Перечень условных обозначений…………………………………………...4
Введение
Актуальность………………………………………………………………..5
Цель и задачи исследования………………………………………………..6
Научная новизна работы…………………………………………………...7
Практическая значимость работы…………………………………………7
Глава 1. Литературный обзор
1.1. Этиология и патогенез воспалительных заболеваний пародонта…...8
1.2. Микробиота полости рта и воспалительные заболевания
пародонта……………………………………………………………….18
1.2.1. Нормальная микробиота полости рта……………………….…18
1.2.2. Микробиота пародонтального кармана при хроническом генерализованном пародонтите
1.2.3. Вирулентные свойства пародонтопатогенов…..………………22
1.3. Антибиотики в комплексном лечении заболеваний пародонта……32
1.4. Механизмы устойчивости к антибиотикам…………………………35
Глава 2.Материалы и методы исследования
2.1 Клиническая характеристика пациентов………....…………………39
2.2. Оценка стоматологического статуса пациентов…………………....39
2.3. Микробиологические и генетические методы исследования
2.3.1.Забор материала
2.3.2.Культуральные среды и условия роста……...…………………45
2.3.3.Выделение чистой культуры
2.3.4.Выделение тотальной ДНК из исходного биологического материала
2.3.5.Конструирование олигонуклеотидных праймеров…….…..….46
2.3.6.Полимеразная цепная реакция………………………………….47
2.3.7.Электрофорез и выделение ДНК из агарозного геля, определение концентрации ДНК
2.3.8.Определение антибиотикочувствительности…………….……49
Глава 3. Результаты исследований
3.1.Результаты клинических исследований………………………..……51
3.2.Результаты рентгенологического исследования……………………54
3.3.Результаты микробиологических исследований
3.3.1.Выделение факультативных анаэробов……………..…………54
3.3.2.ПЦР-скрининг на пародонтопатогены…………………………57
3.3.3.Идентификация выделенных чистых культур…………………59
Глава 4.Заключение и выводы
4.1.Заключение
4.2.Выводы
4.3.Практические рекомендации
Список литературы
Приложения
Воспалительные заболевания пародонта (ВЗП) относятся к наиболее распространенной стоматологической патологии.
В мире, согласно данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ, 1997), более 80% населения подвержено ВЗП, которые приводят к потере зубов, появлению в полости рта очагов хронической инфекции, снижению реактивности организма, микробной сенсибилизации, развитию аллергических состояний (Маланьин И.В., Емелина Г.В., Иванов П.В., 2010).
В связи с огромным количеством накопленной информации о роли разных видов микроорганизмов в развитии ВЗП, ВОЗ (1994 -1995)рекомендовала среди нормальной микробиоты полости рта с анаэробным типом дыхания выделять так называемые «пародоптопатогенные» виды, отличающиеся от других видов микроорганизмов высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами по отношению к тканям пародонта (Царев В.Н.с соавт., 1996;ЦаревВ.Н., 2004).
К «пародонтопатогенным» видам микроорганизмов относят:Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Prevotella intermedia, Treponema denticola, Fusobacterium nucleatum, Actinobacillus actinomycetemcomitans и др. (Елисеева А.Ф., 2014).
Следовательно, это определяет ряд задач, которые должны быть направлены на выявление и идентификацию пародонтопатогенов, и новые подходы к лечению ВЗП.
Несмотря на усовершенствование методов микробиологической диагностики - использование анаэробной техники культивирования, газовой хроматографии, иммунохимического анализа,проблема этиологической диагностики и лечения ВЗП остается одной из основных в стоматологии.
На сегодняшний день существует необходимость разрабатывать новые методы лечения с дифференцированным применением лекарственных средств, так как имеются трудности в подборе эффективного антибактериального препарата (Царев В.Н., Ушаков Р.В., 2006). Это связано с тем, что интенсивное и неконтролируемое применение химиопрепаратов привело к формированию и распространению множества штаммов микроорганизмов резистентных к антибактериальному лечению. Поэтому в настоящее время для осуществления и совершенствования комплексного персонализированного лечения ВЗП актуальным является определение чувствительности микробиоты пародонтальных карманов к антибиотикам.
Исследование микробиоты пародонтальных карманов позволяет диагностировать ВЗП, прогнозировать дальнейшее развитие заболевания, контролировать эффективность лечебных мероприятий и подбирать наиболее эффективную антибактериальную терапию.
Таким образом, оценка антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов с помощью микробиологических методов исследования позволит подобрать наиболее эффективные антибактериальные препараты для лечения ВЗП и составить рекомендации по их использованию.
Цель исследования:
Определение антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) легкой степени тяжести.
Задачи исследования:
1. Изучить количественный и качественный состав микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с ХГП легкой степени тяжести;
2. Провести анализ антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с ХГП легкой степени тяжести;
3. На основании клинико-микробиологических данных сформулировать рекомендации по применению антибактериальных препаратов у пациентов с ХГП легкой степени тяжести.
Научная новизна работы:
Проведена оценка антибиотикочувствительности выделенных чистых культур микробиоты пародонтальных карманов пациентов с ХГП легкой степени тяжести. С помощью масс-спектрометрии идентифицированы культуры - Streptococcusgordonii, Streptococcusanginosus, Streptococcussanguinis, Streptococcusoralis, Neisseria perflava, Rothia mucilaginosa. Проведено секвенирование и идентифицированы культуры - Rothia mucilaginosa, Streptococcus mitis, Streptococcus oralis. Проведен ПЦР – скрининг на пародонтопатогены и определеныPorphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia.
Практическая значимость работы:
Использование антибиотиков из группы бета-лактамов, макролидов и фторхинолонов, обладающих выраженной активностью в отношении наиболее часто встречающихся видов бактерий, вызывающих ВЗП, позволяет рекомендовать их в качестве эффективных средств комбинированного лечения ХГПлегкой степени тяжести.
Целью настоящего исследования являлась оценка антибиотикочувствительности микробиоты пародонтальных карманов у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) легкой степени тяжести.
В исследовании приняли участие7 пациентов в возрасте от 35 до 54 лет с ХГП легкой степени тяжести без тяжелой сопутствующей патологии. Были собраны жалобы пациентов и анамнез; проведены клинические (индексная оценка состояния тканей пародонта) и рентгенологические исследования; микробиологические и генетические исследования (культивирвание микроорганизмов, масс – спектрометрия, постановка ПЦР и секвенирование). В ходе исследования была изучена чувствительность идентифицированных чистых культур к антибиотикам разных групп (бета-лактамам, аминогликозидам, полипептидам, фторхинолонам, полимиксинам и макролидам).
Анализ результатов индексной оценки гигиены и состояния тканей пародонта показал, что все индексы соответствуют ХГП легкой степени тяжести и отражают тот факт, что развитие ХГПтесно связано с уровнем гигиены пациента, который у обследованных нами пациентов оказался неудовлетворительным. Наличие зубного налета и зубного камня несомненно является основополагающим фактором в развитии ВЗП. Воздействие пародонтопатогенов приводит к утрате пародонтального прикрепления и в последующем к образованию пародонтальных карманов, характеризующихся разрушением соединительного эпителия, который защищает пародонт от микробных метаболитов.
По результатам проведенного ПЦР – скрининга на пародонтопатогены у всех обследованных пациентов были выявленыPorphyromonas gingivalis и Tannerella forsythia, также у некоторых пациентов были выявленыActinobacillusactinomycetemcomitans и Prevotella intermedia.
С помощью масс-спектрометрии проводили идентификацию выделенных чистых культур. Были идентифицированы факультативные анаэробы: Streptococcusgordonii, Streptococcusanginosus, Streptococcussanguinis, Streptococcusoralis, Neisseriaperflava, Rothiamucilaginosa.
Был также произведен подсчет количества колониеобразующих единиц (КОЕ)факультативных анаэробов в исходном биологическом материале и составил104 – 105 КОЕ/мл. Можно предположить, что этой концентрации достаточно для возникновения и течения ХГП легкой степени тяжести.
При проведении секвенирования ДНК-фрагментов, кодирующих 16S рибосомальную РНК, были идентифицированы: Rothia mucilaginosa, StreptococcusmitisиStreptococcusoralis.
По полученным нами результатам антибиотикочувствительности можно сделать заключение, что все идентифицированные микроорганизмы чувствительны к Азитромицину (относительно новый препарат из группы макролидов на Российском рынке) и практически все микроорганизмы чувствительны к антибиотикам из группы бета-лактамов, кроме Streptococcussanguinis, Neisseriaperflavaи некоторых штаммов Rothiamucilaginosa.Также эти микроорганизмы устойчивы к препарату из группы фторхинолонов Ципрофлоксацину, к которому в свою очередь чувствительны остальные идентифицированные нами микроорганизмы. Наибольшую устойчивость микроорганизмы проявили к полимиксинам, аминогликозидам и полипептидам.
Эти данные согласуются с данными проведенных исследований по данной теме: «Анализ чувствительности микробных ассоциаций, выделенных у пациентов с пародонтитом, к антибиотикам» (Володина Е.В., Багдасарян В.А., 2014); «Дифференцированное применение антибиотиков в комплексном лечении хронического генерализованного пародонтита" (Галабуева А.И., 2005); "Эффективность комплексного лечения пародонтита с применением антибиотиков по результатам теста индивидуальной чувствительности микрофлоры" (Шарапудинова М.Г., 2009).
Все поставленные задачи исследования были выполнены и сделаны соответствующие выводы.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
