purification and determination ogthe primary structure of royalisin. J. Biol. Chem.: 1990 P. 265
31. Gontarski H. Uber die Vertikalorientierung der Bienenbeim Bau der Waben und bei der Anlage des Brutnestes. Z. vergl. Physiol. 31: P. 652 - 670
32. Halberstadt K. Ein Beitrag zur Ultrastruktur und zum Funktionszyklus der Pharynxdruse der Honigbiene (Apis mellifera L.) Cytobiology 2: 1970 P. 341- 358.
33. Halberstadt К. Elekrophoretische Untersuchungen zur Sekrctionstatigkeit der Hypopharynxdruse der Honigbiene (Apis mellifera L.). Insectes Sociaux27: 1980 P. 61-77
34. Hanes J., Simuth J. Indentification and partial characterization of the major royal jelly protein of the honey bee (Apis mellifera L.). J. Apic. Res. 31: 1992 P. 22-26
35. Kamakura, M. Royalactin induces queen differentiation in honeybees. Nature 473: 2011 P. 245-250
36. Kimura Y., Kajiyama S., Kanacda J., Izukawa T. and Yonekura M. N- linked sugar chain of 55-kDa royal jelly glycoprotein. Biosci. Biotechnol. Biochem. 60: 1996 P. 2099-2102
37. Kramer K. J., Childs C. N., Spiers R. D, and Jacobs R. M. Purification of insulin-like peptides from insect haemolyph and royal jelly. Insect. Biochem. 12: 1982 P. 91 -98.
38. Kramer K. J., Tager H. S. and Childs C.N. Insulinlike and glucagon- like peptides in insect hcmoglymph. Insect Biochem. 10: 1980 - P. 179-182
39. Kratky E. Morphologic und Physiologic der Drusem im Kopf und Thorax der Honigbiene. Z. wiss. Zool. 139: 1931 P. 120-201
40. Schmitzova J., Klaudiny J., Albert S. et al. A family of major royal jelly proteins of the honeybee Apis mellifera L. Cellular and Molecular Life Sciences. 1998 Р/ 102-103
41. Simuth J. Some properties of the main protein honeybee (Apis mellifera L.) royal jelly. Apidologie 32: 2001 P. 69-80
42. Thien F.C.K., Leung R., Baldo B.A., Weiner J. A., Plomley R. and Czarny D. Asthma and anaphylaxis induced by royal jelly. Clin. Exp. Allergy 26: 1996 P. 216-222
43. Tonks A., Cooper R. A., Price P. C., Molan P.C., Jones К. P. Stimulation of TNFa-release in monocytes by honey. Cytocine 14: 2001 P. 240 - 242
44. Vittek J. and Janci J. Vcelia materska kasicka, SVPL, Bratislava: 1966 P.45-47
45. Yatsunami K., Echigo Т/ Antibacterial action of honey and royal jelly //Honeybee Science, 1985. V. 5, №3. P. 125-130.