Астроцитарные новообразования составляют более 50% от всех нейроэпителиальных опухолей [1]. Несмотря на современные успехи онкологии, показатели 5-летней продолжительности жизни пациентов с данным видом опухолей остаются по-прежнему невысокими: с диффузной астроцитомой (ДА) - 50,1%, с анапластической астроцитомой (АА) - 29,8%, а с первичной глиобластомой (ГБ) - всего 5,5% [2]. Это связано с высокой частотой рецидивирования данных опухолей и приобретением резистентности к проводимой терапии. Одна из возможных причин этого - внутриопухолевая гетерогенность, проявляющаяся на морфологическом и молекулярно-генетическом уровнях.
Морфологическая гетерогенность глиом привлекала внимание учёных ещё с первой половины XX века [3, 4]. В последние годы всё больше внимания обращено к проблеме молекулярно-генетической гетерогенности. В ряде исследований было показано наличие в одной опухоли генетически неоднородных клеточных субклонов [5-8].
Классификация опухолей ЦНС ВОЗ 2016 при постановке диагноза учитывает гистологическое строение новообразования и его молекулярногенетические характеристики [9]. Однако нет единого подхода к количеству опухолевых фрагментов, необходимых для определения данных характеристик. Недостаточное количество предоставленного материала для гистологического диагноза может привести к ошибочной постановке диагноза и, как следствие, неправильной тактике лечения.
Определение молекулярно-генетических характеристик опухоли и учёт их неоднородности также крайне важны, так как они позволяют предсказать ответ опухоли на стандартную химиотерапию и открывают новые возможности для назначения таргетных препаратов, обеспечивая персонализированный подход к пациенту.
Цель исследования:
Определить наличие морфологической и молекулярно-генетической гетерогенности в первичной глиобластоме, анапластической астроцитоме и диффузной астроцитоме.
Задачи исследования:
1. Выявить частоту встречаемости морфологической внутриопухолевой гетерогенности.
2. Изучить частоту встречаемости молекулярно-генетических маркеров MGMT, С-kit, TOP2a, PDGFR-a, ERCC1, VEGF и мутации в генах IDH1 и IDH2.
3. Определить оптимальное число фрагментов опухолевой ткани необходимых для морфологического исследования.
Было проведено проспективное и ретроспективное исследование 22 больных в возрасте 18 лет и старше с впервые диагностированной супратенториальной нейроэпителиальной опухолью. Всем пациентам было проведено хирургическое удаление опухоли с интраоперационным забором фрагментов опухолевой ткани из 5 равноудаленных точек. Выполнена гистологическая верификация материала с иммуногистохимическим исследованием (ИГХ). В части случаев была определена относительная экспрессия мРНК генов ERCC1, TOP2A, MGMT, VEGF, C-kit, PDGFR-альфа и наличие мутации в генах IDH1 (экзон 4) и IDH2 (экзон 4).
Внутриопухолевая морфологическая гетерогенность была изучена у 22 больных (110 парафиновых блоков) и присутствовала в 68,8% ГБ (11/16), в АА - в 80% (4/5) и в единственном случае ДА. В 50% случаев опухоль была гетерогенна в трех и более фрагментах из пяти, что существенно осложняет постановку правильного гистологического диагноза в случае малого количества материала, предоставленного морфологам для исследования.
Внутриопухолевая молекулярно-генетическая гетерогенность была изучена в 8 случаях (2 случая - АА и 6 - ГБ). Всего проанализировали 33 фрагмента опухолевой ткани (по 5 фрагментов из каждого опухолевого узла, из них в 7 не удалось выделить достаточное количество РНК для проведения анализа). Изменение уровней экспрессии шести генов (ERCC1, TOP2A, MGMT, VEGF, C-kit, PDGFR-a) изучено в 48 экспрессионных анализах. Уровни экспрессии мРНК генов PDGFR-a, VEGF, TOP2A, MGMT в разных фрагментах одной опухоли различались в 4 из 8 случаев (50%), в гене C-kit - в 3 из 8 (37,5%), в гене ERCC1 -1 из 8 (12,5%). Таким образом, уровни экспрессии мРНК всех изучаемых генов отличались в 41,7% (20/48) и оставались неизменёнными в 58,3% случаев (28/48). В большинстве случаев уровень экспрессии мРНК колебался в пределах уровня «низкий-средний» или «высокий-средний». И только в одном случае (№ 6) уровень экспрессии мРНК гена ERCC1 был в категории от низкого до высокого (табл. 2). На данный аспект теоретически мог повлиять процент опухолевых клеток в образцах, но мы постарались свести данный методологический недостаток к минимуму, забирая материал с содержанием опухолевых клеток более 85%.
Самой стабильной аберрацией являлась мутация в гене IDH1(R132H), которая или присутствовала, или отсутствовала во всех фрагментах опухоли. Возможно, это связано с тем, что мутации для гена IDH являются неслучайными событиями и появляются ещё на ранних этапах развития опухоли [21].
