ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 3
ОСНОВНЫЕ НАУЧНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ
ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ 6
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 8
Заключение 23
ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 25
Актуальность темы исследования и степень ее разработанности. Патологии печени занимают ведущее место в структуре гастроэнтерологической смертности. В экономически развитых странах заболевания печени входят в число шести основных причин смерти пациентов, составляя 15-20 случаев на 100 тыс. населения (Цуканов В. В. и др., 2019). Применение широкого спектра токсичных веществ в промышленных процессах, таких как производство красок, обезжиривание, обработка металлов, обслуживание и производство в авиационной и автомобильной промышленности, возможные' аварии на химический объектах, вероятность террористических актов с применением высокотоксичных соединений, рост числа бытовых интоксикаций определяют необходимость исследования регенераторных процессов печени при токсическом повреждении и поиск новых подходов для терапии заболеваний печени.
К числу самых известных высокотоксичных химических агентов, относится тетрахлорметан (CCli), который является гепатотропным ядом и потенциальным канцерогеном (IARC группа 2В). На сегодняшний день, несмотря на введенные ограничения по использованию CCl4, он применяется в промышленности как растворитель масел, жиров, каучука, битумов, смол, а также для производства менее разрушительных хладагентов (Лужников Е. А., Суходолова Г. Н. 2008, Забродский П. Ф. и др., 2009) и анализа водных сред на нефтепродукты. C’C’l.i способен сохраняться в тропосфере до 30-50 лет, а период его химического полураспада в воде при 25оС составляет 7000 лет (Malaguarnera G., 2012). Токсическое воздействие C’C’l.i, в зависимости от дозировки, способно приводить к различным повреждениям печени, включая некроз гепатоцитов, фиброз, цирроз печени и гепатокарциному (Junnila M. et al., 2000, Karakus E. et al., 2011). В связи с тем, что повреждение печени CCli приводит не только к деструкции гепатоцитов перивенозной 'зоны, но и носит диффузный характер, (Мяделец О. Д., Лебедева Е. И., 2018) вовлекая в процесс непаренхиматозные кле'точные элементы и внекле'точный матрикс, его можно считать лучшей репрезентативной экспериментальной моделью для изучения стромальнопаренхиматозных взаимодействий и их роли в регенерации.
При СС14-интоксикации сохранившиеся гепатоциты являются основным регенераторным потенциалом. Вместе с этим, регуляция деструктивных и пролиферативных процессов в поврежденной печени во многом зависит от функционального состояния непаренхиматозных клеток (Malik R. et al., 2002, Woolbright B. L., Jaeschke H., 2018). Роль данных клеток в регенерации печени изучена недостаточно, в литературе не представлены данные о их количественном изменении на ранних сроках токсического повреждения. Известно, что синусоидальные эндотелиальные клетки, лимфоциты, 'тучные клетки, макрофаги являются неотъемлемыми участниками воспалительной реакции (Weber Lutz W. D. et al., 2003), развивающейся в ответ на действие гепатотропного яда. Макрофагам печени, обладающим онтогенетической и функциональной гетерогенностью, принадлежит ключевая роль в поддержании гомеостаза и иммунологической толерантности органа в условиях физиологической нормы, а также в регуляции различных стадий патологического процесса при токсическом повреждении (Thomson A. W., Knolle P. A., 2013). Острое токсическое повреждение печени независимо от вида токсиканта всегда сопровождается макрофагальной инфильтрацией (Karlmark K. R. et al., 2009). Установлено, что на начальных этапах токсического повреждения печени преобладают М1-подобные макрофаги, обеспечивающие санацию очага воспаления, за счет фагоцитоза и привлечения нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов. Завершающие стадии воспалительного процесса сопровождаются переходом макрофагов к М2-подобному фенотипу, что способствует ангиогенезу и регенерации (Martinez F. O., Gordon S., 2020). Несмотря на противоположные функции подмножеств макрофагов печени в прогрессировании заболевания или его регрессии, они являются перспективной мишенью для новых терапевтических подходов в гепатологии. В качестве агента, изменяющего активность макрофагов, может быть выбрана натриевая соль 5-амино- 2,3-дигидрофталазин-1,4-диона (АФГ, аминофталгидразид натрия), идечпификационный номер в PubChem 9794222. АФГ изменяет функционально-метаболическую активность макрофагов, подавляя продукцию провоспалительных цитокинов (Abidov M. T. et al., 2013; Поздина В. А. и др., 2020).
Таким образом, определение количественного соотношения непаренхиматозных клеток в ткани печени, каких как макрофаги, лейкоциты, 'тучные и синусоидальные эндотелиальные клетки, а также оценка локального и системного уровня биологически активных медиаторов может иметь важное значение при разработке эффективных стратегий терапии токсических повреждений...
1. Особенности регенераторной стратегии гепатоцитов на ранних сроках после воздействия
гепатотропного яда проявляются в увеличении митотической активности паренхиматозных клеток и одновременном усилении внутриклеточных
восстановительных процессов.
2. Повреждение гепатоцитов при СС14-интоксикация выражается в увеличении индекса альтерации и числа TUNEL-позитивных гепатоцитов к 14 суткам эксперимента. Рост числа №Р70+-гепатоцитов на 3 сутки и №Р60+-гепатоцитов на 7 сутки при воздействии токсиканта можно рассматривать как адаптивную реакцию, направленную на снижение степени апоптоза.
3. Реакция клеточного компонента стромы при диффузном токсическом повреждении проявляется в увеличении количества CD3+, CD45+ и тучных клеток, которые на ранних стадиях способствуют развитию острой воспалительной реакции и последующему фиброгенезу, тогда как синусоидальные эндотелиальные клетки и макрофаги печени являются мишенью токсического воздействия СС14.
4. При диффузном токсическом повреждении в ткани печени иммунный ответ обусловлен увеличением концентрации IL-1a, IL-18, TNF-a, IL-10, тогда как в плазме крови отмечается повышенная продукция TNF-a; токсическое повреждение не оказывает влияния на локальную концентрацию SCF, но приводит к существенному увеличению данного ростового фактора на системном уровне, что может служить одним из стимулов для привлечения стволовых клеток к регенерирующей печени.
5. Применение метода коррекции, основанного на стимуляции активности макрофагов аминофталгидразидом натрия, способствует снижению лейкоцитарной инфильтрации, нивелирует воспалительные процессы в печени за счет влияния на секреторную активность иммунокомпетентных клеток, уменьшая концентрацию провоспалительных цитокинов TNF-a, IL-18 в плазме крови и IL-6, IFN-y в гомогенатах, что способствует снижению апоптоза, фиброза, тяжести холестаза и нормализации синтеза белка.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
При разработке новых методов лечения и профилактики диффузного токсического повреждения печени следует учитывать, что применение аминофталгидразида натрия является эффективным на ранних сроках интоксикации организма гепатотропными ядами.
Благодарности. Автор выражает искреннюю благодарность к.б.н., старшему научному сотруднику ИИФ УрО РАН Гетте И. Ф. за совместное проведение биохимических исследований, д.м.н., профессору УГМУ Сенцову В. Г. за помощь в дизайне модели токсического повреждения, д.м.н., профессору Абидову М. Т. за предоставление аминофталгидразида натрия, используемого при коррекции токсического повреждения печени. Особую благодарность автор выражает ведущему научному сотруднику ИИФ УрО РАН, к.м.н., доценту Медведевой С. Ю. за неоценимую помощь в моделировании диффузного токсического повреждения и описании патологических изменений печени.
Помощь студентам и аспирантам в выполнении работ от наших партнеров
