ВВЕДЕНИЕ 4
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1 Хемилюминесценция 6
1.1.1 Понятие хемилюминесценции 6
1.1.2 Оценка функционального состояния фагоцитарных клеток 8
1.2 Нейтрофильные гранулоциты 11
1.2.1 Характеристика нейтрофильных гранулоцитов 11
1.2.2 Респираторный взрыв и НГ 12
1.3 Патология болезни Грейвса 15
1.3.1 Антитела к тиротропин-рецептору 15
1.3.2 Адаптивный иммунитет при БГ 16
1.3.3 Цитокины при болезни Грейвса 17
2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ 19
2.1 Объекты исследования 19
2.2 Методы исследования 19
2.2.1 Выделение нейтрофилов из периферической крови 19
2.2.2 Проведение хемилюминесцентного анализа клеток 20
2.2.3 Статистическая обработка результатов 21
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 22
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 26
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 28
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 29
Болезнь Грейвса (БГ) представляет собой аутоиммунное заболевание в патогенезе которого наблюдается выработка антител к рецепторам ТТГ, которые активируют фолликулярные клетки щитовидной железы с образованием избыточного гормона щитовидной железы независимо от механизма обратной связи ТТГ. Этиология БГ, вероятно, является многофакторной, обусловленной сочетанием генетических факторов и факторов окружающей среды [1].
Хотя многие расстройства приводят к гипертиреозу, однако болезнь Грейвса является наиболее частой причиной в западных странах с ежегодной заболеваемостью 20 случаев / 100 000 человек. Заболеваемость достигает пика в возрасте от 30 до 50 лет, но люди могут пострадать в любом возрасте. Пожизненный риск составляет 3% для женщин и 0,5% для мужчин. Долгосрочные изменения в потреблении йода не влияют на риск заболевания, но быстрое восполнение может временно увеличить заболеваемость [2].
В патогенезе БГ ведущая роль, несомненно, принадлежит нарушениям иммунной системы и наиболее реактивными клетками этой системы являются нейтрофильные гранулоциты.
Нейтрофильные гранулоциты (НГ) представляют наибольшую группу лейкоцитов. Они строят первую линию защиты от патогенных микроорганизмов, борясь с ними с помощью фагоцитоза, путем высвобождения антимикробных молекул и производства активных форм кислорода (АФК)[3].
Они также являются воспалительными и регуляторными клетками, способными секретировать хемокины и цитокины и привлекать другие иммунные клетки к месту инфекции. Участие нейтрофилов в процессе разрушения щитовидной железы, который характеризуется всплеском метаболической активности и увеличением в два-три раза кислородного потребления и продукцией токсичных метаболитов (респираторный взрыв), что в условиях нарушения механизмов антиоксидантной защиты включает процесс киллинга тиреоидных клеток и нейтрофильных гранулоцитов.
Целью исследования является изучение особенностей хемилюминесцентной активности нейтрофилов в крови у здоровых людей и людей с болезнью Грейвса.
Задачи:
1. Изучить особенности спонтанной и индуцированной хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных БГ.
2. Провести сравнительный анализ функциональной активности нейтрофилов люминол - и люцигенин - зависимой хемилюминесценции нейтрофилов у здоровых и с БГ людей с помощью хемилюминесцентного анализа.
В результате исследования была изучена способность нейтрофильных гранулоцитов к образованию супероксидного аниона (02 -) с помощью спонтанной и индуцированной хемилюминесценции у лиц с болезнью Грейвса, в сравнении с контрольной группой здоровых лиц.
Была определена активность кислородзависимых окислительных ферментативных систем нейтрофилов и моноцитов, активность которых определяется количеством выделенных АФК. Образование АФК зависит от функционирования сложного мультимолекулярного комплекса, объединенного общим названием НАДФН-оксидазной ферментативной системы и миелопероксидазного комплекса, который играет немаловажную роль в обезвреживании токсичных продуктов метаболизма и образовании ряда АФК.
Также был проведен сравнительный анализ функциональной активности нейтрофилов люминол - и люцигенин - зависимой хемилюминесценции нейтрофилов у здоровых и с БГ людей с помощью хемилюминесцентного анализа.
По данным исследования было установлено:
1) При люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови (в спонтанной и индуцированной люминол-зависимой реакции) в группе больных БГ достоверно наблюдалось значительное увеличение генерации АФК по сравнению с контролем, что выражалось в увеличении площади под кривой (S) хемилюминесцентной реакции и максимального значения интенсивности (Imax).
2) Также по результатам люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови (в спонтанной люцигенин-зависимой реакции) в группе больных БГ наблюдалось достоверное значительное увеличение синтеза первичных АФК по сравнению с контролем, что выражалось в увеличении площади под кривой (S).
3) В зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови в группе больных БГ достоверно было наблюдалось значительное увеличение синтеза первичных АФК по сравнению с контролем, что выражалось в увеличении площади под кривой (S).
4) Единственной особенностью кинетики синтеза супероксид - радикала нейтрофильных гранулоцитов удалось обнаружить при исследовании в зимозан-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции. По достоверным данным у больных БГ наблюдалось снижение времени выхода на максимум (Tmax). Tmax характеризует скорость развития респираторного взрыва в случае регуляторного или антигенного (АГ) воздействия на клетку — с периода восприятия сигнала и до уровня максимальной активации НАДФН- оксидазы . Следовательно, у больных БГ в нейтрофилах крови скорость активации НАДФН-оксидазы при АГ стимуляции замедлена.
