ВВЕДЕНИЕ 3
Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 5
1.1. Системы доставки лекарств 5
1.2. Полимерные микроносители и препараты 8
1.3. Культуры клеток, как система оценки действия препаратов 12
1.4. Полигидроксиалканоаты в качестве микроносителей лекарственных
препаратов 14
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 21
2.1. Материалы исследования 21
2.1.1. Культура клеток HeLa 21
2.2. Методы исследования 22
2.2.1. Получение микрочастиц на основе П3ГБ и П3ГБ/3ГВ с добавление
5-фторура цила 22
2.2.2. Характеристика сконструированных микрочастиц 23
2.2.3. Исследование отто ка лекарственного пре парата in v itro 24
2.2.4. Кулътивирование клеток HELA 24
2.2.5. Исследование цитотоксичности и эффективности действия
полученных частиц в культуре клеток 25
2.2.6 Статистический анализ данных 26
Глава 3. Р ЕЗУЛЬТАТЫ 27
3.1. Характеристика пол имерных ми крочастиц н а основе П 3ГБ и
П3ГБ/3ГВ в комплексе с 5-фторурацилом 27
3.2. Исследование в ыхода 5-фторур ацила из м икрочастиц П3ГБ и
П3ГБ/ЗГВ 30
3.3. Эффективност ь действия с конструиро ванных фор м
противоо пухолевого пре парата 32
СПИСОК ИСПО ЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧ НИКОВ 38
Проблема онкологических заболеваний остается приоритетной для современного общества, медицины и биологии. По данным Международного агентства по изучению рака (МАИР), ежегодно в мире регистрируется более 12 млн. новых случаев рака и около 6,2 млн смертей от него. Ежегодный темп прироста злокачественных новообразований составляет примерно 2%, что превышает на 0,3-0,5% рост численности населения мира. Неутешителен прогноз экспертов ВОЗ: онкологическая заболеваемость во всем мире возрастет к 2050 г. до 24 млн случаев, а смертность до 16 млн. ежегодно регистрируемых случаев [1].
Лекарственные средства занимают важное место в лечении злокачественных новообразований. В настоящее время, системы для доставки химиотерапевтических средств очень разнообразны (липосомы, иммунолипосомы, трансферосомы, мицеллы, дендимеры, наночастицы, нанотрубы, мультифункциональные системы для доставки ЛС и др.) и каждая имеет свои преимущества и недостатки. В основном большинство систем синтетического происхождениями могут образуют токсические продукты в организме, которые вызывают различные осложнения. Поэтому актуально создание более натуральных, экономически выгодных и биосовместимых систем для доставки терапевтических средств.
На сегодняшний день среди биоматериалов, применяемых в медицине и активно изучаемых в фармакологии, выделяют природные полимеры, синтезируемые микроорганизмами - полигидроксиалканоаты (ПГА). Важнейшей их особенностью являются биосовместимость и биоразрушаемость [2].
ПГА биосовместимы преимущественно из-за гидроксимасляной кислоты, которая является составляющей клеточных мембран животных, а контролируемая и медленная деградация этих полимеров позволяет получать на их основе системы доставки лекарственных препаратов. Наиболее интересным является факт о возможности управления кинетикой высвобождения лекарственного препарата с помощью изменения химической структуры ПГА для достижения максимальной доставки лекарства.
В связи с этим цель данной работы - получение и исследование микрочастиц на основе П3ГБ и сополимера П3ГБ/ЗГВ с противоопухолевым препаратом 5-фторурацилом.
Для достижения цели были сформулированы следующие задачи:
1. Эмульсионным методом получить микрочастицы на основе П3ГБ и П3ГБ/3ГВ, нагруженных 5-фторурацилом;
2. Охарактеризовать свойства полученных микрочастиц (морфология частиц, средний диаметр, поверхностный заряд микрочастиц) в зависимости от мономерного состава ПГА;
3. Исследовать выход противоопухолевого препарата 5-фторурацила из микрочастиц на основе П3ГБ и П3ГБ/3ГВ in vitro;
4. Исследовать цитостатический эффект полимерных микрочастиц, содержащих 5-фторурацил в культуре клеток HELA в зависимости от нагрузки препарата.
1. Эмульсионным методом получены и исследованы микрочастицы на основе П3ГБ и П3ГБ/3ГВ с противоопухолевым препаратом 5- фторурацилом с нагрузкой 5 и 10% от массы полимера.
2. Доказано, что инкапсулированный лекарственный препарат и присутствие в составе молекул ПГА мономеров 3-гидроксивалерата влияет на размер частиц (от 69,64±3,12 до 76,33±4,23 мкм) и £- потенциал (от -12,2 Мв до -10,7 Мв)
3. Установлено, что на эффективность инкапсулирования (ЭИ) микрочастиц и выход 5-фторурацила влияет химический состав микрочастиц. Количество вышедшего препарата из микрочастиц П3ГБ составило 56±0,6 и 57±0,5% в зависимости от нагрузки ЛП 5 и 10% от массы полимера соответственно, и 67±0,7 и 68±0,2% из микрочастиц П3ГБ/3ГВ в зависимости от нагрузки ЛП 5 и 10% от массы полимера соответственно.
4. В культуре опухолевых клеток Hela по результатам МТТ-теста и
двойного окрашивания акридиновым оранжевым и бромидом этидия установлено, что полученные микрочастицы ПГА с 5-фторурацилом подавляют активность клеток, обладают выраженным
пролонгированным действием и могут быть использованы для систем контролируемой доставки лекарственных препаратов.
