1. Введение 3
2. Обзор научной литературы «Колиформные бактерии как гигиенический показатель безопасности воды. Встречаемость энтеробактерии в микробиоте гидробионтовпри гигиеническом контроле водных объектов». 5
2.1 Общая характеристика водных объектов, подлежащих гигиеническому контролю. Структура гигиенического контроля водных объектов в РФ. 5
2.2 Методы выделения и оценки численности колиформных бактерий из водных образцов. 9
2.3 Проблемы гигиенического контроля воды океанариумов и обьектов аквакультуры по численности колиформных бактерий. 11
2.3.1 Встречаемость колиформных бактерий в воде открытых водоемов и в воде при искусственном содержании и разведении гидробионтов. 11
2.3.2 Колиформные бактерии в аквариумистике и в аквакультуре с непрерывной санацией и рециркуляцией воды. 16
2.3.3 Особенности изменения состава колиформных бактерий в условиях непрерывной санации в замкнутых водных системах. 18
3. Объекты и методы исследования. 21
3.1 Характеристика объектов исследования. 21
3.1.1 Характеристика аквариума №4 (рыбы). 21
3.1.2 Характеристика аквариума №1 (черепахи). 22
3.1.3 Характеристики аквариума №11 (выдры). 23
3.2 Определение численности и выделение колиформных бактерий,
очистка изолятов, создание коллекции штаммов, ее поддержание. 24
3.2.1 Определение ОМЧ. 24
3.2.2 Подготовка проб к анализу, процедура восстановления жизнеспособности. 24
3.2.3 Оценка численности общих, термотолерантных колиформ и E.coli. 25
3.2.4 Очистка изолятовколиформ и создание коллекции штаммов. 26
3.2.5 Иидентификация штаммов колиформных бактерий с помощью МИКРОЛАТЕСТ ENTEROtest 24 N(Чехия). 27
4. Результаты и их обсуждение. 30
4.1 Общее микробное число и содержание колиформных бактерий в воде аквариумов с различными гидробионтами. 30
4.2 Выделение колиформных бактерий и создание коллекции штаммов. 32
4.3 Идентификация колиформных бактерий, выделенных из аквариумов с разными гидробионтами. 33
4.3.1 Идентификация колиформных бактерий в воде аквариума № 4 (рыбы). 33
4.3.2 Идентификация колиформных бактерий в воде аквариума № 1 (черепахи). 34
4.3.3 Идентификация колиформных бактерий в воде аквариума № 11 (выдры). 34
4.3.4 Обсуждение результатов идентификации и заключение. 34
5. Выводы. 36
6. Список научной литературы. 37
7. Приложениe. 45
В настоящее время большое внимание уделяется гигиеническому состоянию аквакультуры, то есть искусственному разведению гидробионтов (с целью получения пищевого сырья) и содержанию гидробионтов в океанариумах и аквапарках в сфере шоу-бизнеса. Современные объекты аквакультуры конструируются с замкнутым оборотом воды, ее фильтрацией и санацией, например, озоном и УФ-излучением. Это приводит к формированию специфических микробиоценозов в санируемой воде.
В современной научной литературе имеется много данных о присутствии в подобных биоценозах патогенных и условно-патогенных бактерий, в первую очередь энтеробактерий, способных повлиять на здоровье объектов аквакультуры, обслуживающего персонала и посетителей. Поэтому предприятия аквакультуры являются объектами как ветеринарного, так и санитарного надзора.
До настоящего момента в отношении объектов аквакультуры в Российской Федерации не существовало специально разработанных критериев гигиенического состояния подобных объектов. При оценке безопасности воды используются гигиенические показатели и нормативы для воды поверхностных водоемов рекреационного типа(СанПин 2.1.5.980-00), в частности общие и термотолерантные колиформы и E.coli. Требования этого документа трудно выполнимы в условиях аквакультуры в условиях замкнутых систем с постоянным высоким уровнем фекального заражения. Необходимо разрабатывать более адекватные требования, учитывающие специфические особенности данных водных объектов.
В настоящий момент вода аквариумов СтПетербургского Океанариума оценивается лабораторией Роспотребнадзора по американскому стандарту Вирджинского аквариума – по показателю E.coli – не более 235 клеток в 100 мл воды.
Однако группой исследователей каф. Микробиологии СПбГУ было показано, что присутствие E.coli в санируемой аквариумной воде СтПетербургского Океанариума очень низкое, на пределе выявления (Цесулис, 2008; Аламмар, 2017). Безусловно, непрерывный режим санации (озонирование, ультрафиолетовое излучение, лечебные препараты для гидробионтов, вносимые в воду), влияют на качественный и количественный состав колиформных бактерий. Поэтому основными представителями колиформных бактерий являются не E.coli, аKlebsiella и Citrobacter(Аламмар, 2017).
Отсутствие E.coli в составе колиформ в аквариумной воде можно объяснить их более высокой чувствительностью к процедуре санации воды и появлению сублетальных и летальных повреждений, что приводит к их вытеснению из накопительных культур при выявлении по официальному методу анализа (МУК 4.2.1884-04). Можно предположить, что на состав колиформных бактерий аквариумной воды может влиять и тип гидробионтов (рыбы, моллюски, членистоногие, рептилии, теплокровные животные).
В 2017 г. Р.А. Вахрушевым (Вахрушев, 2018), сотрудником нашей группы, было показано, что подавляющее количество (до 99%) колиформных бактерий в воде СтПетербургского Океанариума имеют обратимые сублетальные повреждения. Оказалось, что жизнеспособность поврежденных бактерий можно восстановить проведением на первой стадии анализа процедуры восстановления.
Разработанная нашей группой процедура восстановления жизнеспособности колиформ позволяет вернуться к вопросу о присутствииE.coli в санируемой аквариумной воде. Этот вопрос является на сегодняшний день крайне актуальным в связи с настоятельной необходимостью выбора адекватных, корректных и, главное, обоснованных гигиенических показателей аквариумной воды СтПетербургского Океанариума.
В связи с вышеизложенным целью данной работы было изучение состава колиформных бактерий в воде аквариумов с различными гидробионтами СтПетербургского океанариума. Для этого были поставлены следующие задачи:
1.Выделить колиформных бактерий из воды аквариумов с рыбами, рептилиями и теплокровными животными с использованием стадии восстановления жизнеспособности бактерий; оценить содержание колиформных бактерий, очистить изоляты и сформировать коллекцию штаммов.
2. Провести идентификацию штаммов коллекции с использованием высоко эффективного набора для идентификации МИКРОЛАТЕСТ ENTEROtest 24N (Чехия).
3. Дать рекомендации для выбора микробиологических показателей для оценки гигиенического состояния аквариумной воды СтПетербургского Океанариума.
1. Качественный состав колиформных бактерий непрерывно санируемой воды изученных аквариумов с рыбами, черепахами и выдрами практически не различается. Представители родов Citrobacterи Klebsiella являются преобладающими.
2. Колиформные бактерии вида E.coli не характерны для аквариумов с замкнутой системой оборота воды и непрерывной санацией УФ независимо от типа содержащихся в них гидробионтов.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
