Тема: ЭКСПРЕССИЯ ПРОСТАГЛАНДИНА Е2 И СОСУДИСТЫХ ФАКТОРОВ В ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ ОРГАНАХ ЧЕЛОВЕКА В РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
Закажите новую по вашим требованиям
Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
📋 Содержание
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Тимус
1.2. Селезенка
1.3. Лимфатические узлы
1.4. Маркеры
1.4.1. CD34
1.4.2. Кисспептин и его рецептор
1.4.3. Простагландин E2иего рецептор
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Гистологические методы исследования
2.2.1.1. Иммуногистохимическое окрашивание
2.2.1.2. Окраска препаратов гематоксилином и эозином
2.2.2. Методы интерпритации полученных данных
2.2.2.1.Морфологический анализ
2.2.2.2.Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
3.1. Анализ экспрессии маркера кисспептин и его рецептора
3.1.1. Анализ изображений
3.1.2. Статистический анализ
3.2. Анализ экспрессии маркера CD34
3.2.1. Анализ изображений
3.2.2. Статистический анализ
3.3. Анализ экспрессии маркера простагландин Е2и его рецептора
3.3.1. Анализ изображений
3.3.2. Статистический анализ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
📖 Введение
У новорожденных иммунная система находится в процессе созревания и подготовки к новым условиям существования. При рождении человек подвергается воздействию окружающей среды и оказывается восприимчивыми к инфекциям. Согласно ежегодным оценкам, 40% из трех миллионов неонатальных смертей по всему миру происходят в результате инфецирования новорожденных. Материнские антитела, передаваемые ребенку через плаценту, способствуют его защите первые 6 месяцев жизни (Liu L, Johnson HL, 2012). На процесс формирования клеточного иммунитета новорожденных, который происходит в течение первых трех месяцев, влияет множество факторов (Hodgins DC, et al., 2012). За последние несколько десятилетий проведены обширные исследования развития иммунной защиты на первом этапе постнатального онтогенеза. Достижения в понимании механизмов неонатального иммунитета показывают, что как врожденные, так и адаптивные реакции зависят от количества предшественников лимфоцитов, дозы антигена и способу их воздействия (Basha Saleem, et al., 2014).
Тимус, селезенку и лимфатические узлы относят к органам кроветворения и иммунологической защиты, при этом вилочковую железу принято считать центральным, а остальные – периферическими иммунокомпетентными структурами организма. В железе образуются тимусзависимые лимфоциты, тогда как другие кроветворные органы заселяются клетками лимфоидного ряда, которые вскоре начинают активно размножаться и дифференцироваться. В связи со своей функцией, все органы иммунной системы обильно кровоснабжаются и несут в себе большое количество лимфатических и кровеносных сосудов (Simon A.K., et al., 2015).
Выбор маркеров для проведения исследования обусловлен их функцией – все маркеры, а именно CD34, KiSS1, KiSS1R, PrE2 и PrE2R являются сосудистыми факторами, оказывая влияние на состояние кровеносных сосудов, а также играют ту или иную роль в процессе развития исследуемых лимфоидных органов. Так, кисспептины и их рецепторы вовлечены в регуляцию сосудистого тонуса (Mead EJ, Maguire JJ, Kuc RE and Davenport AP, 2007), простагландины E2 и их рецепторы принимают участие в снижении артериального давления, обладая мощным сосудорасширяющим эффектом (Юдаев Н.А., 1976), а белок СD34 отвечает за большинство гемопоэтических реакций в красном костном мозге (Bhatia M, Wang JCY, et al., 1997).
В настоящее время благодаря методамфлуоресцентной и отражательной конфокальной микроскопии (КЛСМ) стало возможным получение изображений очень высокого качества даже в случае толстых срезов, нефиксированных и малоокрашенных образцов. По сравнению с традиционной микроскопией данный метод делает возможным регулирование глубины поля, что исключает ухудшения изображения фоновыми засветками, обеспечивая получение более контрастных изображений с большим разрешением. Метод широко применяется в патоморфологии и в сочетании с иммуногистохимическим окрашиванием позволяет охарактеризовать отдельную клеточную популяцию или исследовать локализацию множества различных белковых молекул на ограниченном материале (Дурнова А.О., Крылова Ю.С., 2014).
Исходя из недостаточной изученности маркеров CD34, KiSS1, KiSS1R, PrE2 и PrE2R, и их динамики в иммуннокомпетентных органах в раннем постнатальном онтогенезе, целью нашей работы явилась оценка уровня экспрессии PrE2 и сосудистых факторов в тимусе, селезенке и лимфатических узлах человека на ранних стадиях постнатального развития.
Исходя из цели были поставлены следующие задачи:
1. Верифицировать и оценить уровень экспрессии PrE2, его рецептора - PrE2R и сосудистых факторов в тимусе, селезенке и лимфатических узлах человека на ранних стадиях постнатального онтогенеза;
2. Определить корреляцию между уровнем экспрессии указанных факторов и возрастом детей;
3. Проанализировать топографию областей, экспрессирующих изученные маркеры в структуре исследуемых лимфоидных органов;
4. Оценить степень функционального созревания основных органов иммунной системы (тимуса, селезенки, лимфатических узлов) человека в период раннего
5. Определить уровень экспрессии комплекса KISS1/KISS1R в органах лимфоидного ряда.
✅ Заключение
Во всех изученных иммунокомпетентных органах детей раннего постнатального периода развития верифицирована экспрессия белка KiSS1. Гистологические срезы вилочковой железы ребенка в возрасте 4 дней показали относительную площадь экспрессии маркера в количестве 8%, тогда как дети8,5 и 9 месяцев демонстрировали значения равные 24% и 16%, соответственно. Реакция на антитела к маркеру KiSS1 в лимфоузлах всех членов выборки в пересчете на Sэкспрессии составила 5%, 36% и 10%, соответственно. При этом относительная площадь экспрессии в селезенке у ребенка в возрасте 4 дня составила 46%, тогда как у исследуемого в возрасте 8 месяцев 9 дней она равна 31%, а у девятимесячного исследуемого - 19%. Полученные значения отличаются от данных литературы, которые отражают низкий уровень экспрессии маркера в селезенке на ранних стадиях постнатального онтогенеза(Титов Л.П., Кирильчик Е.Ю., Канашкова Т.А., 2009).
Для рецептора маркера KiSS1 – KiSS1R в процессе исследования были показаны следующие результаты. Реакция на антитела к рецептору кисспептина в тимусе ребенка в возрасте 4 дней составила 31%, у среднего по возрасту члена выборки - 38%, а у девятимесячного пациента - 40%. В селезенке относительная площадь экспрессии KiSS1R для всех членов выборки оказалась равна 22%, 36% и 42%, соответственно. Для лимфатических узлов полученные показатели были равны нижеследующим значениям. У члена выборки в возрасте 4 дней Sэкспрессии составила 36%, у ребенка 8 месяцев 9 дней данный показатель оказался равен 31%, тогда как для самого старшего исследуемого этот показатель составил 36%. Исходя из полученных данных можно сделать вывод, что с возрастом реакция на антитела к KiSS1R в тимусе, селезенке и лимфатических узлах у человека в период раннего постнатального развития, возрастает. В литературе данные по этому вопросу отсутствуют.
Продемонстрирована и оценена реакция на антитела к маркеру PrE2Synthase и его рецептору - PrE2R в вилочковой железе, селезенке и лимфатических узлах всех членов выборки. Для тимуса ребенка 4 дней относительная площадь экспрессии маркера PrE2 составила 7%, для среднего по возрасту ребенка - 27%, а для девятимесячного члена выборки - 17%. В то же время показатели Sэкспрессии рецептора простагландина E2 демонстрировали следующие результаты: для вилочковой железы младшего из членов выборки данный показатель составил 21%, для ребенка 8 месяцев 9 дней – 44%, а для исследуемого в возрасте 9 месяцев - 29%. В гистологических срезах селезенки реакция на антитела к PrE2 для всех участников исследуемой группы составила 17%, 21% и 18% соответственно. Для маркера PrE2R данные значения в селезенке оказались равны соответственно 23%, 35% и 37%.
Показатель относительной площади экспрессии для лимфатических узлов ребенка 4 дней оказался равен 22%, тогда как старшие члены выборки продемонстрировали значения равные 29% и 19%, соответственно. Противоположная картина в лимфоузлах пациентов наблюдается при оценке распределения реакции на антитела к PrE2R, где для ребенка в возрасте 4 дня значение относительной площади экспрессии маркера оказалось равным 42%, для среднего по возрасту члена выборки – 14%, а для девятимесячного исследуемого 28%.
Учитывая полученные значения, можнопредположить, что экспрессия PrE2Synthaseв иммунокомпетентных органах человека на ранних стадиях постнатального развития закономерно повышает свой уровень к восьмому месяцу антенатальной жизни, после чего постепенно снижаются. Это данные установлены впервые.
Показана связь между уровнями экспрессии в иммунокомпетентных органах(тимусе, селезенке и лимфатических узлах)детей и их возрастом. Так, корреляция между относительной площадью экспрессии маркера CD34 признана отрицательной (-0,823) и согласно таблице силе связи (Таблица 2) является сильной обратной. Из чего можно сделать вывод, что чем старше ребенок, тем ниже экспрессия маркера CD34. Корреляция между исследуемыми показателями для маркера PrE2Synthaseтакже является отрицательной (-0,985), но по уровню оценивается как сильная обратная связь, тогда как для рецептора простагландина Е2 связь признана сильной и прямой (0,933), из чего следует, что по мере взросления, относительная площадь экспрессии PrE2R будет только увеличиваться. Продемонстрировано присутствие корреляции между показателями возраста пациентов и значением реакций на антитела маркера KiSS1 и его рецептора – KiSS1R. Исходя из полученных результатов связь между исследуемыми значениями для KiSS1 определяется как прямая (0,495) и по силе расценивается как слабая, тогда как для рецептора кисспептина положительная корреляция в соответствии с таблицей 2 учитывается, как очень слабая (0,342).
Продемонстрировано наличие корреляции между показателями «возраст членов выборки» и «значение относительной Sэкспрессии» для каждой группы иммунокомпетентных органов (лимфатических узлов, селезенки и тимуса). Учитывая полученные значения правомерно сделать вывод, что для лимфатических узлов существует положительная корреляция между возрастом пациентов и уровнем экспрессии маркеров KiSS1 (0,561) и PrE2Synthase(0,137), которая по мощности расценивается, как средняя и очень слабая, соответственно.
В то же время имеется связь между выбранными показателями для маркеров CD34 (-0,515), KiSS1R (-0,373) и PrE2R (-0,829) признана отрицательной, и по силе, согласно таблице значений величин коэффициента корреляции, определяется, как средняя, слабая и сильная, соответственно.
Исходя из полученных результатов для селезенки можно предположить существование положительной корреляции между значениями реакции на антитела к маркерам KiSS1, KiSS1R, PrE2Synthase и PrE2R и возрастом детей. Так, для маркера KiSS1 (0,307) сила связи определяется, как очень слабая, для его рецептора - KiSS1R (0,971) и маркера PrE2R (0,976) связь расценивается, как очень сильная, тогда как для PrE2Synthase(0,726) положительная корреляция трактуется, как сильная. В то же время связь между выбранными показателями для маркера СD34 является сильной обратной (-0,745), и корреляция считается отрицательной.
Данные, полученные при выполнении работы позволяют выявить в вилочковой железе детей положительную корреляцию между выбранными признаками – «возраст - Sэкспрессии» для маркеров KiSS1, KiSS1R, PrE2Synthase и PrE2R. Таким образом, коэффициент Пирсона для KiSS1 равен 0,837, а степень связи расценивается, как сильная, как и для маркеров PrE2Synthase (0,807) и PrE2R (0,705), тогда как для рецептора кисспептина - KiSS1R (0,984) прямая связь является очень сильной. Для CD34 наблюдается иная картина – корреляция между выбранными показателями для данного маркера отрицательна (-0,677), а связь трактуется, как средняя по силе обратная.
Топографически, область экспрессии маркеров CD34, KiSS1, KiSS1R, PrE2Synthaseи PrE2R в гистологических срезах лимфатических узлов, селезенки и тимуса детей в раннем постнатальном онтогенезе локализуется в кортексе и в области кортико-медуллярного перехода (для вилочковой железы), в красной и белой пульпах органа, а также в районе ПАЛВ и маргинальной зоны (для селезенки), капсуле и медулле (для лимфатических узлов).
Данные литературы по локализации экспрессии изученных маркеров, совпадают с полученными результатами, что свидетельствует о генетической детерменированности, а не о эктопическом механизме экспрессии CD34, KiSS1, KiSS1R, PrE2Synthase и PrE2R в иммунокомпетентных органах.



