Представленный материал является образцом учебного исследования, примером структуры и содержания учебного исследования по заявленной теме. Размещён исключительно в информационных и ознакомительных целях.
Workspay.ru оказывает информационные услуги по сбору, обработке и структурированию материалов в соответствии с требованиями заказчика.
Размещение материала не означает публикацию произведения впервые и не предполагает передачу исключительных авторских прав третьим лицам.
Материал не предназначен для дословной сдачи в образовательные организации и требует самостоятельной переработки с соблюдением законодательства Российской Федерации об авторском праве и принципов академической добросовестности.
Авторские права на исходные материалы принадлежат их законным правообладателям. В случае возникновения вопросов, связанных с размещённым материалом, просим направить обращение через форму обратной связи.
ℹ️Настоящий учебно-методический информационный материал размещён в ознакомительных и исследовательских целях и представляет собой пример учебного исследования. Не является готовым научным трудом и требует самостоятельной переработки.
Перечень условных обозначений……………………………………………………………….4
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Врождённый иммунитет……………………………………………………………..6
1.2 Система комплемента
1.2.1 История изучения системы комплемента………………………………....7
1.2.2 Пути активации комплемента и образование МАК……………………...8
1.2.3 Связь комплемента с приобретённым иммунитетом………………….…9
1.3 Компонент комплемента C3 и его производные
1.3.1 C3 как центральный компонент комплемента и естественная
регуляция системы комплемента на уровне C3……………………………….10
1.3.2 Производные белка C3……………………………………………………12
1.3.3 Биосинтез и структура белка C3…………………………………………14
1.3.4 Патологические состояния, связанные с белком C3……………………16
1.3.5 Терапевтический контроль активации комплемента на
уровне C3
1.4 Антимикробные пептиды
1.4.1 Антимикробные пептиды как факторы врождённого
иммунитета
1.4.2 Ареницины
1.4.3 Модуляция системы комплемента антимикробными пептидами……..21
Глава 2. Материалы и методы
2.1 Выделение белка C3
2.1.1 Общая схема выделения белка C3 и принципы методов………………23
2.1.2 Обработка сыворотки…………………………………………………….25
2.1.3 Ионообменная хроматография на колонке с ДЭАЭ-
целлюлозой
2.1.4 Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях в присутствии
додецилсульфата натрия (SDS)
2.1.5 Электроперенос белков и иммуноокрашивание…………………….…..27
2.1.6 Гель-фильтрация на колонке с Toyopearl………………………….….…28
2.1.7 Ионообменная хроматография на колонке QFF…………………….…..28
2.1.8 Диск-электрофорез в щелочной системе…………………………….…..28
2.1.9 Гель-фильтрация на колонке с P-300………………………………….…29
2.1.10Иммунизация
2.2 Изучение влияния ареницина-1 на активацию комплемента и
взаимодействия ареницина-1 с белком C3b
2.2.1 Получение эритроцитов кролика………………………………….……...30
2.2.2 Гемолитический тест……………………………………………….……..31
2.2.3 Иммуноферментный анализ……………………………………………...31
2.2.4 Поверхностный плазмонный резонанс…………………………….…….32
Глава 3. Результаты
3.1 Выделение белка C3
3.2 Влияние ареницина-1 на комплемент-зависимый гемолиз………………45
3.3 Влияние ареницина-1 на активацию системы комплемента
человека поальтернативному пути………...………………………….………46
3.4 Характеристика взаимодействия белка C3b с
ареницином-1 методом поверхностного плазмонного резонанса……...……47
Заключение
Выводы
Список литературы
📖 Введение
Врождённый иммунитет, древнейшая форма иммунитета у животных, включает несколько основных систем, двумя из которых являются антимикробные пептиды и система комплемента. Их длительная коэволюция и колокализация подразумевают взаимодействие отдельных компонентов этих систем. Изучение подобных взаимодействий имеет фундаментальное и прикладное значение, так как остро стоит вопрос о получении лекарственных средств, способных регулировать активность системы комплемента, при дисрегуляции которой развивается ряд тяжёлых заболеваний.
Ранее было показано, что некоторые антимикробные пептиды взаимодействуют с рецепторными молекулами комплемента C1q и MBL (Panyutich et al., 1994; Prohászka et al., 1997; Bhat et al., 2007; Groeneveld et al., 2007). В лаборатории общей патологии ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины» было впервые показано взаимодействие антимикробных пептидов протегрина-1 и ареницина-1 с белком комплемента C1q (белок C1q – компонент, запускающий классический путь комплемента) и способность некоторых антимикробных пептидов влиять на активацию системы комплемента. Предполагается, что это не единственные белки комплемента, с которыми возможно взаимодействие антимикробных пептидов человека и животных. В частности, было показано также взаимодействие ареницина-1 (антимикробного пептида морского пескожила Arenicolamarina) и α-дефенсинов человека с белком комплемента C3b (данные не опубликованы), что также может играть роль в активации каскада реакций.
Цель исследования: охарактеризовать взаимодействие белка комплемента C3 с ареницином-1 и изучить влияние ареницина-1 на активацию комплемента по альтернативному пути.
Задачи:
1. Получить препарат C3 из сыворотки крови здоровых людей для иммунизации кроликов и получения антител;
2. Оценить влияние ареницина-1 на активацию комплемента по альтернативному пути in vitro;
3. Методом поверхностного плазмонного резонанса оценить взаимодействие ареницина-1 с белком C3b.
Антитела необходимо получить для проведения в будущем аффинной хроматографии и иммуноблоттинга.
✅ Заключение
Мы впервые выявили способность антимикробного пептида ареницин-1 влиять на активацию системы комплемента по альтернативному пути. Модуляция оказалась зависящей от концентрации пептида: в относительно низких концентрациях ареницин-1 активирует комплемент, а в относительно высоких – ингибирует.
Методом поверхностного плазмонного резонанса удалось выявить, что ареницин-1 взаимодействует с белком C3b – производным центрального компонента C3, которое является привлекательной терапевтической мишенью для препаратов-модуляторов комплемента. Ареницин-1 связывается с C3b по двум типам сайтов: высокоафиинным и низкоафинным. Возможно, двойственный характер модуляции комплемента ареницином-1 связан с наличием двух этих сайтов связывания на молекуле C3b.
Полученные данные могут быть использованы при дальнейших исследованиях модуляции системы комплемента антимикробными пептидами и поиске терапевтических регуляторов комплемента.