ВВЕДЕНИЕ 3
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
1.1.1 Классификация растений медоносов 6
1.1.2 Происхождение, биологическое значение, сбор и хранение
цветочной пыльцы (обножки) 7
1.2 Применение цветочной пыльцы (обножки) как апитерапевтического
средства и в качестве биологически активной добавки к пище 9
1.3 Пептиды и их значение 13
1.4 Химический и биохимический состав растений пыльцы медоносов... 15
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 24
2.1 Материал исследований 24
2.2 Методы исследований 25
2.2.1.1 Гель-фильтрация 25
2.2.1.2 Подготовка колонки для гель-фильтрации 25
2.2.2 Метод проведения электрофореза белков и пептидов в 11ААГ... 26
2.2.3 Метод ионообменной хроматографии 28
2.2.4 Метод определения содержания белка в пробах 29
2.2.4.1 Определение содержания белка методов Лоури 29
2.2.4.2 Определение содержания белка методом Бредфорда 30
2.2.5 Метод разделения пептидов с помощью высокоэффективной
жидкостной хроматографии 31
2.2.6 Метод тангенциальной ультрафильтрации 32
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.. 34
3.1 Определение свободного и внутреннего объёмов колонки, калибровка колонки 34
3.2 Получение фракций низкомолекулярных пептидов методом гельфильтрации 38
3.3 Анализ белков при использовании электрофореза в ПААГ 39
3.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография пыльцы 51
ВЫВОДЫ 52
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 53
Актуальность исследования. В связи с изменениями условий окружающей среды и воздействием человека на нее, ухудшается здоровье человека, что является причиной высокого спроса на биологически активные добавки и препараты естественного происхождения [1]. С давних времен люди узнали о таких общественных насекомых как пчелы. Одним из первых природных лекарств, помимо растений, является мед, прополис, маточное молочко - продукты пчел. Но и не стоит забывать об источниках происхождения, таких как пыльца или, как еще называют, обножка. Пыльца представляет собой небольшие кристаллы пыльцевых зерен, которые представляют собой гаметофит мужского растения. Размер данного вещества достигает 0, 5 мм [31].
При изучении научно-популярной литературы, можно сделать вывод, что за последнее время вырос спрос на продукты пчеловодства в качестве биологически активных добавок (БАД) в лечебной терапии [7, 35]. Так, давно известно, что мед используют как противокашлевое средство, иммуностимулирующее, а также за последние годы возрос интерес к маточному молочку, которому отводится немало важнейших свойств: повышение гормонального фона, повышение лактации, противовирусное средство [3, 4, 29]. Все эти продукты пчелы заготавливают для своей семьи, тем самым наделяя их всеми необходимыми жизненно-важными веществами, так и с пыльцой. Если пыльца, является продуктом растений, который отвечает за репродуктивную функцию, следовательно, также будет иметь уникальный состав и ценнейшие составляющие для других живых организмов [6, 7].
Зная определенный состав и характеристики вещества, можно разработать целый ряд лекарственных средств, которые будут обладать менее токсичными действиями, нежели медикаменты синтетического происхождения [4].
Цветочная пыльца, имея уникальный химический состав, в нашей стране используется неоправданно мало, хотя стоит ей отводить гораздо больше внимания. Ведь технология получения данного продукта достаточно проста и невысокая стоимость, которые могут открыть широкие возможности для применения вещества не только в клинической терапии, но и в косметологии, диетологии [8, 9, 60]. Но помимо химического состава необходимо учитывать и другие характеристики, к примеру аминокислотный и белково-пептидный состав, по которым, к сожалению известно не так много данных. А для этого необходимо учитывать их ботаническое происхождение: с цветков какого вида растения собрана данная пыльца [6].
Растения-медоносы, так называют группу растений, с которых общественные насекомые: пчелы, собирают пыльцу и нектар, что является кормовой базой пчеловодства.
Пыльца - это скопление пыльцевых зерен, которые развиваются в мужских частях цветковых растений - пыльнике, выполняющие в свою очередь функцию опыления, т.е. оплодотворения яйцеклетки, находящейся в семязачатке. После того как пыльца попадает на мохнатые пчелиные лапки, складывается в «корзиночки» становится обножкой, то есть пыльцой, которую пчёлы собрали и обработали своими ферментами [2, 15].
В настоящее время люди используют в пищу многие биологически активные вещества, в состав которых, в том числе, входит и пыльца растений-медоносов. То количество информации о составе данного продукта, которое известно на сегодняшний день, не объясняет механизмов действия. Известны следующие специфические действия пыльцы на организм: антибиотическое, успокоительное, мочегонное, противоинфарктное, против бессонницы, тонизирующие [14, 15]. Но для того, чтобы объяснить
функциональную активность данного вещества, необходимо знать особенности аминокислотного и белково-пептидного состава пыльцы растений-медоносов....
1. Проведен сравнительный анализ белков и пептидов пыльцы методами гель-фильтрации, электрофореза в ПААГ и высокоэффективной жидкостной хроматографии.
2. Метод гель-фильтрации и электрофореза с последующей фрагментацией может служить одним из предварительных этапов подготовки фракций белков и пептидов для их дальнейшего разделения, например, методом ВЭЖХ.
3. Пыльца содержит большое количество пептидов, которые могут быть разделены на отдельные пептиды сочетанием биохимических методов.
4. Высокоэффективная жидкостная хроматография может служить методом идентификации ботанического происхождения мёда по обнаружению присутствия в нём пептидов пыльцы.
5. Мёд и пчелиная обножка содержат широкий спектр пептидов с различной молекулярной массой (от 300 до 5000Да).
6. Высокое содержание аминокислот, пептидов позволяет предположить, что значительная доля физиологических эффектов препаратов на основе этих пчелопродуктов объясняется действием кислот и пептидов.
