Список сокращений 3
ВВЕДЕНИЕ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Эпидемиология болезни Паркинсона 7
1.2 Методы диагностирования болезни Паркинсона 9
1.3 Генетический вклад в этиологию Болезни Паркинсона 12
1.4 Патогенез болезни Паркинсона в мозговых структурах 16
1.5 Молекулярно-генетические основы патогенеза 17
1.6 Исследования транскриптома при болезни Паркинсона 21
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 23
2.1 Характеристика анализируемых выборок 23
2.2 Выделение РНК из крови 23
2.3 Подбор праймеров и зондов для ПЦР в реальном времени с
использованием системы TaqMan 24
2.4 Реакция обратной транскрипции 25
2.5 Полимеразно-цепная реакции 26
2.7 Валидация подобранных TaqMan систем для полимеразной цепной
реакции в реальном времени 28
2.8 Статистический анализ данных 28
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 30
3.1 Отбор генов-кандидатов болезни Паркинсона 30
3.2 Подбор и проверка TaqMan систем для полимеразной цепной реакции в
реальном времени 30
3.3 Анализ изменения уровней мРНК генов-кандидатов в периферической
крови пациентов с болезнью Паркинсона, находящихся на ранних стадиях заболевания 41
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 50
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 52
БП на сегодняшний день является одним из самых распространённых заболеваний НС, патогенез которой связан с нарушением в разных нейромедиаторных системах, с преобладанием нарушений в дофаминергической системе. Все это приводит к появлению симптомам характерным для БП и к дезорганизации НС в целом.
До сих пор осуществляется поиск молекулярно-генетических факторов, вовлеченных в патогенез данной болезни. Так же до сих пор осуществляется поиск механизмов и факторов, вовлеченных в инициирование развития данной болезни. Наряду с механизмами нейродегенерации нейронов при данной болезни, так же изучаются компенсаторные механизмы, которые осуществляют различные системы клетки, все эти данные позволяют собрать более полную картину о молекулярных процессах, происходящих в нервной системе у пациента подверженным БП.
В результате обзора литературы были отобраны гены NRF1, DNM2, WFS1, GABBR, которые предположительно могут быть задействованы в патологических процессах, происходящих при БП. Данные гены участвуют в таких процессах как митохондриальный биогенез, экзо- и эндоцитоз, синаптическая передача сигнала. Таким образом, изменение экспрессии этих генов может влиять на развитие БП.
Для подтверждения возможной роли данных генов в БП был проведен анализ изменения их экспрессии в периферической крови пациентов с БП, находящихся на ранних стадиях данной патологии (1-2 стадия по шкале Хен и Яра). Для этого были подобраны и провалидированы системы праймеров и зонды TaqMan для генов-кандидатов.
Было показано статистически значимое и специфическое для БП снижение относительных уровней мРНК гена DNM2 почти в 3,5 раза у пациентов с БП, подвергавшихся лечению. Снижение экспрессии DNM2 может приводить к снижению интенсивности эндоцитоза, в том числе, в 50
мозге. Это, в свою очередь, ведет к тому, что дофамин дольше находится в синаптической щели и способствует более интенсивной передаче нервного импульса у пациентов с БП, подвергавшихся лечению.
Таким образом, полученные данные дополняют общую картину молекулярно-генетических изменений, которые происходят в организме пациента с БП.
БП на сегодняшний день является одним из самых распространённых заболеваний НС, патогенез которой связан с нарушением в разных нейромедиаторных системах, с преобладанием нарушений в дофаминергической системе. Все это приводит к появлению симптомам характерным для БП и к дезорганизации НС в целом.
До сих пор осуществляется поиск молекулярно-генетических факторов, вовлеченных в патогенез данной болезни. Так же до сих пор осуществляется поиск механизмов и факторов, вовлеченных в инициирование развития данной болезни. Наряду с механизмами нейродегенерации нейронов при данной болезни, так же изучаются компенсаторные механизмы, которые осуществляют различные системы клетки, все эти данные позволяют собрать более полную картину о молекулярных процессах, происходящих в нервной системе у пациента подверженным БП.
В результате обзора литературы были отобраны гены NRF1, DNM2, WFS1, GABBR, которые предположительно могут быть задействованы в патологических процессах, происходящих при БП. Данные гены участвуют в таких процессах как митохондриальный биогенез, экзо- и эндоцитоз, синаптическая передача сигнала. Таким образом, изменение экспрессии этих генов может влиять на развитие БП.
Для подтверждения возможной роли данных генов в БП был проведен анализ изменения их экспрессии в периферической крови пациентов с БП, находящихся на ранних стадиях данной патологии (1-2 стадия по шкале Хен и Яра). Для этого были подобраны и провалидированы системы праймеров и зонды TaqMan для генов-кандидатов.
Было показано статистически значимое и специфическое для БП снижение относительных уровней мРНК гена DNM2 почти в 3,5 раза у пациентов с БП, подвергавшихся лечению. Снижение экспрессии DNM2 может приводить к снижению интенсивности эндоцитоза, в том числе, в 50
мозге. Это, в свою очередь, ведет к тому, что дофамин дольше находится в синаптической щели и способствует более интенсивной передаче нервного импульса у пациентов с БП, подвергавшихся лечению.
Таким образом, полученные данные дополняют общую картину молекулярно-генетических изменений, которые происходят в организме пациента с БП.
