1 Литературный обзор 9
1.1 Активные формы кислорода 9
1.1.1 Функции АФК 14
1.2 Антиоксиданты 16
1.2.1 Неферментативные АО 19
1.2.2 Ферментные АО 21
1.2.3 Использование АО в промышленности 23
1.3 Методы исследование антирадикальной активности 26
1.3.1 Спектрометрические методы 26
1.3.2 Электрохимические методы 29
1.3.3 Биосенсорные методы 33
1.3.4 Хроматографические методы 34
1.3.5 Метод ЭПР-спектроскопии 36
1.4 Постановка задачи 40
2 Приборы и материалы 41
2.1 Аппаратура 41
2.2 Реактивы 41
2.3 Объекты исследования 41
3 Методы и методики 43
3.1 ЭПР-спектроскопия 43
3.2 Т ехника эксперимента 45
4 Результаты и обсуждение 47
4.1 Исследование зависимости истиной и найденной СдФПг 47
4.2 Исследование стабильности радикала 48
4.3 Исследование модельных АО 50
4.4 Исследование фенольных соединений 53
4.5 Исследование модифицированных 9-окса-1,2,4-триазафлуоренов
58
4.6 Исследование модельных смесей 60
4.7 Исследование экстрактов чая 62
5 Заключение 65
6 Список используемых источников 66
Актуальность
Вещества, обладающие антирадикальной активностью (АРА) играют ведущую роль в системе защиты организма от свободных радикалов. Общие недостатки известных способов оценки АРА выражаются в том, что измерения проводятся непрямыми методами, что затрудняет количественно оценивать содержание веществ с антирадикальными свойствами. Результаты измерений представляются в относительных единицах, в качестве эталонных веществ чаще всего используются: тролокс, галловая и аскорбиновая кислоты, проявляющие разную АРА, что не позволяет сравнивать результаты между собой. Решение данных проблем возможно при использовании метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР).
ЭПР-спектроскопия широко применяется для детектирования парамагнитных веществ, включая оценку АРА, что позволяет исследовать кинетику и стехиометрию реакции между радикалами и веществами с АРА. Одним из методов оценки АРА является измерение степени ингибирования стабильного свободного радикала - 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил (ДФПГ) при взаимодействии с веществами, обладающими АРА.
Цель работы
Исследование безэталонным методом антирадикальной активности природных и синтетических антиоксидантов методом ЭПР-спектроскопии на модели 2,2-дифенил-1 -пикрилгидразил.
Основные задачи:
• отработка методики определения антирадикальной активности на модели ДФПГ методом ЭПР-спектроскопии;
• получение и анализ значений антирадикальной активности для ряда веществ с антирадикальными свойствами;
- сравнение результатов с данными полученными независимым методом определения антиоксидантной активности.
Научная новизна работы
• проведено исследование - новым, безэталонным методом оценки антирадикальной активности, ряда природных и синтетических антиоксидантов;
Практическая ценность
• установлены оптимальные условия для проведения анализа
• установлены значения антирадикальной активности ряда природных и синтетических антиоксидантов;
• рассмотрены различные варианты механизмов ингибирования свободных радикалов и их зависимость от структуры антиоксиданта.
В ходе работы был разработан метод оценки антирадикальной активности веществ.
Получены значения АРА для ряда модельных АО, фенольных АО, модифицированных триазинов, модельных смесей, экстрактов различных сортов чая.
Подана заявка на изобретение № 2015157391 “Способ определения антиоксидантной активности с использованием метода электроннопарамагнитной резонансной спектроскопии” Дата приоритета: 31.12.2015. Авторы: Иванова А.В., Петров А.С., Вежливцев Е.А., Матерн А.И.
Предложенный метод обладает следующими преимуществами:
• Возможность напрямую измерять количество СР;
• Получение результата в моль эквивалентах;
• Возможность исследования образцов со сложной матрицей;
• Высокая чувствительность;
• Экспрессность;
• Возможность наблюдать кинетику реакции.
