Тема: Оптимизация температурного режима высушивания иммобилизованной биферментной системы NADH: FMN - оксидоредуктаза - люцифераза для обеспечения максимальной интенсивности свечения и точности иммобилизованных реагентов.

Современные аналитические методы, основанные на
биолюминесцентных реакциях, катализируемых различными люциферазами, могут обеспечить широкий спектр задач, от мониторинга окружающей среды в человеческой среде (интегральные биологические анализы) до анализа метаболитов и ключевых ферментов необходимых для определения состояния различных заболеваний. Использование биолюминесцентных методов может позволить создать систему, которая включает в себя биологические анализы, основанные на разных уровнях живой организации: биохимический (ферментативный) и биотесты, которые основанны на живых организмах (бактериях и грибах).
Для решения различных задач экологического мониторинга используется большое количество методов биологического тестирования. В том числе широко используются не только живые организмы, но и их ферментативные системы. Однако при использовании ферментов возникает ряд затруднений, таких как: необходимость обеспечения специальных условий для сохранения стабильности препаратов ферментов, неточность дозирования реагентов и т. д. Решением вышеизложенных проблем может быть использование препаратов иммобилизованных ферментов. Иммобилизация является способом фиксирования ферментов внутрь специализированного носителя посредством физико-химических преобразований.
Биотесты на основе иммобилизованных ферментов являются стабильными и используются для определения токсичности различных объектов окружающей среды. Для целей мониторинга качества окружающей среды большой интерес представляет разработка и использование совместно иммобилизованных ферментов и субстратов светящихся бактерий. На сегодняшний день реагент на основе совместно иммобилизованной с субстратами биферментной системы НА0(Р)Н:БМЫ-оксидоредуктаза- люцифераза характеризуется высоким разбросом значений активности при многократных измерениях, что может объясняться влиянием различных условий иммобилизации: температура геля, режим перемешивания компонентов реагента, режим дозирования, температурный режим высушивания реагентов. Влияние условий температурного режима высушивания иммобилизованных совместно с субстратами ферментов светящихся бактерий на активность реагентов и точность результатов анализа изучено мало.
Цель исследования заключалась в определении оптимального температурного режима высушивания и хранения реагентов на основе совместно иммобилизованной с субстратами биферментной системы КАВ(Р)Н:РМЫ-оксидоредуктаза-люцифераза для обеспечения
максимальной интенсивности свечения и минимального разброса значений интенсивности свечения.
Задачи исследования:
1. Оценить влияние температурного режима высушивания иммобилизованной совместно с субстратами биферментной системы НА0(Р)Н:ГМЫ-оксидоредуктаза-люцифераза на активность реагентов и разброс значений максимальной интенсивности свечения.
2. Оценить влияние режима хранения
иммобилизованной совместно с субстратами биферментной системы NAD(P)H:FMN-
оксидоредуктаза-люцифераза на активность реагентов и разброс значений максимальной интенсивности свечения.
Купить

В результате работы были сделаны следующие выводы:
1. Оптимальная температура высушивания и хранения для обеспечения максимальной интенсивности свечения и стабильности активности иммобилизованной совместно с тетрадеканалем и NADH биферментной системы NAD(P)H: FMN - оксидоредуктаза - люцифераза 10 0С.
2. Температурный режим высушивания и хранения иммобилизованной совместно с тетрадеканалем и NADH биферментной системы NADH:FMN-oкcидopeдyктaзa-люцифepaзa не оказывает влияние на разброс значений максимальной интенсивности свечения в диапазоне от 5 до 25 0С и от -5 до 25 0С соответственно.
Купить