Введение 5
Глава 1. Обзор литературы 6
1.1 Современные тенденции развития методов пробоподготовки 6
1.1.1 Капельная микроэкстракция 7
1.1.2 Мембранная жидкостная микроэкстракция 10
1.1.3 Дисперсионная жидкостная микроэкстракция 12
1.1.4 Гомогенная жидкостная микроэкстракция 13
1.2 Супрамолекулярные экстракционные системы 15
1.2.1 Применение супрамолекулярных экстракционных систем в анализе
биологических жидкостей 22
1.3 Биофармацевтический анализ 29
1.4 Сульфаниламиды и методы их определения 34
Заключение 43
Глава 2. Экспериментальная часть 44
2.1 Оборудование 44
2.2 Реактивы и материалы 45
2.3 Приготовление растворов 45
2.4 Отбор и подготовка проб биологических жидкостей 46
Глава 3. Обсуждение результатов 47
3.1 Теоретическое обоснование метода пробоподготовки 47
3.2 Схема определения сульфаниламидов в биологических жидкостях 49
3.3 Оптимизация параметров, влияющих на эффективность извлечения
сульфаниламидов 50
3.3.1 Выбор метода анализа 50
3.3.2 Выбор оптимальной подвижной фазы 51
3.3.3 Выбор оптимального экстрагента 52
3.3.4 Влияние объема экстрагента 54
3.3.5 Выбор агента коацервации 55
3.3.6 Выбор оптимального количества агента коацервации 55
3.3.7 Выбор оптимального объема раствора пробы 56
3.4 Исследование физических характеристик фаз 57
3.5 Определение состава фаз супрамолекулярной экстракционной системы 59
3.6 Аналитические характеристики разработанной схемы анализа 61
3.7 Анализ реальных объектов разработанным и референтным методом 63
Список достижений по итогам исследований 67
Выводы 69
Благодарности 70
Список литературы 71
Внедрение концепции персонализированной медицины в клиническую практику требует решения проблемы точного и надежного анализа биологических жидкостей и определения в них содержания лекарственных веществ, их метаболитов, биомаркеров, гормонов, высокомолекулярных соединений с целью выбора правильной схемы лечения конкретного пациента, минимизации побочных реакций и летальных исходов. Сложный химический состав биологических жидкостей делает их прямой инструментальный анализ невозможным и требует включения обязательной стадии пробоподготовки, направленной на устранение матричных эффектов и концентрирования целевых аналитов. Классические методы жидкостной и твердофазной экстракции усложнены использованием больших объемов токсических органических растворителей и трудоемкостью самих процедур извлечения аналитов. Наиболее перспективными представляются микроэкстракционные методы, проводимые с использованием экологически безопасных экстрагентов.
Целью данного исследования была разработка способа микроэкстракционного извлечения сульфаниламидов в in situгенерируемую мицеллярную фазу первичного амина для последующего определения аналитов в биологических жидкостях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ).
Для достижения поставленной цели требовалось решить следующие задачи: оценить возможность применения первичных аминов в качестве экстрагентов для извлечения антибиотиков сульфаниламидового ряда; выявить условия выделения мицеллярной фазы амина; оптимизировать условия проведения микроэкстракции; разработать схему анализа, апробировать ее на реальных образцах и проверить правильность полученных результатов референтным методом.
1. Обнаружена и исследована новая супрамолекулярная экстракционная система на основе первичных аминов с применением монотерпеновых веществ в качестве агентов коацервации;
2. Найдены оптимальные условия микроэкстракционного выделения сульфаниламидов в мицеллярную фазу, обогащенную первичным амином (тип и объем экстрагента, количество агента коацервации, объем раствора пробы), для достижения максимальной степени извлечения антибиотиков;
3. Разработан способ ВЭЖХ-УФ определения сульфаниламидов в биологических жидкостях человека. Предел обнаружения составил 20 мкг/л для сульфаметоксазола, сульфаметазина и сульфапиридина;
4. Разработанный способ апробирован на реальных пробах плазмы и сыворотки крови человека; правильность полученных результатов подтверждена референтным методом.
