Актуальность темы исследования
Большинство лекарственных соединений существует в виде двух или нескольких пространственных изомеров - энантиомеров. Однако их фармакологическая активность обычно связана с действием лишь одного энантиомера. Поэтому в последнее время фармацевты уделяют значительное внимание созданию препаратов, содержащих один энантиомер, обладающий нужным терапевтическим эффектом. Следовательно, возникают вопросы определения и контроля оптической чистоты лекарственных препаратов на стадиях их производства и медико-биологического применения. Применяемые в этих целях спектральные методы, хроматографические методы и капиллярный электрофорез с использованием хиральных неподвижных фаз зачастую недостаточно экспрессны и относительно дороги для использования в рутинном анализе, особенно вне стационарных лабораторий. Тогда как энантиоселективные химические сенсоры и сенсорные системы могут применяться вне лабораторий после незначительной (или даже отсутствия) пробоподготовки. А измерения с помощью энантиоселективных химических сенсоров можно проводить как на стационарном лабораторном оборудовании, так и in situ. Вместе с тем, развитие сенсорных технологий, исследования и разработки в области химически модифицированных электродов и хемометрики позволяют рассматривать их как перспективное направление по созданию высокоэффективных аналитических методов для распознавания и определения оптически активных соединений. Все это обуславливает необходимость поиска новых решений в области конструирования и исследования возможностей энантиоселективных вольтамперометрических химических сенсоров и сенсорных систем.
Степень разработанности темы исследования
Применение электрохимических методов, позволяющих быстро и с высокой точностью определять оптически активные соединения, с использованием относительно недорогого оборудования, активно обсуждается в литературе. Применяют различные способы создания энантиселективных электрохимических сенсоров, в том числе модифицирование композитными материалами, содержащими хиральные селекторы, а также использование угольно-пастовых электродов.
С другой стороны, еще одним перспективным направлением является использование хемометрических методов обработки данных. Использование сенсорных систем, или так называемых «электронных языков», представляющих собой массив сенсоров с последующей хемометрической обработкой сигналов позволит разработать новые экспрессные, чувствительные и селективные методы распознавания оптически активных соединений.
Цель работы: исследование и разработка новых хиральных вольтамперометрических сенсоров и сенсорных систем для распознавания и определения энантиомеров пропранолола (Прп) и триптофана (Трп) и оценка их аналитических возможностей.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Разработка сенсоров на основе угольно-пастового электрода (УПЭ), модифицированного урацилом, и стеклоуглеродных электродов (СУЭ), модифицированных полиариленфталидными (ПАФ) композитами меламина, циануровой кислоты, а-, 0-, у-циклодекстринов (ЦД).
2. Изучение морфологии поверхности модифицированных электродов и электрохимических характеристик предложенных сенсоров.
3. Исследование вольтамперометрического поведения энантиомеров Прп и Трп на модифицированных электродах.
4. Распознавание и определение энантиомеров Прп и Трп с использованием сенсоров на основе УПЭ, модифицированного урацилом, и СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами меламина, циануровой кислоты, а-, 0-, у- ЦД.
Научная новизна
1. Методом молекулярно-динамического моделирования процессов взаимодействия энантиомеров Прп с урацилом показано, что 8-Прп образует с урацилом водородные связи через атомы кислорода и азота в то время как Я-Прп связывается с урацилом только через атом кислорода, что свидетельствует о том, что 8-энантиомер связывается с модифицированной урацилом поверхностью УПЭ прочнее, чем Я-энантиомер. Профили изменения свободной энергии при взаимодействии энантиомеров Прп с ПАФ-композитами меламина и циануровой кислоты также зависят от природы энантиомеров.
2. Установлена взаимосвязь между электрохимическими параметрами и характером процессов окисления энантиомеров Прп на СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами меламина и циануровой кислоты, и энантиомеров Трп на СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами а-ЦД, 0-ЦД, у-ЦД, оптимизированы условия формирования аналитических сигналов.
3. Методами вольтамперометрии показано, что лимитирующей стадией электрохимического окисления энантиомеров Прп и Трп на модифицированных электродах является диффузия электроактивного вещества к поверхности электрода. Установлена линейная зависимость величины пика тока окисления от концентрации энантиомеров Прп и Трп в растворе аналита.
4. Показано, что СУЭ, модифицированные ПАФ-композитами меламина и циануровой кислоты обладают перекрестной чувствительностью к энантиомерам Прп, а СУЭ, модифицированные ПАФ-композитами а-, 0-, у-ЦД, перекрестной чувствительностью к энантиомерам Трп и могут использоваться в сенсорных системах, применение которых повышает вероятность распознавания энантиомеров Прп и Трп по сравнению с единичными сенсорами.
5. Установлена возможность распознавания и определения энантиомеров Прп в модельных растворах и энантиомеров Трп в реальных образцах с использованием предложенных сенсоров.
Теоретическая и практическая значимость
Разработаны сенсоры на основе УПЭ, модифицированного урацилом и сенсорная система на основе СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами меламина и циануровой кислоты, для распознавания энантиомеров Прп, применяемого в кардиологической практике.
Предложена сенсорная система на основе СУЭ, модифицированных ПАФ- композитами а-, 0-, у-ЦД, для экспрессного распознавания энантиомеров Трп, содержащегося в лекарственных препаратах и пищевых добавках в виде Ь- энантиомера.
Положения, выносимые на защиту
1. Исследование и разработка сенсоров на основе угольно-пастового электрода, модифицированного супрамолекулярными структурами урацила, и стеклоуглеродных электродов, модифицированных ПАФ-композитами меламина, циануровой кислоты, а-, 0-, у-ЦД.
2. Результаты изучения морфологии поверхности и электрохимических характеристик предложенных сенсоров.
3. Результаты распознавания и определения энантиомеров Прп с помощью модифицированного урацилом УПЭ и модифицированных ПАФ-композитами меламина и циануровой кислоты СУЭ и сенсорной системы на их основе.
4. Результаты энантиоселективного распознавания и определения Трп с использованием модифицированных ПАФ-композитами а-, 0-, у-ЦД СУЭ и сенсорной системы на их основе.
Степень достоверности и апробация работы
Достоверность полученных данных определяется использованием в работе современных физико-химических методов исследования и высокотехнологичного оборудования, а также статистической обработкой полученных результатов.
Результаты исследований были представлены на всероссийской конференции с молодежной научной школой «ЭМА 2016» (Екатеринбург - Леневка, 2016), на международной конференции «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2016), на XX Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Екатеринбург, 2016), на IX Международной конференции «Фундаментальная математика и ее приложения в естествознании» (Уфа, 2016), на всероссийской конференции «Теоретические и экспериментальные исследования процессов синтеза, модификации и переработки полимеров» (Уфа, 2016) на симпозиуме по медицинской, органической и биологической химии и фармацевтике (Севастополь, 2017); на «International Conference on Electrochemical Sensors» (Матрафуред, Венгрия, 2017), на третьем съезде аналитиков России (Москва, 2017).
Публикации:
По материалам диссертации автором опубликовано 17 работ, в том числе 1 статья в рецензируемом журнале, входящем в базы цитирования Scopus и Web of Science, 3 статьи в российских рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК. Представленные публикации в основном отражают содержание диссертации.
Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии в проведении исследований и общей постановке задач, в разработке сенсоров, изучении их электрохимических характеристик, проведении анализа энантиомеров Прп и Трп и статистической и хемометрической обработке полученных результатов, а также в написании статей и докладов.
Структура и объем диссертации
Диссертация содержит введение, 3 главы, выводы и список цитируемой литературы, состоящий из 171 наименования. Работа изложена на 141 странице машинописного текста, включая 69 рисунков, 13 таблиц.
Методология и методы исследований
В основе диссертационной работы лежат электрохимические методы определения лекарственных препаратов. Вольтамперометрические измерения проводились с использованием потенциостата/гальваностата AUTOLAB PGSTAT 204 (Metrohm Autolab Ins., Утрехт, Нидерланды) с программным обеспечением Nova. Импедансметрические измерения осуществлялись с использованием импедансметра Элинс Z500 Pro (Москва, Россия). Импедансные спектры регистрировались в диапазоне частот от 50 кГц до 0.1 Гц с амплитудой сигнала 5 мВ. Все электрохимические измерения проводились с использованием трехэлектродной системы, в которой рабочими электродами служили УПЭ, состоящий из графитового порошка спектральной чистоты (ООО "НеваРеактив", г. Санкт-Петербург), и СУЭ диаметром 2 мм (SIGRADUR G, HTW GmbH, Германия). В качестве электрода сравнения использовали хлоридсеребряный электрод, вспомогательным электродом служила платиновая пластина. Измерения проводили при комнатной температуре (22 ± 0.5 °C).
Измерение кислотности растворов проводили с помощью pH-метра Seven Compact pH/Ion S220 (Mettler-Toledo AG, Швейцария). Морфологические характеристики ПАФ-композитов были изучены методом атомно-силовой микроскопии (АСМ) с помощью мультимикроскопа CMM-2000T производства Proton-MIET (Москва, Россия). Для гомогенизации угольной пасты использовали лабораторный гомогенизатор MPW-309 (Mechanika Precyzyjna, Польша).
Молекулярно-динамическое моделирование (МДМ) процессов взаимодействия энантиомеров Прп с урацилом, меламином и циануровой кислотой осуществляли с помощью программного пакета Gromacs c использованием силового поля GROMOS96 54a7. Топологию структур генерировали с использованием сервиса ATB.
Для хемометрической обработки экспериментальных данных использовали метод главных компонент (МГК) и проекцию на латентные структуры с дискриминантным анализом (ПЛС-ДА) с использованием надстройки Chemometrics Add-In для Microsoft Excel и The Unscrambler (CAMO, Норвегия).
Разработаны хиральные вольтамперометрические сенсоры и сенсорные системы на основе УПЭ, модифицированного урацилом, и СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами меламина, циануровой кислоты и а-, Р-, у- ЦД для определения энантиомеров Прп и Трп.
Методом АСМ изучена морфология поверхности предложенных сенсоров. Показано, что на поверхности СУЭ осаждаются ПАФ-композиты, имеющие включения модификаторов в виде кристаллитов в случае меламина и циануровой кислоты и наносферические зерна в случае а-, 0-, у-ЦД.
Установлены оптимальные условия электрохимического окисления Прп и Трп на предложенных сенсорах. Показано, что лимитирующей стадией электродного процесса является скорость диффузии Прп и Трп к поверхности электрода.
Показана возможность распознавания энантиомеров Прп с использованием хиральных вольтамперометрических сенсоров на основе УПЭ, модифицированного урацилом, и сенсорной системы на основе СУЭ, модифицированных ПАФ- композитами меламина и циануровой кислоты. При использовании вольтамперометрической сенсорной системы число правильно распознанных образцов достигает 100%.
Показано, что хиральные вольтамперометрические сенсоры на основе СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами а-, 0-, у-ЦД, позволяют определить энантиомеры Трп. Установлено, что наибольшую чувствительность и энантиоселективность имеет сенсор на основе 0-ЦД. Получены линейные зависимости аналитического сигнала от концентрации энантиомера Трп в растворе, предел обнаружения 4-7*10-6 М. Относительное стандартное отклонение не превышает 7.3%.
Установлено, что вольтамперометрическая сенсорная система на основе СУЭ, модифицированных ПАФ-композитами а-, 0-, у-ЦД, однозначно распознает В- и Ь- энантиомеры Трп. Использование сенсорной системы повышает процент правильно распознанных образцов на 40-59% по сравнению с регистрацией вольтамперограмм на одном модифицированном электроде. Данная сенсорная система позволяет распознать Ь-Трп в присутствии вспомогательных веществ в образцах лекарственных препаратов, а также распознать биологически активные добавки, содержащие Ь-Трп, различных производителей.
Перспективы дальнейшей разработки темы исследований заключаются в расширении круга лекарственных средств и биологически активных добавок. Кроме того, планируется проведение исследований по апробации предложенных сенсоров для определения энантиомеров Прп и Трп в биологических жидкостях (кровь, моча).
1. Сидельников, А.В. Энантиоселективный вольтамперометрический сенсор для распознавания стереоизомеров пропранолола / А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко, Р.А. Зильберг, Ю.А. Яркаева, Э.М. Хамитов // Журн. аналитической химии. - 2017. - V. 72. - № 5. - P. 575-581 (0,4375 п. л./0,0625 п. л.).
2. Zilberg, R.A. A voltammetric sensory system for recognition of propranolol enantiomers based on glassy carbon electrodes modified by polyarylenephthalide composites of melamine and cyanuric acid / R.A. Zilberg, A.V. Sidelnikov, V.N. Maistrenko, Yu.A. Yarkaeva, E.M. Khamitov, V.M. Kornilov, E.I. Maksutova // Electroanalysis. - 2018. - V. 30. - № 4. - P. 619-625 (0,4375 п. л./0,125 п. л.)
3. Зильберг, Р.А. Распознавание пропранолола по производителю с использованием стеклоуглеродных электродов, модифицированных композитами на основе полиариленфталидной пленки, меламина и циануровой кислоты / Р.А. Зильберг, Л.Р. Кабирова, Ю.А. Яркаева, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко, В.М. Корнилов, А.Н. Лачинов // Известия Уфимского научного центра РАН. - 2017. - №4.- С. 33-40 (0,4375 п. л. / 0,0625 п. л.).
4. Кабирова, Л.Р. Активационный подход к повышению энантиоселективности композитных электродов в условиях циклической вольтамперометрии / Л.Р. Кабирова, Ю.А. Яркаева, Ю.Р. Проворова, Р.А. Зильберг, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко // Вестник Башкирского университета. - 2018. - Т. 23. - №1. - С. 95-100 (0,375 п. л. / 0,0625 п. л.).
Материалы научных конференций:
1. Мурзина, К.А. Распознавание энантиомеров пропранолола с использованием хирального вольтамперометрического «электронного языка» / К.А. Мурзина, А.И. Хаблетдинова, Ю.А. Яркаева, Р.А. Зильберг, А.В. Сидельников // Сборник тезисов II Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Материалы и технологии XXI века». - Казань: КФУ, 2016. - С. 282 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
2. Яркаева, Ю.А. Идентификация 0-блокаторов с использованием вольтамперометрической мультисенсорной системы типа «электронный язык» / Ю.А. Яркаева, Р.А. Зильберг, А.И. Хаблетдинова, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко // XX Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. В 5 т. Т.4: тез. докл. - Екатеринбург, 2016. - С.228 (0,0625 п. л. / 0,0125 п. л.).
3. Проворова, Ю.Р. Идентификация энантиомеров лекарственных препаратов с использованием вольтамперометрической мультисенсорной системы / Ю.Р. Проворова, К.А. Мурзина, А.И. Хаблетдинова, Ю.А. Яркаева, Р.А. Зильберг, А.В. Сидельников // Тезисы докладов IX Международной школы-конференции для студентов, аспирантов и молодых учёных «Фундаментальная математика и ее приложения в естествознании». - Уфа: РИЦ БашГУ, 2016. - С. 250 (0,0625 п. л. / 0,0125 п. л.).
4. Дубровский, Д.И. Хиральный вольтамперометрический «электронный язык» для распознавания оптических изомеров пропранолола / Д.И. Дубровский, Ю.А. Яркаева, А.И. Хаблетдинова, Р.А. Зильберг, А.В. Сидельников // Тезисы докладов IX Международной школы-конференции для студентов, аспирантов и молодых учёных «Фундаментальная математика и ее приложения в естествознании». - Уфа: РИЦ БашГУ, 2016. - С. 240 (0,0625 п. л. / 0,0125 п. л.).
5. Яркаева, Ю.А. Определение энантиомеров пропранолола с использованием электрохимических сенсоров, модифицированных хиральными селекторами / Ю.А. Яркаева, К.А. Мурзина, Р.А. Зильберг, А.В Сидельников // Сборник тезисов IV Всероссийской научной конференции «Теоретические и экспериментальные исследования процессов синтеза, модификации и переработки полимеров». - Уфа: РИЦ БашГУ, 2016. - С. 199 (0,0625 п. л. / 0,0208 п. л.).
5. Мурзина, К.А. Использование вольтамперометрических мультисенсорной системы для распознавания энантиомеров лекарственных препаратов / К.А. Мурзина, Ю.Р. Проворова, А.И. Хаблетдинова, Ю.Г. Файзуллина, Ю.А. Яркаева, Р.А. Зильберг, А.В. Сидельников / Сборник тезисов IV Всероссийской научной конференции «Теоретические и экспериментальные исследования процессов синтеза, модификации и переработки полимеров». - Уфа: РИЦ БашГУ, 2016. - С. 55 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
6. Мурзина, К.А. Энантиоселективный вольтамперометрический «электронный язык» для анализа аминокислот / К.А. Мурзина, Ю.А. Яркаева, Ю.Р. Проворова, Р.А. Зильберг // Тезисы докладов XX Всероссийской конференции молодых ученых-химиков - Н. Новгород, 2017. - С. 331 (0,0625 п.л./0,0156 п.л.).
6. Яркаева, Ю.А. Энантиоселективное распознавание стереоизомеров пропранолола / Ю.А. Яркаева, Л.Р. Кабирова, Р.А. Зильберг, Д.И. Дубровский, А.В. Сидельников // Тезисы докладов XX Всероссийской конференции молодых ученых- химиков - Н. Новгород, 2017. - С. 356 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
7. Яркаева, Ю.А. Вольтамперометрический «электронный язык» на основе пленочных электродов для распознавания стереоизомеров пропранолола / Ю.А. Яркаева, Л.Р. Кабирова, Зильберг Р.А., Проворова Ю.Р., Сидельников А.В. // Тезисы докладов XX Всероссийской конференции молодых ученых-химиков (с международным участием) - Н. Новгород, 2017. - С. 357 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
8. Зильберг, Р.А. Вольтамперометрический «электронный язык» для распознавания энантиомеров пропранолола / Р.А. Зильберг, Ю.А. Яркаева, К.А. Мурзина, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко // Сборник тезисов докладов Третьего Междисциплинарного Симпозиума по Медицинской, Органической и Биологической Химии и Фармацевтике 2017 / под редакцией К.В. Кудрявцева и Е.М. Паниной. - Севастополь, 2017. - С. 21 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
9. Зильберг, Р.А. Вольтамперометрический энантиоселективный сенсор для определения триптофана / Р.А. Зильберг, Ю.А. Яркаева, К.А. Мурзина, А.И. Хаблетдинова, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко // Сборник тезисов докладов Третьего Междисциплинарного Симпозиума по Медицинской, Органической и Биологической Химии и Фармацевтике 2017 / под редакцией К.В. Кудрявцева и Е.М. Паниной. - М Севастополь, 2017. - С. 128 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
10. Zilberg, R.A. Voltammetric sensor for recognition enantiomers of propranolol based on glassy carbon electrodes modified with polyarylenephthalide composite / R.A. Zilberg, A.V. Sidelnikov, Yu.A. Yarkaeva, V.N. Maistrenko // International Conference on Electrochemical Sensors. - Matrafüred, 2017. - P. 160 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).
11. Яркаева, Ю.А. Вольтамперометрический сенсор на основе полиариленфталидных композитов с циклодекстринами для определения энантиомеров триптофана / Ю.А. Яркаева, Р.А. Зильберг, К.А. Мурзина, А.В. Сидельников, В.Н. Майстренко // Тезисы докладов Третьего съезда аналитиков России. - Москва, 2017. - С. 239 (0,0625 п. л. / 0,0156 п. л.).