РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ ОРГАНИЧЕСКИХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ СУБСТАНЦИЯХ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ РЯДА АЗОЛОАЗИНОВ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ И СОКРАЩЕНИЙ 6
ВВЕДЕНИЕ 7
1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 8
1.1 Методы анализа остаточных органических растворителей 8
1.2 Характеристика ГЖХ как метода анализа 9
1.2.1 Хроматографические параметры 14
1.2.2 Аппаратурное оформление ГЖХ 16
1.3 Объекты исследования 22
2 АППАРАТУРА И ТЕХНИКА ЭКСПЕРИМЕНТА 25
2.1 Используемые реактивы, посуда и аппаратура 25
2.2 Разработка методики хроматографического анализа 25
2.2.1 Выбор методики анализа и начальных условий его проведения 26
2.2.2 Подбор концентрации растворов образцов 27
2.2.3 Подбор условий проведения анализа 28
2.2.4 Определение диапазона количественного определения 33
2.2.5 Установление матричного влияния на высвобождение ОР 34
2.2.6 Определение параметров хроматографического разделения 35
2.3 Методика определения ООР 37
2.3.1 Условия проведения анализа 37
2.3.2 Приготовление растворов 37
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 41
3.1 Градуировочная кривая 41
3.1.1 Результаты построения градуировочной кривой 41
3.1.2 Расчет параметров линейной зависимости 42
3.2 Определение показателей качества методики 45
3.2.1 Специфичность 45
3.2.2 Предел количественного определения 45
3.2.3 Линейность методики 48
3.2.4 Сходимость (повторяемость) методики 48
3.2.5 Воспроизводимость методики 49
3.2.6 Правильность методики 50
3.2.7 Критерии приемлемости полученных результатов 52
3.3 Количественное определение ООР в исследуемых субстанциях 53
3.3.1 Количественное определение ООР в субстанции МНК-857 54
3.3.2 Количественное определение ООР в субстанции АВ-19 55
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 57
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 58
ПРИЛОЖЕНИЯ 62
ПРИЛОЖЕНИЕ А 62
ПРИЛОЖЕНИЕ Б 64
ПРИЛОЖЕНИЕ В
Лекарственные средства (ЛС) в настоящее время являются частью жизни почти каждого человека. Востребованность данного типа товаров можно увидеть в объёмах коммерческого рынка ЛС в России, который лишь в марте 2020 года составил 127,3 млрд. рублей [1]. В то же время одной из важных задач фармации остается поиск и исследование соединений, проявляющих ту или иную активность.
Одним из активных направлений исследований является изучение соединений класса азолоазинов. Их особенностью можно считать структурное сходство с биогенными пуринами, в результате чего отмечается широкий спектр биологической активности, в том числе противовирусные [2, 3], антидиабетические [4-7] свойства. Объектами исследования данной работы являются соединения натрия 3,8-диэтоксикарбонил-4-оксо-4Н-пиразоло[5,1- с][1,2,4]триазинид моногидрат (АВ-19) и натрия 7-метилтио-4-оксо-3-циано-4Н-[1,2,4] триазоло[5,1-с][1,2,4] триазинида тригидрат (МКИ-857), которые проходят цикл доклинических исследований как средства для лечения диабета и его осложнений [7].
Процессы разработки новых препаратов включают множество этапов, в том числе установление показателей качества получаемого продукта. Качеством ЛС называют его соответствие установленным требованиям, которые указываются в фармакопейной статье или других нормативных документах [8]. В связи с токсичностью некоторых органических растворителей, которые образуются в процессе производства или используются при получении или очистке фармацевтических субстанций, вспомогательных веществ или лекарственных препаратов предусматривается их контроль на остаточные органические растворители [9].
Исходя из необходимости установления качества синтезируемых субстанций по данному показателю, целью работы является разработка методики количественного определения остаточных органических растворителей (ООР) в субстанциях биологически активных азолоазинов, используя метод газожидкостной хроматографии с парофазным вводом образца.
Осуществление поставленной цели предусматривало решение следующих задач:
• Провести анализ литературных источников с целью получения информации о классах ОР, методах и условиях проведения количественного анализа ООР;
• Выбрать условия проведения количественного анализа;
• Определить показатели качества разработанной методики;
• Провести анализ субстанций АВ-19 и МЫИ-857 разных партий синтеза.
В рамках данной работы был составлен аналитический обзор литературы, рассматривающий газожидкостную хроматографию с парофазным вводом как метод количественного анализа остаточных органических растворителей. На основе полученной информации были определены начальные условия проведения хроматографического анализа. На практике предложенная методика была скорректирована путем подбора приемлемой скорости потока газа-носителя, изменения массы навески (0,1 г), степени разведения образца (растворение в виале в 5 см3 воды), времени выдерживания виалы при температуре 85 ОС (20 мин). Также было подтверждено отсутствие матричного влияния на результат анализа.
Для возможности дальнейшего применения разработанной методики были проведены испытания на ее пригодность по таким показателям как специфичность, линейность, предел количественного определения, сходимость, промежуточная прецезионность и правильность. Полученные результаты удовлетворяли принятым критериям (табл.3.8). В результате чего, было подтверждено получение достоверных и надежных результатов при использовании разработанной методики количественного определения этанола и пропан-2-ола.
Используя разработанную методику количественного определения этанола и пропан- 2-ола, были проведены испытания образцов исследуемых субстанций разных партий синтеза. Количественное определение проводилось по градуировочным кривым этанола и пропан-2- ола.
Результаты исследований 5 образцов субстанции "11<-857 показали наличие лишь пропан-2-ола, количественное содержание которого во всех образцах удовлетворяло установленным требованиям (не более 0,5 %).
В результате испытания образцов субстанции АВ-19 из трех партий синтеза было обнаружено, что образцы 1 и 2 содержат остаточный растворитель - этанол. Образец 3 содержал как этанол, так и пропан-2-ол. Полученные суммарные (для образца 3) значения содержания ООР также удовлетворяли установленным требованиям.
Таким образом, было выявлено соответствие всех исследуемых образцов субстанций МКВ-857 и АВ-19 требованиям ОФС.1.1.0008.15 по показателю остаточные органические растворители.
