Сравнительное изучение стероидогенных эффектов хорионического гонадотропина человека и низкомолекулярного агониста рецептора лютеинизирующего гормона у самцов крыс

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10
1.1. Синдром гипогонадизма у мужчин 10
1.2. Гипоталамо-гипофизарно-тестикулярная ось 11
1.3. Регуляция синтеза тестостерона в семенниках с помощью рецептора
лютеинизирующего гормона 15
1.4. Стероидогенез в клетках Лейдига семенников 18
1.5. Нарушения стероидогенеза в клетках Лейдига при старении 20
1.6. Нарушение стероидогенеза в клетках Лейдига при сахарном диабете 21
1.7. Способы коррекции андрогенного дефицита у мужчин 22
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 27
2.1 Объект исследования. Экспериментальные модели 27
2.2 Дизайн экспериментов 27
2.2.1 Построение кривой зависимости уровня тестостерона в крови от времени введения препарата 30
2.4. Твердофазный иммуноферментный анализ 31
2.5. Выделение тотальной РНК и количественное измерение уровня РНК 32
2.6. Обратная транскрипция и количественная ПЦР в реальном времени .. 33
2.7. Гистологическое исследование семенников 36
2.8. Статистическая обработка результатов 36
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 37
3.1. Изучение дозозависимых влияний ТП04 и ХГЧ на уровень
тестостерона в крови у самцов крыс при однократном введении 37
3.2. Влияние однократного введения ХГЧ и ТП04 на уровень тестостерона
в крови контрольных, стареющих крыс и животных с экспериментальным СД1 37
3.3. Влияние пятидневного введения ХГЧ и ТП04 на уровень тестостерона в крови и тканях семенников контрольных, стареющих самцов крыс и животных с экспериментальным СД1 40
3.4. Влияние длительного введения ТП04 и ХГЧ на генную экспрессию в
семенниках крыс 44
3.5. Влияние лечения ТП04 и ХГЧ на морфометрические параметры
семенников 47
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 49
ВЫВОДЫ 50
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 52
ПРИЛОЖЕНИЯ 60
Купить

Продление репродуктивного возраста и поиск путей для решения проблемы бесплодия является важным направлением в эндокринологии и имеет серьезное социально-экономическое значение. Мужской фактор инфертильности выявляется в 20-60% случаев среди супружеских пар детородного возраста, страдающих бесплодием. При этом гипогонадизм является одной из основных причин инфертильности [1-3].
Несмотря на большое количество исследований, в клинической практике до сих пор не существует одновременно и эффективного, и безопасного способа лечения гипогонадизма у мужчин. Так, тестостерон- заместительная терапия (ТЗТ) имеет большой ряд противопоказаний и побочных эффектов и, что примечательно, обладает угнетающим действием на сперматогенез [4-6]. Другим распространенным фармакологическим подходом для коррекции андрогенной недостаточности у мужчин является использование препаратов гонадотропинов, таких как лютеинизирующий гормон (ЛГ) и его структурный и функциональный гомолог, хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) [7]. Однако их длительное применение сопряжено с развитием резистентности тестостерон-продуцирующих клеток Лейдига семенников к действию эндогенного ЛГ [8,9]. Активация рецептора ЛГ (ЛГР) с помощью гонадотропинов осуществляется путем связывания с ортостерическим сайтом, расположенным в крупном эктодомене рецептора [10], и приводит к стимуляции сразу нескольких внутриклеточных сигнальных каскадов. Наиболее важным для контроля синтеза половых стероидных гормонов является цАМФ-зависимый сигнальных каскад. Кроме того, реализуются фосфолипаза С-зависимые сигнальные пути, регулирующие процессы роста и дифференцировки, и активируются 0-аррестины, главным образом отвечающие за интернализацию и рециклизацию рецептора. Важно отметить, что именно низкая избирательность гонадотропинов в отношении активируемых внутриклеточных сигнальных каскадов вносит существенный вклад в развитие побочных реакций и обуславливает ослабление стероидогенного ответа при продолжительной терапии вследствие гиперактивации ЛГР. Помимо этого, сфера применения препаратов гонадотропинов существенно ограничена возможностью исключительно парентерального пути их введения [11-14].
Андрогенный дефицит и нарушения сперматогенеза у мужчин среднего и пожилого возраста и пациентов с сахарным диабетом (СД) связаны с дисфункцией гипоталамо-гипофизарно-гонадной оси и характеризуются нарушением стероидогенного ответа андроген-продуцирующих клеток половых желез на гонадотропины. Снижение чувствительности семенников к ЛГ при СД и старении может быть связано как с уменьшением количества функционально активных рецепторов ЛГ, так и с нарушением передачи сигналов ЛГ в клетках Лейдига в результате повышенного окислительного стресса, воспалительных и апоптотических процессов в клетках семенников [15-18].
Поскольку стимулирующее действие гонадотропинов на продукцию андрогенов при СД и старении оказывается сниженным, а альтернативные терапевтические варианты для коррекции гипогонадизма обладают широким спектром противопоказаний и весомыми недостатками, существует необходимость поиска новых подходов для коррекции андрогенной недостаточности у данных групп пациентов. Вследствие этого на протяжении последних лет ведется поиск и разработка новых лигандов ЛГР, которые могли бы стать альтернативой гонадотропинам.
Одними из аналогов ортостерических агонистов ЛГР являются низкомолекулярные лиганды данного рецептора, которые специфично связываются с аллостерическим сайтом, расположенным в трансмембранном канале, и, тем самым, активируют рецептор, не конкурируя с эндогенным ЛГ за место связывания [14-19]. Среди разработанных в настоящее время аллостерических агонистов ЛГР особый интерес представляют производные тиено[2,3-й]пиримидина....
Купить